專利名稱：羌活組織培養(yǎng)繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物的培養(yǎng)和繁殖，特別是一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法。
背景技術(shù)：
羌活是傘形科(Umbelliferae)多年生野生藥材，是我國的特有植物物種，是中藏羌藥中最常用的藥材之一。羌活以根狀莖及根入藥，味辛、性溫，有散表寒、祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)等功效，主治感冒風(fēng)濕、發(fā)熱頭痛、皮膚騷癢、風(fēng)水浮腫、癰疽瘡毒等癥。我國歷版藥典對羌活均有收載，據(jù)《中華人民共和國藥典》2005年版一部，為傘形科(Umbelliferae)多年生草本植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang和寬葉羌活N.forbesiiBoissieu的干燥根莖及根，開發(fā)歷史悠久，藥材商品有蠶羌、竹節(jié)羌、頭羌、條羌及羌王。四川是羌活的道地產(chǎn)區(qū)，川產(chǎn)羌活以N.incisum為主，銷全國并出口，主產(chǎn)甘孜、阿壩、涼山三州等地2700米以上高海拔山區(qū)。
長期以來，由于其來源完全依賴野生采挖，種質(zhì)資源破壞嚴(yán)重、蘊藏量急劇減少，尤其是近年來隨著國內(nèi)外對羌活需求量的增加，供需矛盾日益突出，加之利益驅(qū)使，大量掠奪性采挖，使羌活逐漸成為瀕臨植物，面臨物種喪失，資源枯竭的危險，進(jìn)行種質(zhì)保護(hù)和擴大羌活繁育勢在必行。
植物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用細(xì)胞的全能性(個體的某個器官或組織已經(jīng)分化的細(xì)胞再生成完整個體的遺傳潛力。)，取植物個體上的細(xì)胞團(tuán)或組織，通過人工配制的培養(yǎng)基，使這些細(xì)胞團(tuán)或組織形成成千上萬個植株。利用組培進(jìn)行離體快繁在以下三方面有重要意義(1)繁殖速度快，不受氣候因素影響，一年四季在室內(nèi)均可繁殖；(2)便于保持優(yōu)良種性；(3)在保存和繁育優(yōu)良突變體或優(yōu)良雜種一代方面有非常重要的意義，一株具有明顯優(yōu)勢的羌活突變體或一個具明顯優(yōu)勢的后代經(jīng)組織培養(yǎng)后可大面積推廣。
其他高山野生藥材，如紅景天等的組織培養(yǎng)已有文獻(xiàn)報道，但野生羌活組織培養(yǎng)尚未見報道。從野外采集的外植體，其表面易滋生細(xì)菌和真菌等微生物，有的甚至長到組織內(nèi)部(內(nèi)生菌)；加之，羌活所含醌類、酚類物質(zhì)較多，很易氧化變褐，因此對外植體材料的選擇和消毒方法都非常關(guān)鍵。本發(fā)明首次采用組織培養(yǎng)方法，開展野生羌活種質(zhì)離體繁殖工作，這為挽救瀕危羌活材料，開展野生羌活遺傳改良、促進(jìn)羌活的工廠化育苗提供了一條新途徑。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種通過組織培養(yǎng)進(jìn)行羌活種質(zhì)保存和快速繁苗方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于以羌活萌發(fā)的根芽為外植體，經(jīng)消毒處理、接種誘導(dǎo)形成愈傷組織后，再經(jīng)愈傷組織增殖、誘芽培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，長成完整的植株小苗，將完整小苗移栽到育苗基質(zhì)中，長成正常羌活植株。
所述的羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下列步驟A、外植體的選擇和消毒處理以羌活萌發(fā)的根芽為外植體，以流水沖洗3～5分鐘，再用濃度為75％的酒精浸泡滅菌45～60秒，以無菌去離子水沖洗2～3次，再將沖洗后的外植體置于濃度為0.1％～0.2％的升汞中，浸泡滅菌10～14分鐘，無菌去離子水沖洗2～3次，備用；B、外植體接種將經(jīng)過步驟A中備用的外植體切成0.1～0.3cm3的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)時間為30～35天，在根芽切口處膨大形成愈傷組織；C、愈傷組織增殖將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，愈傷組織增殖25～35天，長出黃色、致密的愈傷組織；D、愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟C中得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，培養(yǎng)35～45天，出現(xiàn)叢生羌活苗；E、生根培養(yǎng)將步驟D中得到的叢生羌活苗分株，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20～30天，小苗基部出現(xiàn)白色短根并長出完整根系；F、植株移栽移栽前，對含蛭石、泥炭的育苗基質(zhì)消毒，將步驟E中得到的完整小苗直接移栽到育苗基質(zhì)，無需煉苗可直接成活，長成正常羌活植株。
所述的外植體消毒處理采用75％酒精浸泡滅菌45～60秒和0.1％～0.2％升汞浸泡滅菌10～14分鐘的雙重兩次消毒方法。
所述的致密的愈傷組織是指非顆粒狀散在的愈傷組織。
所述的羌活的基源植物為傘形科多年生草本植物羌活Notopterygiumincisum Ting ex H.T.Chang和寬葉羌活N.forbesii Boissieu。
所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS、KT 0.1～2.5mg/L、2，4-D 0.5～1.5mg/L、NAA 0.2～0.6mg/L，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog1962，KT為6-糠基腺嘌呤(激動素)，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸，NAA為萘乙酸。
