專利名稱：一種利用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖伊犁貝母的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種貝母的組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種適用于伊犁貝母的快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
伊犁貝母，屬于新疆貝母的一種，主要分布于新疆哈巴河、阿勒泰、吉木乃、布爾津、尼勒克、特克斯、托里、溫泉、博樂(lè)、霍城、巴音布克和鞏乃斯等地區(qū)，生于海拔1500-2500米的山地草原甸中。伊犁貝母是一種喜濕潤(rùn)耐寒冷的植物，適宜在高原地區(qū)生長(zhǎng)，這些地方，一方面氣候涼爽，雨量較多，適宜貝母生長(zhǎng)，另一方面，土地肥沃，多為山地粟鈣士和黑鈣土，種植后，數(shù)年不需要施肥。一般不宜在平原氣溫過(guò)高的地方種植，這種特殊的環(huán)境要求決定了伊犁貝母的繁殖量大大受到限制；伊犁貝母花色淡黃，并且含有生物堿、西貝素、雷的思寧等，味苦、性微寒，主治久喘氣急、氣管炎、淋巴結(jié)核、肺癰、咳嗽等癥，具有清心潤(rùn)肺、止咳化痰的功能，是一種清熱、潤(rùn)肺、止咳、化痰的常用藥，具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于其特殊的功效，人們對(duì)其需求量也越來(lái)越多，所以對(duì)其進(jìn)行大批量的繁殖具有很重要的意義。目前對(duì)貝母的組織培養(yǎng)技術(shù)的研究已經(jīng)初具規(guī)模，但是對(duì)伊犁貝母的研究還不是很多，并且繁殖方法還沒(méi)有成規(guī)模，沒(méi)有形成一套完整的繁殖體系。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖伊犁貝母的方法。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是:
一種利用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖伊犁貝母的方法，包括以下步驟:
(I)外植體的選擇與消毒處理:首先`選用生長(zhǎng)健壯、成熟的新鮮的伊犁貝母鱗莖球，剝?nèi)[莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗30 min后放入清水中浸泡15min后，將鱗莖球一層一層的剝開(kāi)，再在紫外燈下照射20 min，繼而轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈工作臺(tái)上先用70-75 %的乙醇浸泡15秒，然后用無(wú)菌水沖洗2-3次，再用6%次氯酸鈉溶液消毒8min,無(wú)菌水沖洗2_3次。最后用0.1%的升萊溶液消毒12 min,無(wú)菌水沖洗4_5次。(2)材料的處理:將消毒處理好的鱗片用無(wú)菌濾紙吸干，在無(wú)菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開(kāi)來(lái)，分別切成5-8_的小塊；
(3)愈傷組織的誘導(dǎo):將經(jīng)過(guò)步驟(2)處理好的鱗片切塊接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，PH6.0，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為22001ux，培養(yǎng)18-22天可見(jiàn)愈傷組織的形成，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+瓊脂6.0g/L+2.4D1.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+ ZT0.2mg/L + 鹿糖 15g/L ；
(4)繼代培養(yǎng):將步驟(3)中誘導(dǎo)的愈傷組織切下接種在繼代培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為23001uX，PH6.0，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖35mg/L+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +KT0.5mg/L，經(jīng)過(guò)5_8天時(shí)間分化出細(xì)芽后，升高培養(yǎng)溫度到26°C，光照周期為14h/d，光強(qiáng)度為26001UX，繼續(xù)培養(yǎng)7_12天便可分化出一簇一簇的小鱗莖；
(5)生根培養(yǎng):將分化出來(lái)的小鱗莖一個(gè)個(gè)分別接種于下列誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo):3/4MS培養(yǎng)基+活性炭2.5mg/L+瓊脂8g/L+IBA0.8mg/L,培養(yǎng)溫度為22 °C，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為22001ux，PH值為6.0，經(jīng)過(guò)22天左右根系長(zhǎng)出5_10個(gè)根時(shí)，即開(kāi)始下一個(gè)階段；
(6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗6d，然后將長(zhǎng)出新根的小鱗莖從培養(yǎng)瓶中取出，在陽(yáng)光下曬1-2天，在曬的過(guò)程中要適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的60%，然后將其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠巖、黑鈣土的混合比例為1:1:1: 3的苗床上；當(dāng)外界夜間溫度在5-10°C，白天溫度在15-20之間時(shí)把試管苗進(jìn)行移栽，在移栽初期的3天內(nèi)，用塑料薄膜覆蓋，以保持濕度在80%以上，并且控制光照強(qiáng)度在2700-32001x，之后逐漸揭去薄膜并適當(dāng)增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。本發(fā)明的有益效果是:
