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小桐子快速繁殖方法

文檔序號(hào):363578閱讀:443來源:國(guó)知局
專利名稱:小桐子快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物組培育苗技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種小桐子快速繁殖方法。
背景技術(shù)
小桐子(/airoMa curcas L ),又叫麻瘋樹、麻風(fēng)樹、膏桐、黑皂樹、木花生、油蘆子、亮桐、臭梧桐等,屬大戟科(^Modiaceae)麻瘋樹屬ijatropha L ),落葉灌木或小喬木,是一種多年生木本油料植物。小桐子原產(chǎn)美洲,廣泛分布于熱帶亞熱帶地區(qū)。小桐子可全株開發(fā),其果實(shí)、枝、葉均能利用。小桐子種子含油率高,經(jīng)過加工可制成生物柴油。小桐子種子、樹皮、葉、根和乳汁中含有多種成分的生物藥源,可提取制作生物醫(yī)藥和生物農(nóng)藥。小桐子種子加工后的油餅蛋白質(zhì)含量較高,脫毒后可制作生物飼料,未脫毒的可制作優(yōu)質(zhì)的有機(jī)生物肥。另外,小桐子莖葉有毒,牲畜不吃,病蟲較少,不易燃燒, 可作為田間地邊的生物籬和防風(fēng)防火屏障。培育小桐子能源林,利用其種子提煉生物柴油是小桐子產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要方向。我國(guó)現(xiàn)有栽培和半野生的小桐子,其繁殖主要靠種子繁殖和扦插繁殖,繁殖周期長(zhǎng)、成本高。又因其為木本植物,采用常規(guī)育種來改變其遺傳性狀相當(dāng)困難,因此采用現(xiàn)代生物技術(shù)如轉(zhuǎn)基因技術(shù)等成為首選。一些國(guó)家和地區(qū)已經(jīng)開始了對(duì)小桐子進(jìn)行了分子水平的育種工作。選育的優(yōu)良品種大量繁殖,通過組培方式快速繁殖小桐子將在小桐子選育種生產(chǎn)上有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前,關(guān)于小桐子的組織培養(yǎng)及快速繁殖的報(bào)道較多,例如陸偉達(dá)、魏琴、唐琳等發(fā)表的《麻瘋樹愈傷組織的誘導(dǎo)及快速繁殖》(《應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)》,2003,9 (2) 127^130.)以及陳金洪、高敏、黃記生發(fā)表的《麻瘋樹莖段離體培養(yǎng)及快速繁殖研究》(《廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)》,2006,37 (3):22廣223.)等論文均涉及小桐子的組織培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)。但是,現(xiàn)有技術(shù)存在以下不足
1、均采用不同的激素濃度組合誘導(dǎo)愈傷組織和芽分化,未經(jīng)過再生芽增殖,其增殖速率低;
2、均采用不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織,其不同外植體誘導(dǎo)頻率相差及大。采用上述方法不能達(dá)到工廠化生產(chǎn)的需要,另有研究者進(jìn)行了腋芽快繁研究,例如李化、曾妮、賈勇炯等人發(fā)表的《麻瘋樹的促腋芽分枝快繁及生根誘導(dǎo)》(《四川大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版》,2006,43 (5):1116 1120.),所用外植體為種子萌發(fā)的胚芽來誘導(dǎo)增殖。 但尚未見公開采用再生芽來誘導(dǎo)增殖的繁殖技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例所要解決的技術(shù)問題在于,提供一種小桐子快速繁殖方法,以通過組織培養(yǎng)大規(guī)模高效地生產(chǎn)小桐子。為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明提供如下技術(shù)方案一種小桐子快速繁殖方法,包括如下步驟準(zhǔn)備再生芽步驟,以小桐子成熟種子為材料,經(jīng)培育獲得無菌再生芽; 增殖誘導(dǎo)步驟,將再生芽切下,接入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng),從而獲得增殖的叢芽; 伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟,將增殖后的叢芽切下,接入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)而獲得莖葉伸長(zhǎng)的均勻的
