專利名稱：中藥抑菌組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥抑菌組合物。
背景技術(shù)：
大黃是多種寥科大黃屬的多年生植物的合稱，也是中藥材的名稱。因其喜冷涼氣候，且耐寒，故其主要生于山地林緣或草坡的陰濕環(huán)境，中藥大黃具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血、祛瘀、解毒等功效?，F(xiàn)代藥理研究證明，大黃具有抗菌作用，其中對于金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、傷寒沙門菌、痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌、變形桿菌等都有較強的抑制作用，除此之外，還具有抗腫瘤、降低血壓、健胃、利膽、保肝、強心、延緩衰老、調(diào)節(jié)免疫功能等作用。大黃因其具有較高的藥用和保健價值，廣泛引 起了人們關(guān)注。中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌劑、涂覆劑等一次用劑量大，且長期使用影響人體健康。
發(fā)明內(nèi)容
針對大黃抑菌劑一次用量大和長期使用影響人體健康問題，本發(fā)明人經(jīng)過大量實驗，發(fā)現(xiàn)納米銀能有效增強大黃提取液抑菌性能，減少大黃抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合物，更加的安全。本發(fā)明的目的在于提供一種大黃納米銀抑菌組合物，減少大黃抑菌劑一次的用劑量和降低藥品對人體的毒性。本發(fā)明提供如下技術(shù)方案
一種抑菌組合物，含有大黃提取液、水溶性納米銀；
大黃提取液制備包括如下步驟加水量為大黃重量的9倍，經(jīng)95 1水浴提取4 h，再經(jīng)過減壓濃縮得到提取液。所得提取液經(jīng)O. 22 μ m濾膜過濾。最后提取液經(jīng)高效液相色譜法對大黃素進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定量。水溶性納米銀顆粒粒徑為3 10 nm,納米銀外表包覆兩性聚合物。水溶性納米銀粒徑為3 10 nm,外表為羧基，依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與大黃提取液具有良好的的協(xié)同抗菌作用。抑制大腸桿菌0157 :H7時大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為75 100:1 抑制藤黃微球菌時大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為和25 50: I。本發(fā)明還涉及上述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及上述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應(yīng)用本發(fā)明的有益效果是水溶性納米銀的應(yīng)用能有效增強大黃抑菌性能，降低大黃抑菌劑的用量，令人意向不到的是，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協(xié)同作用，同時本抑菌組合物采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)，相對于使用高劑量的大黃或者水溶性納米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。
圖I大黃提取液與納米銀之比為100:1對大腸桿菌0157:H7協(xié)同抑菌作用
圖Ia 200 4 1^大黃提取液對大腸桿菌0157:!17的抑制作用，圖化2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157: Η7的抑制作用，圖Ic 100 μ L大黃提取液與I μ L納米銀對大腸桿菌0157: Η7的協(xié)同抑菌作用。圖2大黃提取液與納米銀之比為75:1對大腸桿菌0157 :Η7協(xié)同抑菌作用
圖2a 150 μL大黃提取液對大腸桿菌0157:H7的抑制作用，圖2b 2 μ L的納米銀對大 腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖2c 75 yL大黃提取液和I μ L納米銀對大腸桿菌0157: H7的協(xié)同抑菌作用。圖3大黃提取液與納米銀之比為50:1對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖3a 800 μ L大黃提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖3b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖3c 400 μ L大黃提取液和8 μ L納米銀藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用。圖4大黃提取液與納米銀之比為25:1對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖4a 400 μ L大黃提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖4b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖4c 200 μ L大黃提取液和8 μ L納米銀藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用。
具體實施例方式實施例I
I、大黃提取液的制備過程
稱取大黃50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提取4 h,經(jīng)過真空旋轉(zhuǎn)濃縮儀后，用O. 22μ m濾膜除去提取液中的雜質(zhì)和細(xì)菌，最后用高效液相色譜法測得提取液中大黃素含量為I. 92 μ g/go2、水溶性銀納米顆粒制備
取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。3、大黃提取液與水溶性納米銀協(xié)同抑菌作用。a、細(xì)菌的培養(yǎng)
挑取LB瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養(yǎng)基中，置于37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)4h后。取I mL上述菌液用O. 1%的蛋白胨水連續(xù)稀釋三個梯度，最終的菌液大約為IO6 CFU/mL。b、水溶性納米銀與大黃提取液在抑菌性能上的協(xié)同作用
分別取I mL上述已稀釋好的菌液于I. 5 mL滅菌的離心管中，向I號離心管中分別加入200 μ L大黃提取液(大黃素含量為I. 92 μ g/g,下同)，向2號離心管中加入2 μ L濃度為10 mg/mL的水溶性納米銀，向3號離心管中加入100 μ L大黃提取液和I μ L濃度為10mg/mL水溶性納米銀，4號離心管作為空白對照，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等，差量用O. 1%的蛋白胨水補齊，置于37°C搖床培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 h。每組實驗平行三次。c、平板計數(shù)
將實驗組待測液用PBS連續(xù)稀釋兩個梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布
在
LB固體平板上；空白組連續(xù)稀釋四個梯度，從10_2、10_3、10_4三個梯度分別均涂布在LB 固體平板上。平板吹干后，37 1倒置培養(yǎng)12 h，長出菌落后計數(shù)，以30-300個菌落形
成單
位(CFU)為有效的計數(shù)范圍。每毫升原菌液活菌數(shù)=平板計數(shù)*稀釋倍數(shù)*5 實驗結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種中藥抑菌組合物，其特征在于含有大黃提取液、水溶性納米銀；所述大黃提取液制備包括如下步驟加水量為大黃重量的9倍，經(jīng)95 1水浴提取4 h，再經(jīng)過減壓濃縮得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。
2.如權(quán)利要求I所述的組合物，其特在在于抑制大腸桿菌0157:H7時大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為75 100:1。
3.如權(quán)利要求I所述的組合物，其特在在于抑制藤黃微球菌時大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為25 50: I。
4.如權(quán)利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得提取液經(jīng)O.22 μ m濾膜過濾。
5.如權(quán)利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得提取液經(jīng)高效液相色譜法對大黃素進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定量。
6.如權(quán)利要求I飛任一所述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求I飛任一所述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥抑菌組合物，屬于中藥領(lǐng)域。抑菌組合物中大黃提取液與水溶性納米銀以比例混合，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌O157:H7、藤黃微球菌起到協(xié)同的作用。本發(fā)明的一種大黃提取物與納米銀抑菌組合物與現(xiàn)有的技術(shù)相比，解決了常規(guī)抑菌方法中大黃抑菌劑用量較大的問題，同時采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)減少了微生物耐藥的發(fā)生機率、降低了其對人體的毒性，更加的安全。
文檔編號A61K33/38GK102895325SQ201210366620
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者許恒毅, 熊勇華, 王力均, 郭亮, 徐鋒, 萬翠香, 魏華, 賴衛(wèi)華 申請人:南昌大學(xué)