(I)在在繼代培養(yǎng)過(guò)程中當(dāng)愈傷組織分化出細(xì)芽后，升高培養(yǎng)溫度，提高光照周期和光照強(qiáng)度，這樣縮短了培養(yǎng)時(shí)間。(2)在移栽煉苗的過(guò)程中，苗床培養(yǎng)基質(zhì)的配比恰當(dāng)，幼苗生長(zhǎng)健壯，枝葉茂盛，根系發(fā)達(dá)，并且在移栽的過(guò)程中采取必要的措施控制了生長(zhǎng)的溫度和光照強(qiáng)度，使伊犁貝母在適宜的溫度下進(jìn)行繁殖，提高了幼苗的質(zhì)量和成活率，由于合理的移植，幼苗的成活率達(dá)到85%以上。(3)外植體利用率高，可以高達(dá)95%以上。(4)本發(fā)明模擬野 生伊犁貝母的生長(zhǎng)環(huán)境，培養(yǎng)過(guò)程中溫度較低，培養(yǎng)基質(zhì)以黑鈣土為主，這樣在這種模擬野生環(huán)境中生長(zhǎng)，質(zhì)量和品質(zhì)得到了提高。
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)闡述，以使本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征能更易于被本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，從而對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍做出更為清楚明確的界定。一種利用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖伊犁貝母的方法，包括以下步驟:
(I)外植體的選擇與消毒處理:首先選用生長(zhǎng)健壯、成熟的新鮮的伊犁貝母鱗莖球，剝?nèi)[莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗30 min后放入清水中浸泡15min后，將鱗莖球一層一層的剝開(kāi)，再在紫外燈下照射20 min，繼而轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈工作臺(tái)上先用70%的乙醇浸泡15秒,然后用無(wú)菌水沖洗3次,再用6%次氯酸鈉溶液消毒8min，無(wú)菌水沖洗3次。最后用0.1%的升汞溶液消毒12 min，無(wú)菌水沖洗5次。(2)材料的處理:將消毒處理好的鱗片用無(wú)菌濾紙吸干，在無(wú)菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開(kāi)來(lái)，分別切成6_的小塊；
(3)愈傷組織的誘導(dǎo):將經(jīng)過(guò)步驟(2)處理好的鱗片切塊接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，PH6.0，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為22001ux，培養(yǎng)22天可見(jiàn)愈傷組織的形成，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+瓊脂6.0g/L+2.4D1.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+ ZT0.2mg/L + 鹿糖 15g/L ；
(4)繼代培養(yǎng):將步驟(3)中誘導(dǎo)的愈傷組織切下接種在繼代培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為23001uX，PH6.0，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖35mg/L+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +KT0.5mg/L，經(jīng)過(guò)6天時(shí)間分化出細(xì)芽后，升高培養(yǎng)溫度到26°C，光照周期為14h/d，光強(qiáng)度為26001UX，繼續(xù)培養(yǎng)10天便可分化出一簇一簇的小鱗莖；
(5)生根培養(yǎng):將分化出來(lái)的小鱗莖一個(gè)個(gè)分別接種于下列誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo):3/4MS培養(yǎng)基+活性炭2.5mg/L+瓊脂8g/L+IBA0.8mg/L,培養(yǎng)溫度為22°C，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為22001ux，PH值為6.0，經(jīng)過(guò)22天左右根系長(zhǎng)出5_10個(gè)根時(shí)，即開(kāi)始下一個(gè)階段；
(6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗6d，然后將長(zhǎng)出新根的小鱗莖從培養(yǎng)瓶中取出，在陽(yáng)光下曬2天，在曬的過(guò)程中要適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的60%，然后將其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠巖、黑鈣土的混合比例為1:1:1: 3的苗床上；當(dāng)外界夜間溫度在5-10°C，白天溫度在15-20之間時(shí)把試管苗進(jìn)行移栽，在移栽初期的3天內(nèi)，用塑料薄膜覆蓋，以保持濕度在80%以上，并且控制光照強(qiáng)度在30001x，之后逐漸揭去薄膜并適當(dāng)增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。