芽;
壯苗培養(yǎng)步驟,將伸長(zhǎng)后的芽接入壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗培養(yǎng); 生根移栽步驟,選取壯苗培養(yǎng)后莖葉生長(zhǎng)均勻的芽切下,用吲哚丁酸浸泡后再接入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng),生出符合移栽要求的根后進(jìn)行煉苗移栽。進(jìn)一步地,所述誘導(dǎo)增殖步驟中,增殖培養(yǎng)基的成分為MS+0. Γ2 mg/L 6_芐基嘌呤+0. 01 2 mg/L吲哚丁酸+0 5 mg/L的硝酸銀,附加3%蔗糖和0. 7%瓊脂,ρΗ5· 8。進(jìn)一步地,所述誘導(dǎo)增殖步驟中,培養(yǎng)條件是溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為 12 h/d培養(yǎng)20 50天,光照強(qiáng)度為1600^2000 Ix0進(jìn)一步地,所述伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟中,伸長(zhǎng)培養(yǎng)基成分為MS +0. Γ2 mg/L 6_芐基嘌呤和(Tl mg/L的赤霉素,附加3%蔗糖和0. 7%瓊脂,ρΗ5· 8。進(jìn)一步地,所述伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟中,培養(yǎng)條件是溫度控制在24l6°C,光照時(shí)間為 12 h/d培養(yǎng)10 30天,光照強(qiáng)度為1600^2000 Ix0進(jìn)一步地,所述壯苗培養(yǎng)步驟中,壯苗培養(yǎng)基中含有MS+0. Γ2 mg/L 6_芐基嘌呤 +0.0廣2 mg/L吲哚丁酸+0 5 mg/L的硝酸銀+(TlO %椰汁。進(jìn)一步地,所述壯苗培養(yǎng)步驟中,培養(yǎng)條件為溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為 12 h/d培養(yǎng)10 30天,光照強(qiáng)度為1600^2000 Ix0進(jìn)一步地,所述生根移栽步驟中,生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0. Γ2 mg/L的吲哚丁酸, 需附加廣2 %的蔗糖、0. 3 0. 7 %的瓊脂,調(diào)pH值至5. 8。進(jìn)一步地,所述生根移栽步驟中,壯苗培養(yǎng)后莖葉生長(zhǎng)均勻的芽的切法為選取生長(zhǎng)均勻的芽在結(jié)下廣4 mm處平切。進(jìn)一步地,所述生根移栽步驟中,切下的芽在接入生根培養(yǎng)基之前先在0. Γ2 mg/ L的吲哚丁酸中浸泡5 120 min。通過采用上述技術(shù)方案,本發(fā)明至少具有如下有益效果本發(fā)明中采用再生芽來誘導(dǎo)增殖,可用于小桐子遺傳轉(zhuǎn)化后優(yōu)良品系增殖,為小桐子的人工繁殖、脫毒苗生產(chǎn)、繁殖優(yōu)良品種開辟高效途徑。本發(fā)明所用的增殖培養(yǎng)基添加有細(xì)胞分裂素6-芐基嘌呤和生長(zhǎng)素吲哚丁酸,增殖倍數(shù)多,平均可達(dá)3飛倍,因此,僅需少量的芽就可在短時(shí)間內(nèi)得到大量的材料,為小桐子組培中選育的優(yōu)良品種的大批量繁殖奠定了基礎(chǔ)。本發(fā)明的方法中在得到增殖的芽后進(jìn)行了莖葉伸長(zhǎng)培養(yǎng)和壯苗培養(yǎng),保證了增殖芽都能順利發(fā)育為完整植株。本發(fā)明的方法是在無菌操作中完成,不受時(shí)間和地域的限制,可隨時(shí)完成。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種小桐子快速繁殖方法,包括以下步驟