所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS、KT 0.5～2.5mg/L、2，4-D 0.5～1.0mg/L，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸。
所述的誘芽培養(yǎng)基為MS、6-BA 1.5～4.5mg/L、NAA 0.2～0.5mg/L，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962，6-BA為6-芐基腺嘌呤，NAA為萘乙酸。
所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS、NAA 0.01～0.05mg/L、2～3％的蔗糖、0.8％的瓊脂，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962，將該常規(guī)基本培養(yǎng)基中的大量元素濃度減半得到1/2MS，NAA為萘乙酸。
所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、愈傷組織增殖培養(yǎng)基和誘芽培養(yǎng)基中均加入0.7～1.0％的瓊脂、3％蔗糖和0.1～0.5％活性炭。
所述的MS培養(yǎng)基的成分按常規(guī)為硝酸銨(NH4NO3)1650mg/L，硝酸鉀(KNO3)900mg/L，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)370mg/L，磷酸二氫鉀(KH2PO4)170mg/L，氯化鈣(CaCl2·2H2O)440mg/L，硫酸錳(MnSO4·4H2O)22.3mg/L，硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)8.6mg/L，硼酸(H3BO3)6.2mg/L，碘化鉀(KI)0.83mg/L，鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)0.25mg/L，硫酸銅(CuSO4·5H2O)0.025mg/L，氯化鈷(CoCl2·6H2O)0.025mg/L，硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)27.8mg/L，Na2·EDTA·2H2O 37.3mg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素0.1mg/L，鹽酸吡哆醇0.5mg/L，煙酸0.5mg/L，肌醇100mg/L。
所述的完整小苗是指完成了芽和根的分化，并已長出小葉片，可以獨立進(jìn)行自養(yǎng)生長的幼小植株。
所述的育苗基質(zhì)的理化性質(zhì)為總孔隙度為75％，有機質(zhì)含量為20％。
本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明利用組織培養(yǎng)進(jìn)行離體快速繁殖在以下三方面有重要意義(1)繁殖速度快，不受氣候因素影響，一年四季在室內(nèi)均可繁殖，即啟動快；(2)便于保持優(yōu)良種性，即同步性好；(3)在保存和繁育優(yōu)良突變體或優(yōu)良雜種一代方面有非常重要的意義，一株具有明顯優(yōu)勢的羌活突變體或一個具明顯優(yōu)勢的后代經(jīng)組織培養(yǎng)后可大面積推廣。
本發(fā)明所用培養(yǎng)基誘發(fā)時間短、出苗快、增殖頻率高，尤其出苗齊，無需煉苗可直接成活，易于操作，進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明首次采用組織培養(yǎng)方法，開展野生羌活種質(zhì)離體繁殖工作，這為挽救瀕危羌活種質(zhì)資源，開展野生羌活遺傳改良、促進(jìn)羌活的工廠化育苗提供了一條新途徑，提供了一種能進(jìn)行羌活的人工繁殖、種質(zhì)資源離體保存、利用及選育藥用成分含量高的突變系的組織培養(yǎng)方法。
具體實施例方式
實施例1一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下列步驟A、取羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T. Chang萌發(fā)的根芽作外植體，用流水沖洗3～5分鐘，再用75％的酒精滅菌50秒，以無菌去離子水沖洗2～3次，再加入0.1％的升汞，滅菌14分鐘，無菌去離子水沖洗2次，最后用無菌濾紙吸干水分備用；B、外植體接種在超凈工作臺上，將經(jīng)過步驟A的外植體切成0.1～0.3cm3的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT2.0mg/L+2，4-D 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L，培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.1％的活性炭，培養(yǎng)約35天后，可見在根芽切口處膨大形成愈傷組織；所述的超凈工作臺，型號為HS-1300，由蘇靜集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)，
