專(zhuān)利名稱(chēng)：黃連提取物與納米銀抑菌組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥抑菌組合物。
背景技術(shù)：
黃連屬多年生草本，根莖黃色，常分枝，密生多數(shù)須根，為毛茛科的黃連，三角葉黃連或者云蓮的干燥根莖。其主要分布于四川、貴州、湖南、湖北、陜西南部，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效。鹽酸小檗堿(黃連素)是其主要的有效成分。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究表明黃連具有抗病原微生物作用，同時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃氏菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、銅綠假單胞菌、腦膜炎雙球菌、痢疾桿菌、炭疽桿菌、流感病毒、乙肝病毒等都具有抑制作用。除此之外，黃連還有降血糖、抗腫瘤、抗腹瀉、利膽、抗心律失常、抗炎以及免疫調(diào)節(jié)等作用。黃連因其具有較高的藥用和保健價(jià)值，廣泛引起了人們關(guān)注。
中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌組合物、涂覆劑等一次用劑量大，且長(zhǎng)期使用影響人體健康。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)黃連抑菌組合物一次用量大和長(zhǎng)期使用影響人體健康問(wèn)題，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)納米銀能有效增強(qiáng)黃連提取液抑菌性能，減少黃連抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合物，更加的安全。本發(fā)明的目的在于提供一種黃連納米銀抑菌組合物，減少黃連抑菌劑一次的用劑量和降低藥品對(duì)人體的毒性。本發(fā)明提供如下技術(shù)方案
一種抑菌組合物，含有黃連提取液、水溶性納米銀；
黃連提取液制備包括如下步驟取干藥材黃連，加水量為黃連重量的9倍，經(jīng)95 °C水浴提取4 h，再經(jīng)過(guò)減壓濃縮得到提取液；所得提取液經(jīng)O. 22 μ m濾膜過(guò)濾。所得提取液經(jīng)高效液相色譜法對(duì)黃連素進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定量。抑制大腸桿菌0157:H7時(shí)，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為26. 6 30: I。抑制藤黃微球菌時(shí)，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為廣1.2:1。在算體積時(shí)提取液中黃連素的含量為28 mg/mL，水溶性納米銀濃度為10 mg/mL。水溶性納米銀顆粒粒徑為3 10 nm,納米銀外表包覆兩性聚合物。水溶性納米銀粒徑為3 10 nm,外表為羧基，依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過(guò)濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱(chēng)取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與黃連提取液具有良好的協(xié)同抗菌作用。本發(fā)明還涉及上述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及上述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明水溶性納米銀的應(yīng)用能有效增強(qiáng)黃連抑菌性能，降低黃連抑菌劑的用量，更令人意想不到的是兩種藥物的合用對(duì)抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協(xié)同作用，同時(shí)本抑菌組合物采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)，相對(duì)于使用高劑量的黃連或者水溶性納米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。
圖I黃連提取液與水溶性納米銀之比為30:1的協(xié)同抑菌。圖Ia 2 μ L納米銀對(duì)大腸桿菌0157:H7的抑制結(jié)果，圖Ib 60 μ L黃連提取液 對(duì)大腸桿菌0157:Η7的抑制結(jié)果，圖Ic 30 μ L黃連提取液與I μ L納米銀對(duì)大腸桿菌0157 :Η7的抑制結(jié)果。圖2黃連提取液與水溶性納米銀之比為26. 6:1的協(xié)同抑菌
圖2a表示的是I. 5 μ L納米銀對(duì)大腸桿菌0157:Η7的抑菌結(jié)果，圖2c表示的是40 μ L黃連提取液對(duì)大腸桿菌0157:H7的抑菌結(jié)果，圖2c表示的是O. 75 μ L納米銀、20 μ L黃連提取液混合物對(duì)大腸桿菌0157 :Η7的協(xié)同抑菌結(jié)果。圖3黃連提取液與水溶性納米銀之比為I的協(xié)同抑菌
圖3a表示的是16 μ L納米銀對(duì)藤黃微球菌的抑菌結(jié)果，圖3b表示的是16 yL黃連提取液對(duì)藤黃微球菌的抑菌結(jié)果，圖3c表示的是8 μ L納米銀、8 μ L黃連提取液對(duì)藤黃微球菌的協(xié)同抑菌結(jié)果。圖4黃連提取液與水溶性納米銀之比為5:8的協(xié)同抑菌
圖4a表示的是16 μ L納米銀對(duì)藤黃微球菌的抑菌結(jié)果，圖4b表示的是10 μ L黃連提取液對(duì)藤黃微球菌的抑菌結(jié)果，圖4c表示的是8 μ L納米銀與5 μ L黃連提取液對(duì)藤黃微球菌的協(xié)同抑菌結(jié)果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