準(zhǔn)備再生芽步驟,以小桐子成熟種子為材料,經(jīng)培育獲得無菌再生芽; 增殖誘導(dǎo)步驟,將再生芽切下,接入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng),從而獲得增殖的叢芽;伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟,將增殖后的叢芽切下,接入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)而獲得莖葉伸長(zhǎng)的均勻的
芽;
壯苗培養(yǎng)步驟,將伸長(zhǎng)后的芽接入壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗培養(yǎng); 生根移栽步驟,選取壯苗培養(yǎng)后莖葉生長(zhǎng)均勻的芽切下接入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng),待培養(yǎng)出符合移栽要求的根后進(jìn)行煉苗移栽。其中,準(zhǔn)備再生芽步驟Sl主要是為獲得無菌再生芽以供后續(xù)增殖誘導(dǎo)步驟使用, 采用現(xiàn)有的各種利用種子培育發(fā)芽技術(shù)均可實(shí)現(xiàn)本步驟的目的。增殖誘導(dǎo)步驟S2進(jìn)一步包括以下工藝
52.1將分化出的再生芽切下;
S2.2將切下的再生芽接入增殖培養(yǎng)基,該增殖培養(yǎng)基是指MS+0. Γ2 mg/L 6-芐基嘌呤+0.01 2 mg/L吲哚丁酸+0 5 mg/L的硝酸銀,需附加3 %蔗糖、0.7 %瓊脂,pH5.8。S2. 3培養(yǎng)條件為溫度24l6°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)20 50天,光照強(qiáng)度為 1600 2000 lx。伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟S3進(jìn)一步包括以下工藝
53.1將增殖后的叢芽切下接入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基,該伸長(zhǎng)培養(yǎng)基為MS +0. Γ2 mg/L 6-芐基嘌呤和(Tl mg/L的赤霉素,需附加3 %蔗糖、0. 7 %瓊脂,pH5. 8。S3. 2培養(yǎng)條件為溫度24l6°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)20 50天,光照強(qiáng)度為 1600 2000 lx。壯苗培養(yǎng)步驟S4進(jìn)一步包括以下工藝
54.1伸長(zhǎng)后的芽切下接入壯苗培養(yǎng)基,該壯苗培養(yǎng)基成分包括MS+0.廣2 mg/L 6-芐基嘌呤+0.0廣2 mg/L吲哚丁酸+0 5 mg/L的硝酸銀+(TlO %椰汁;
S4.2培養(yǎng)溫度控制在24l6°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)10 30天,光照強(qiáng)度為 1600 2000 lx。生根移栽步驟S5中進(jìn)一步包括以下工藝
55.1選取莖葉生長(zhǎng)均勻的芽切下,切法為苗在結(jié)下廣4 mm處平切; S5. 2并在0. Γ2 mg/L的吲哚丁酸中浸泡5 120 min,接入生根培養(yǎng)基;
S5.3待培養(yǎng)出符合移栽要求的根后進(jìn)行煉苗移栽,通常地,當(dāng)培養(yǎng)出3條以上的根, 且每條根長(zhǎng)度為3cm長(zhǎng)時(shí)即可進(jìn)行煉苗移栽。下面結(jié)合幾個(gè)具體的實(shí)施例詳述本發(fā)明的實(shí)施方案。需要說明的是,下述實(shí)施例是說明性的,不是限定性的,不能以下述實(shí)例來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。此外,如前所述,采用現(xiàn)有的各種利用種子培育發(fā)芽技術(shù)均可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)備再生芽步驟Si的目的,該準(zhǔn)備再生芽步驟Sl并非本發(fā)明創(chuàng)新的核心所在,因此,在以下各實(shí)施例中,將不再特別描述準(zhǔn)備再生芽步驟Si,而直接從增殖誘導(dǎo)步驟S2開始闡述。實(shí)施例1
本實(shí)例以云南元謀野生小桐子種子為材料,樣品的總數(shù)量及經(jīng)各處理步驟后的存活數(shù)量請(qǐng)參考表1。各主要工藝步驟具體如下