所述的MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962的簡稱，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸，NAA為萘乙酸；C、愈傷組織增殖將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT 1.5mg/L+2，4-D 1.0mg/L，培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.1％的活性炭，增殖培養(yǎng)30～32天后，長出黃色、致密的愈傷組織；D、愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟C中得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.2mg/L，培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.1％的活性炭，培養(yǎng)35～45天后，出現(xiàn)叢生羌活苗；E、生根培養(yǎng)將步驟D中的叢生羌活苗長至2～3厘米時，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.01mg/L，培養(yǎng)基中加入2％的蔗糖、0.8％的瓊脂，培養(yǎng)20～30天后，小苗基部出現(xiàn)白色短根并長出完整根系；培養(yǎng)溫度及光照條件溫度為21±2℃，光照強度為1600Lux，光照時間為14小時；F、植株移栽移栽前，對含蛭石、泥炭的育苗基質(zhì)消毒，將步驟E中得到的完整小苗直接移栽到育苗基質(zhì)，無需煉苗可直接成活長成正常羌活植株，一般成活率在80％以上。
所述的育苗基質(zhì)的理化性質(zhì)為總孔隙度為75％，有機質(zhì)含量為20％。
實施例2一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下列步驟A、取羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang萌發(fā)的根芽作外植體，用流水沖洗3～5分鐘，再用75％的酒精滅菌50秒，以無菌去離子水沖洗3次，再加入0.15％的升汞，滅菌12分鐘，無菌去離子水沖洗3次，最后用無菌濾紙吸干水分備用；B、外植體接種在超凈工作臺上，將經(jīng)過步驟A的外植體切成0.1～0.3cm3的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT1.0mg/L+2，4-D 0.8mg/L+NAA 0.4mg/L，培養(yǎng)基中加入1.0％的瓊脂、3％的蔗糖和0.5％的活性炭，培養(yǎng)30～35天后，在根芽切口處膨大形成愈傷組織；所述的超凈工作臺，型號為HS-1300，由蘇靜集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)；所述的MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962的簡稱，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸，NAA為萘乙酸；C、愈傷組織增殖將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT 1.0mg/L+2，4-D 0.7mg/L，培養(yǎng)基中加入1.0％的瓊脂、3％的蔗糖和0.5％的活性炭，增殖培養(yǎng)35天后，長出黃色、致密的愈傷組織；D、愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟C中得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.3mg/l，培養(yǎng)基中加入1.0％的瓊脂、3％的蔗糖和0.5％的活性炭，培養(yǎng)35～40天后，，出現(xiàn)叢生羌活苗；E、生根培養(yǎng)等步驟D中的叢生羌活苗長至2～3厘米時，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.03mg/L，培養(yǎng)基中加入2％的蔗糖、0.8％的瓊脂，培養(yǎng)20～30天后，小苗基部出現(xiàn)白色短根并長出完整根系；培養(yǎng)溫度及光照條件溫度為21±2℃，光照強度為1600Lux，光照時間為14小時；F、植株移栽將步驟E中得到的完整小苗直接移栽到經(jīng)消毒處理的含蛭石、泥炭的育苗基質(zhì)上，長成正常羌活植株。
所述的育苗基質(zhì)的理化性質(zhì)為總孔隙度為75％，有機質(zhì)含量為20％。
實施例3一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下列步驟A、取羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang萌發(fā)的根芽作外植體，用流水沖洗3～5分鐘，再用75％的酒精滅菌45秒，以無菌去離子水沖洗2次，再加入0.2％的升汞，滅菌12分鐘，無菌去離子水沖洗3次，最后用無菌濾紙吸干水分備用；B、外植體接種在超凈工作臺上，將經(jīng)過步驟A的外植體切成0.1～0.3cm3的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT0.2mg/L+2，4-D 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L，在培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.2％的活性炭，培養(yǎng)30～35天后，在根芽切口處膨大形成愈傷組織；
所述的MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962的簡稱，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸，NAA為萘乙酸；C、愈傷組織增殖將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT 2.0mg/L+2，4-D 1.0mg/L，培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.2％的活性炭，增殖培養(yǎng)30～35天后，長出黃色、致密的愈傷組織；D、愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟C中得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5mg/L，培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.2％的活性炭，經(jīng)35～40天的培養(yǎng)，出現(xiàn)叢生羌活苗；E、生根培養(yǎng)等步驟D中的叢生羌活苗長至2～3厘米時，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.02mg/L，培養(yǎng)基中加入2％的蔗糖、0.8％的瓊脂，培養(yǎng)20～30天后，小苗基部出現(xiàn)白色短根并長出完整根系；培養(yǎng)溫度及光照條件溫度為21±2℃，光照強度為1600Lux，光照時間為14小時；F、植株移栽移栽前，對含蛭石、泥炭的育苗基質(zhì)消毒，將步驟E中得到的完整小苗直接移栽到育苗基質(zhì)上，長成正常羌活植株。