I、黃連提取液的制備過(guò)程稱(chēng)取干藥材黃連50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提取4h，再經(jīng)過(guò)真空旋轉(zhuǎn)濃縮儀濃縮得到提取液，經(jīng)O. 22 μ m濾膜過(guò)濾后，最后再用高效液相色譜法測(cè)得提取液中黃連素的含量為28 mg/mL。2、水溶性銀納米顆粒制備
取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過(guò)濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱(chēng)取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。3、黃連提取液與水溶性納米銀協(xié)同抑菌作用。a細(xì)菌的培養(yǎng)
挑取LB瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養(yǎng)基中，置于37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)4h后。取I mL上述菌液用O. 1%的蛋白胨水連續(xù)稀釋三個(gè)梯度，最終的菌液大約為IO6 CFU/
Π Τ, ηb水溶性納米銀與黃連提取液在抑菌性能上的協(xié)同作用
分別取I mL上述已稀釋好的菌液于I. 5 mL滅菌的離心管中，向I號(hào)離心管中分別加Λ 60 μ L黃連提取液(黃連素的含量為28 mg/mL,下同)，向2號(hào)離心管中加入2 μ L濃度為10 mg/mL的水溶性納米銀，向3號(hào)離心管中加入30 μ L黃連提取液和I μ L濃度為10mg/mL水溶性納米銀，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等，差量用O. 1%的蛋白胨水補(bǔ)齊。置于37 °C培養(yǎng)2 h。每組實(shí)驗(yàn)平行三次。c平板計(jì)數(shù)
將實(shí)驗(yàn)組待測(cè)液用PBS連續(xù)稀釋兩個(gè)梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布在LB固體平板上；空白組連續(xù)稀釋四個(gè)梯度，從10_2、10_3、10_4三個(gè)梯度分別均涂布
在
LB固體平板上。平板吹干后，37°C倒置培養(yǎng)12 h，長(zhǎng)出菌落后計(jì)數(shù)，以30-300個(gè)菌落形成單位(CFU)為有效的計(jì)數(shù)范圍。每毫升原菌液活菌數(shù)=平板計(jì)數(shù)*稀釋倍數(shù)*5實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種黃連提取物與納米銀抑菌組合物，其特征在于含有黃連提取液、水溶性納米銀；所述黃連提取液制備包括如下步驟加水量為黃連重量的9倍，提取時(shí)間為4 h，再經(jīng)過(guò)減壓濃縮得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過(guò)濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱(chēng)取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。
2.如權(quán)利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于抑制大腸桿菌0157:H7時(shí)，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為26. 6 30: I。
3.如權(quán)利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于抑制藤黃微球菌時(shí)，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為廣1.2:1。
4.如權(quán)利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得提取液經(jīng)O.22 μ m濾膜過(guò)濾。
5.如權(quán)利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得提取液經(jīng)高效液相色譜法對(duì)黃連素進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定量。
6.如權(quán)利要求f5任一所述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157 :H7中的應(yīng)用。
7.如權(quán)利要求f5任一所述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了黃連提取物與納米銀抑菌組合物，屬于中藥領(lǐng)域。抑菌組合物中黃連提取液與水溶性納米銀兩種藥物的合用對(duì)抑制大腸桿菌O157:H7、藤黃微球菌起到協(xié)同的作用。本發(fā)明的一種黃連提取物與納米銀抑菌組合物與現(xiàn)有的技術(shù)相比，解決了常規(guī)抑菌方法中黃連抑菌劑用量較大的問(wèn)題，同時(shí)采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)減少了微生物耐藥的發(fā)生機(jī)率、降低了其對(duì)人體的毒性，更加的安全。
文檔編號(hào)A61P31/02GK102895341SQ20121036651
公開(kāi)日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者許恒毅, 楊林, 魏華, 曲鋒, 徐鋒, 萬(wàn)翠香, 熊勇華, 賴(lài)衛(wèi)華 申請(qǐng)人:南昌大學(xué)