增殖誘導(dǎo)步驟S2:將分化出的再生芽切下,接入增殖培養(yǎng)基MP8,即MS+1.0 mg/L 6-芐基嘌呤+0. 01mg/L吲哚丁酸+0. 025 mg/L的硝酸銀,并附加3%蔗糖和0. 7%瓊脂,pH5. 8,溫度控制在對(duì)!,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)30天,光照強(qiáng)度為1800 Ix0
伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟S3 將增殖后的叢芽切下,接種到伸長(zhǎng)培養(yǎng)基SEB3,即MS+0. 3 mg/L 6-芐基嘌呤和0. 25 mg/L的赤霉素,并附加3 %蔗糖和0. 7%瓊脂,ρΗ5· 8,誘導(dǎo)莖葉伸長(zhǎng), 培養(yǎng)溫度控制在對(duì) 261,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)30天,光照強(qiáng)度為160(T2000 Ix0壯苗培養(yǎng)步驟S4 伸長(zhǎng)后的芽切下接入壯苗培養(yǎng)基MCl,即MS+1. 0 mg/L 6_芐基嘌呤+0.01 mg/L吲哚丁酸+0 mg/L的硝酸銀+5 %椰汁,進(jìn)行壯苗培養(yǎng),培養(yǎng)溫度控制在 ^°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)18天,光照強(qiáng)度2000 Ix0生根移栽步驟S5 取滅菌的盤,墊上無菌濾紙,加入少量無菌水;挑取長(zhǎng)勢(shì)均勻 (對(duì)于長(zhǎng)勢(shì)不均勻的芽要再經(jīng)過壯苗培養(yǎng)后才能進(jìn)行生根培養(yǎng))的芽切下,切法為在芽的結(jié)下2 mm處平切,并在0.3 mg/L的吲哚丁酸中浸泡5 min,浸泡過程中盡量只讓芽的切口處接觸到液體;然后取出芽接種到生根培養(yǎng)基R2中誘導(dǎo)生根,該生根培養(yǎng)基R2成分為 1/2MS+0. 3 mg/L的吲哚丁酸,并附加1%的蔗糖和0. 35%的瓊脂,并調(diào)pH值至5. 8。培養(yǎng)條件是溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)14天,光照強(qiáng)度為1600 Ix0選取已生根至少3條的生根苗,在自然光條件下過度廣3星期,逐漸開蓋煉苗并移栽至溫室。實(shí)施例2
本實(shí)例以云南元謀野生小桐子種子為材料,樣品的總數(shù)量及經(jīng)各處理步驟后的存活數(shù)量請(qǐng)參考表1。各主要工藝步驟具體如下
增殖誘導(dǎo)步驟將分化出的再生芽切下,接入增殖培養(yǎng)基MP16,即MS+2.0 mg/L 6-芐基嘌呤+0. 1 mg/L吲哚丁酸+1 mg/L的硝酸銀,并附加3%蔗糖和0. 7%瓊脂,pH5. 8,培養(yǎng)溫度控制在沈!,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)35天,光照強(qiáng)度為2000 Ix0伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟將增殖后的叢芽切下,接種到伸長(zhǎng)培養(yǎng)基SEBlO JPMS +2 mg/L 6-芐基嘌呤和1 mg/L的赤霉素,并附加3 %蔗糖和0.7 %瓊脂,pH5. 8,誘導(dǎo)莖葉伸長(zhǎng),培養(yǎng)溫度控制在^°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)20天,光照強(qiáng)度為1800 Ix0壯苗培養(yǎng)步驟伸長(zhǎng)后的芽切下接入壯苗培養(yǎng)基MC2,即改良MS+2. 0 mg/L 6_芐基嘌呤+0.1 mg/L吲哚丁酸+1 mg/L的硝酸銀+10 %椰汁,進(jìn)行壯苗培養(yǎng);培養(yǎng)溫度控制在 ^°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)14天,光照強(qiáng)度2000 Ix0生根移栽步驟取滅菌的盤,墊上無菌濾紙,加入少量無菌水;挑取長(zhǎng)勢(shì)均勻的芽切下,切法為在芽的結(jié)下1 mm處平切,并在1 mg/L的吲哚丁酸中浸泡120 min,浸泡過程中盡量只讓芽的切口處接觸到液體;然后取出芽接種到生根培養(yǎng)基R2,即1/2MS+1 mg/L的吲哚丁酸,并附加2、的蔗糖和0. 7%的瓊脂,并調(diào)pH值至5. 8,誘導(dǎo)生根。培養(yǎng)條件是溫度控制在對(duì) 261,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)20天,光照強(qiáng)度為1600 Ix0選取已生根至少 3條的生根苗,在自然光條件下過度廣3星期,逐漸開蓋煉苗并移栽至溫室。實(shí)施例3