所述的育苗基質(zhì)的理化性質(zhì)為總孔隙度為75％，有機質(zhì)含量為20％。
實施例4一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下列步驟A、取羌活Notopterygium forbesii Boissieu萌發(fā)的根芽作外植體，用流水沖洗3～5分鐘，再用75％的酒精滅菌55秒，以無菌去離子水沖洗3次，再加入0.15％的升汞，滅菌12分鐘，無菌去離子水沖洗3次，最后用無菌濾紙吸干水分備用；B、外植體接種在超凈工作臺上，將經(jīng)過步驟A的外植體切成0.1-0.3cm3的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT1.5mg/L+2，4-D 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L，在培養(yǎng)基中加入0.9％的瓊脂、3％的蔗糖和0.3％的活性炭，培養(yǎng)30～35天后，在根芽切口處膨大形成愈傷組織；所述的超凈工作臺，型號為HS-1300，由蘇靜集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)；所述的MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962的簡稱，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸，NAA為萘乙酸；C、愈傷組織增殖將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT 2.5mg/L+2，4-D 0.9mg/L，在培養(yǎng)基中加入0.9％的瓊脂、3％的蔗糖和0.3％的活性炭，增殖培養(yǎng)25～30天后，長出黃色、致密的愈傷組織；D、愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟C中得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.5mg/L+NAA 0.4mg/L，在培養(yǎng)基中加入0.9％的瓊脂、3％的蔗糖和0.3％的活性炭，培養(yǎng)35～45天后，出現(xiàn)叢生羌活苗；E、生根培養(yǎng)將步驟D中的叢生羌活苗長至2～3厘米時，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.02mg/L，培養(yǎng)基中加入2％的蔗糖、0.8％的瓊脂，培養(yǎng)20～30天，小苗基部出現(xiàn)白色短根并長出完整根系；培養(yǎng)溫度及光照條件溫度為21±2℃；光照強度為1600Lux；光照時間為14小時；F、植株移栽將步驟E中得到的完整小苗直接移栽到經(jīng)消毒處理的含蛭石、泥炭的育苗基質(zhì)上，長成正常羌活植株。
所述的育苗基質(zhì)的理化性質(zhì)為總孔隙度為75％，有機質(zhì)含量為20％。
實施例5一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下列步驟A、取羌活Notopterygium forbesii Boissieu萌發(fā)的根芽作外植體，用流水沖洗3～5分鐘，再用75％的酒精滅菌45秒，以無菌去離子水沖洗2次，再加入0.2％的升汞，滅菌12分鐘，無菌去離子水沖洗3次，最后用無菌濾紙吸干水分備用；B、外植體接種在超凈工作臺上，將經(jīng)過步驟A的外植體切成0.1～0.3cm3的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT0.5mg/L+2，4-D 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L，在培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.2％的活性炭，培養(yǎng)30～35天后，在根芽切口處膨大形成愈傷組織
所述的MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962的簡稱，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸，NAA為萘乙酸；C、愈傷組織增殖將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+KT 2.0mg/L+2，4-D 1.0mg/L，在培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.2％的活性炭，增殖培養(yǎng)25～35天后，長出黃色、致密的愈傷組織；D、愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟C中得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.5mg/L，在培養(yǎng)基中加入0.8％的瓊脂、3％的蔗糖和0.2％的活性炭，培養(yǎng)35～40天后，出現(xiàn)叢生羌活苗；E、生根培養(yǎng)等步驟D中的叢生羌活苗長至2～3厘米時，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.02mg/L，培養(yǎng)基中加入2％的蔗糖、0.8％的瓊脂，培養(yǎng)20～30天后，小苗基部出現(xiàn)白色短根并長出完整根系；培養(yǎng)溫度及光照條件溫度為21±2℃；光照強度為1600Lux；光照時間為14小時；F、植株移栽將步驟E中得到的完整小苗直接移栽到經(jīng)消毒處理的含蛭石、泥炭的育苗基質(zhì)上，長成正常羌活植株。