經(jīng)過(guò)上述步驟的培養(yǎng)，伊犁貝母的愈傷組織形成率達(dá)到了 93%，增殖倍數(shù)達(dá)到了 6倍，生根率達(dá)到了 92%，最終的成活率達(dá)到了 90%，并且伊犁貝母的質(zhì)量和產(chǎn)量都得到很大的提聞。以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范 圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種利用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖伊犁貝母的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒處理:首先選用生長(zhǎng)健壯、成熟的新鮮的伊犁貝母鱗莖球，剝?nèi)[莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗30 min后放入清水中浸泡15min后，將鱗莖球一層一層的剝開(kāi)，再在紫外燈下照射20 min，繼而轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)，在超凈工作臺(tái)上先用70-75%的乙醇浸泡15秒,然后用無(wú)菌水沖洗2-3次,再用6%次氯酸鈉溶液消毒8min,無(wú)菌水沖洗2_3次,最后用0.1%的升萊溶液消毒12 min,無(wú)菌水沖洗4_5次； (2)材料的處理:將消毒處理好的鱗片用無(wú)菌濾紙吸干，在無(wú)菌條件下將材料按照上、中、下部還有基部分割開(kāi)來(lái)，分別切成5-8mm的小塊； (3)愈傷組織的誘導(dǎo):將經(jīng)過(guò)步驟(2)處理好的鱗片切塊接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，PH6.0，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為22001ux，培養(yǎng)18-22天可見(jiàn)愈傷組織的形成，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+瓊脂6.0g/L+Dl.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+ ZT.0.2mg/L + 鹿糖 15g/L ； (4)繼代培養(yǎng):將步驟(3)中誘導(dǎo)的愈傷組織切下接種在繼代培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為23001uX，PH6.0，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖35mg/L+6-BA1.0mg/L +NAA0.2 mg/L +KT0.5mg/L，經(jīng)過(guò)5_8天時(shí)間分化出細(xì)芽后，升高培養(yǎng)溫度到26°C，光照周期為14h/d，光強(qiáng)度為26001x，繼續(xù)培養(yǎng)7_12天便可分化出一簇一簇的小鱗莖； (5)生根培養(yǎng):將分化出來(lái)的小鱗莖一個(gè)個(gè)分別接種于下列誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo):3/4MS培養(yǎng)基+活性炭2.5mg/L+瓊脂8g/L+IBA0.8mg/L,培養(yǎng)溫度為22°C，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為22001ux，PH值為6.0，經(jīng)過(guò)22天左右根系長(zhǎng)出5_10個(gè)根時(shí)，即開(kāi)始下一個(gè)階段； (6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗6d，然后將長(zhǎng)出新根的小鱗莖從培養(yǎng)瓶中取出，在陽(yáng)光下曬1-2天，在曬的過(guò)程中要適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的60%，然后將其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠巖、黑鈣土的混合比例為1:1:1: 3的苗床上；當(dāng)外界夜間溫度在5-10°C，白天溫度在15-20之間時(shí)把試管苗進(jìn)行移栽，在 移栽初期的3天內(nèi)，用塑料薄膜覆蓋，以保持濕度在80%以上，并且控制光照強(qiáng)度在2700-32001x，之后逐漸揭去薄膜并適當(dāng)增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種利用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖伊犁貝母的方法，主要通過(guò)對(duì)外植體的選擇與消毒處理、材料處理、愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽等步驟，使伊犁貝母的愈傷組織形成率達(dá)到了93%，增殖倍數(shù)達(dá)到了6倍，生根率達(dá)到了92%，最終的成活率達(dá)到了90%，并且伊犁貝母的質(zhì)量和產(chǎn)量都得到很大的提高。并且本發(fā)明模擬野生伊犁貝母的生長(zhǎng)環(huán)境，培養(yǎng)過(guò)程中溫度較低，培養(yǎng)基質(zhì)以黑鈣土為主，在這種模擬野生環(huán)境中生長(zhǎng)，質(zhì)量和品質(zhì)得到了提高。
文檔編號(hào)A01G1/00GK103238524SQ20131021170
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月31日
發(fā)明者陳勇明 申請(qǐng)人:常熟市佳盛農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司