本實(shí)例以云南元謀野生小桐子種子為材料,樣品的總數(shù)量及經(jīng)各處理步驟后的存活數(shù)量請(qǐng)參考表1。各主要工藝步驟具體如下
增殖誘導(dǎo)步驟將分化出的再生芽切下,接入增殖培養(yǎng)基ΜΡ0,即MS+0. 1 mg/L 6-芐基嘌呤+0. 01 mg/L吲哚丁酸+5 mg/L的硝酸銀,并附加3%蔗糖和0. 7%瓊脂,ρΗ5· 8,培養(yǎng)溫度控制在沈!,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)40天,光照強(qiáng)度為2000 Ix0伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟將增殖后的叢芽切下,接種到伸長(zhǎng)培養(yǎng)基SEBl JPMS +0.1 mg/L 6-芐基嘌呤和0. 5 mg/L的赤霉素,并附加3 %蔗糖和0. 7%瓊脂,pH5. 8,誘導(dǎo)莖葉伸長(zhǎng),培養(yǎng)溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)30天,光照強(qiáng)度為2000 Ix0壯苗培養(yǎng)步驟伸長(zhǎng)后的芽切下接入壯苗培養(yǎng)基MC1,即MS+0. 3 mg/L 6_芐基嘌呤+0.1 mg/L吲哚丁酸+0.5 mg/L的硝酸銀+0 %椰汁,進(jìn)行壯苗培養(yǎng);培養(yǎng)溫度控制在 ^°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)20天,光照強(qiáng)度2000 Ix0生根移栽步驟取滅菌的盤,墊上無菌濾紙,加入少量無菌水;挑取長(zhǎng)勢(shì)均勻的芽切下,切法為在芽的結(jié)下4 mm處平切,并在2 mg/L的吲哚丁酸中浸泡60min,浸泡過程中盡量只讓芽的切口處接觸到液體;然后取出芽接種到生根培養(yǎng)基R2,即1/2 MS+2 mg/L的吲哚丁酸,并附加1. 5%的蔗糖和7%的瓊脂,并調(diào)pH值至5. 8,誘導(dǎo)生根。其培養(yǎng)的條件是 溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)18天,光照強(qiáng)度為1600 Ix0選取已生根至少3條的生根苗,在自然光條件下過度廣3星期,逐漸開蓋煉苗并移栽至溫室。表1本發(fā)明各實(shí)施例中的再生率及增值率
權(quán)利要求
1.一種小桐子快速繁殖方法,其特征在于,包括如下步驟準(zhǔn)備再生芽步驟,以小桐子成熟種子為材料,經(jīng)培育獲得無菌再生芽;增殖誘導(dǎo)步驟,將再生芽切下,接入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng),從而獲得增殖的叢芽;伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟,將增殖后的叢芽切下,接入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)而獲得莖葉伸長(zhǎng)的均勻的芽;壯苗培養(yǎng)步驟,將伸長(zhǎng)后的芽接入壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗培養(yǎng);生根移栽步驟,選取壯苗培養(yǎng)后莖葉生長(zhǎng)均勻的芽切下,用吲哚丁酸浸泡后再接入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng),生出符合移栽要求的根后經(jīng)煉苗后,進(jìn)行移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述增殖誘導(dǎo)步驟中, 增殖培養(yǎng)基的成分為:MS+0. Γ2 mg/L 6-芐基嘌呤+0.0廣2 mg/L吲哚丁酸+0 5 mg/L的硝酸銀,附加3%蔗糖和0. 7%瓊脂,pH5. 