所述的育苗基質(zhì)的理化性質(zhì)為總孔隙度為75％，有機質(zhì)含量為20％。
權(quán)利要求
1.一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于以羌活萌發(fā)的根芽為外植體，經(jīng)消毒處理、接種誘導(dǎo)形成愈傷組織后，再經(jīng)愈傷組織增殖、誘芽培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，形成完整的植株小苗，將完整小苗移栽到育苗基質(zhì)中，長成正常羌活植株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，包括下列步驟A、外植體的選擇和消毒處理以羌活萌發(fā)的根芽為外植體，以流水沖洗3～5分鐘，再用濃度為75％的酒精浸泡滅菌45～60秒，以無菌去離子水沖洗2～3次，再將沖洗后的外植體置于濃度為0.1％～0.2％的升汞中，浸泡滅菌10～14分鐘，無菌去離子水沖洗2～3次，備用；B、外植體接種將經(jīng)過步驟A中備用的外植體切成0.1～0.3cm3的小塊，接種在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)時間為30～35天，在根芽切口處膨大形成愈傷組織；C、愈傷組織增殖將步驟B中得到的愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，愈傷組織增殖25～35天，長出黃色、致密的愈傷組織；D、愈傷組織的芽誘導(dǎo)將步驟C中得到的愈傷組織接種到誘芽培養(yǎng)基上，培養(yǎng)35～45天，出現(xiàn)叢生羌活苗；E、生根培養(yǎng)將步驟D中得到的叢生羌活苗分株，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20～30天，小苗基部出現(xiàn)白色短根并長出完整根系；F、植株移栽移栽前，對含蛭石、泥炭的育苗基質(zhì)消毒，將步驟E中得到的完整小苗直接移栽到育苗基質(zhì)，無需煉苗可直接成活，長成正常羌活植株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的羌活的基源植物為傘形科多年生草本植物羌活Notopterygiumincisum Ting ex H.T.Chang和寬葉羌活N.forbesii Boissieu。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS、KT 0.1～2.5mg/L、2，4-D 0.5～1.5mg/L、NAA 0.2～0.6mg/L，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸，NAA為萘乙酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS、KT 0.5～2.5mg/L、2，4-D 0.5～1.0mg/L，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962，KT為6-糠基腺嘌呤，2，4-D為2，4-二氯苯氧乙酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的誘芽培養(yǎng)基為MS、6-BA 1.5～4.5mg/L、NAA 0.2～0.5mg/L，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962，6-BA為6-芐基腺嘌呤，NAA為萘乙酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS、NAA 0.01～0.05mg/L、2～3％的蔗糖、0.8％的瓊脂，其中MS為常規(guī)基本培養(yǎng)基Murashige&Skoog 1962，將該常規(guī)基本培養(yǎng)基中的大量元素濃度減半得到1/2MS，NAA為萘乙酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、愈傷組織增殖培養(yǎng)基和誘芽培養(yǎng)基均加入0.7～1.0％的瓊脂、3％蔗糖和0.1～0.5％活性炭。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的育苗基質(zhì)的理化性質(zhì)為總孔隙度為75％，有機質(zhì)含量為20％。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種羌活組織培養(yǎng)繁殖方法，以羌活萌發(fā)的根芽為外植體，經(jīng)消毒處理、接種誘導(dǎo)形成愈傷組織后，再經(jīng)愈傷組織增殖、芽誘導(dǎo)和根誘導(dǎo)，形成完整植株小苗，將完整小苗移栽到育苗基質(zhì)中，長成正常羌活植株，所用基本培養(yǎng)基均為以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，輔以6－糠基腺嘌呤、6－芐基腺嘌呤、2，4－二氯苯氧乙酸、萘乙酸、蔗糖和活性炭等成分；本發(fā)明應(yīng)用組織培養(yǎng)克服羌活育苗周期太長、繁殖系數(shù)低的問題，可進(jìn)行工廠化快速育苗，以適應(yīng)市場對羌活的需求。
文檔編號A01H4/00GK1918972SQ20051002150
公開日2007年2月28日 申請日期2005年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月22日
發(fā)明者蔣舜媛, 陳學(xué)軍, 馬小軍, 梁錦添 申請人:蔣舜媛, 四川天農(nóng)現(xiàn)代中藥科技開發(fā)有限責(zé)任公司