8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述增殖誘導(dǎo)步驟中,培養(yǎng)條件是溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)2(Γ50天,光照強(qiáng)度為 1600 2000 lx。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟中, 伸長(zhǎng)培養(yǎng)基成分為MS +0. Γ2 mg/L 6-芐基嘌呤和(Tl mg/L的赤霉素,附加3%蔗糖和 0. 7% 瓊脂,ρΗ5· 8。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟中,培養(yǎng)條件是溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)1(Γ30天,光照強(qiáng)度為 1600 2000 lx。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述壯苗培養(yǎng)步驟中, 壯苗培養(yǎng)基中含有:MS+0. Γ2 mg/L 6-芐基嘌呤+0.0廣2 mg/L吲哚丁酸+0 5 mg/L的硝酸銀+(TlO %椰汁。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述壯苗培養(yǎng)步驟中,培養(yǎng)條件為溫度控制在M 26°C,光照時(shí)間為12 h/d培養(yǎng)1(Γ30天,光照強(qiáng)度為 1600 2000 lx。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述生根移栽步驟中, 生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0. Γ2 mg/L的吲哚丁酸,并附加廣2 %的蔗糖和0. 3 0. 7 %的瓊脂, 調(diào)PH值至5.8。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述生根移栽步驟中, 壯苗培養(yǎng)后莖葉生長(zhǎng)均勻的芽的切法為選取生長(zhǎng)均勻的芽在結(jié)下廣4 mm處平切。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或8或9所述的小桐子快速繁殖方法,其特征在于所述生根移栽步驟中,切下的芽在接入生根培養(yǎng)基之前先在0. Γ2 mg/L的吲哚丁酸中浸泡5 120 min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種小桐子快速繁殖方法,包括如下步驟準(zhǔn)備再生芽步驟,以小桐子成熟種子為材料,經(jīng)培育獲得無菌再生芽;增殖誘導(dǎo)步驟,將再生芽切下,接入增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng),從而獲得增殖的叢芽;伸長(zhǎng)培養(yǎng)步驟,將增殖后的叢芽切下,接入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)而獲得莖葉伸長(zhǎng)的均勻的芽;壯苗培養(yǎng)步驟,將伸長(zhǎng)后的芽接入壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗培養(yǎng);生根移栽步驟,選取壯苗培養(yǎng)后莖葉生長(zhǎng)均勻的芽切下接入生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng),生出符合移栽要求的根后進(jìn)行煉苗移栽。本發(fā)明采用再生芽來誘導(dǎo)增殖,增殖倍數(shù)高,可用于小桐子遺傳轉(zhuǎn)化后優(yōu)良品系增殖,為小桐子的人工繁殖、脫毒苗生產(chǎn)、大批量繁殖優(yōu)良品種開辟高效途徑。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102405832SQ20111023766
公開日2012年4月11日 申請(qǐng)日期2011年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月18日
發(fā)明者孔曉香, 孫懷娟, 李耿光, 李艷梅, 陳小蓮 申請(qǐng)人:普羅米綠色能源(深圳)有限公司
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