專利名稱：一種發(fā)酵煙草提取物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及煙用香料及制備方法，尤其是一種應用煙葉表面產香菌種制備的發(fā)酵煙草提取物以及它的制備方法。
背景技術：
目前，煙草工業(yè)異地化加工的問題逐漸突出，煙葉原料存在不足，特征性強的煙用香料能夠幫助卷煙企業(yè)有效保證品牌的異地加工，實現產品的均質化。煙用較多的煙草類提取物一般采用傳統(tǒng)方法制得，即采用單體煙葉或復配的葉組為原料通過水、醇提取或分子蒸餾得到，這樣提取的煙草類提取物特征較弱，添加后對卷煙的改善有一定局限。采用優(yōu)質煙葉陳化過程中的產香菌株發(fā)酵煙草提取物進行具有相應煙葉特征的煙草提取物的制備尚未見報道。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種特征性強的發(fā)酵煙草提取物及其制備方法，該方法制備的發(fā)酵煙草提取物添加到卷煙中可以增強卷煙的特征。
本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現的發(fā)酵煙草提取物是按以下方法制取以特征突出的代表性煙葉為篩選對象，采用篩選固體培養(yǎng)基，通過微生物純化方法獲取煙葉表面的產香菌株，并以產香菌株為出發(fā)菌種，采用篩選用的液體培養(yǎng)基20～40℃活化1小時～7天制得種子液；以滅菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)基0.5％～50％的接種量添加種子液，在溫度10～50℃下發(fā)酵1小時～7天，得到發(fā)酵液，發(fā)酵液用以下方法提取①對發(fā)酵液直接進行濃縮即得發(fā)酵煙草提取物成品；②對發(fā)酵液進行濃縮后，用醇類溶劑沉淀，除去沉淀物后，濃縮回收醇類溶劑得膏狀發(fā)酵煙草提取物成品；③對發(fā)酵液進行脂溶性溶劑萃取，萃取液濃縮后回收溶劑得到發(fā)酵煙草提取物成品。
本發(fā)明的制備方法中，其中所述的篩選培養(yǎng)基為添加0.1％～20％煙草水提物或煙膏水稀釋液的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基。
本發(fā)明的制備方法中，其中所述的微生物純化方法為稀釋涂布平板法、平板劃線分離法及單細胞挑取法。
本發(fā)明的制備方法中，其中所述的沉淀所用醇類溶劑為水與乙醇的復合溶劑；其中所述的脂溶性溶劑為石油醚、二氯甲烷。
本發(fā)明的液體發(fā)酵培養(yǎng)基可以為單體煙葉水提物、復配煙葉水提物，也可以是煙膏產品的水稀釋液，也可以在上述水提物與稀釋液中添加酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氫鉀。
本發(fā)明的發(fā)酵煙草提取物與現有的煙草提取物相比，由于經過了煙草表面產香菌的發(fā)酵產香過程，所得的發(fā)酵煙草提取物添加至卷煙中能夠增加煙草的本香，強化卷煙中某種煙葉的特征。
具體實施例方式
實施例1以津巴布韋煙葉為產香菌株篩選對象，采用添加10％津巴布韋煙葉(10倍)水提液的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進行篩選，平板劃線分離法純化后得到津巴布韋煙葉表面優(yōu)勢芽孢桿菌，以牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基接種該優(yōu)勢芽孢桿菌，30℃培養(yǎng)2天，制取芽孢桿菌種子液；以云南煙末1kg為原料，添加10kg水，80℃水浴提取2小時，過濾后得到水提物，補充水提物重量的1％葡萄糖、0.5％磷酸二氫鉀，115℃滅菌30min后冷卻至室溫，成為液體發(fā)酵培養(yǎng)基；按液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的5％接種上述芽孢桿菌種子液，30℃通氣發(fā)酵3天；發(fā)酵液65℃減壓濃縮得到粗膏，加入3倍體積50％乙醇回溶，冷凍過夜，過濾除去不溶物，55℃減壓濃縮得到具有津巴布韋特征的發(fā)酵煙草提取物產品。
實施例2同實施例1方法篩選菌種，并進行發(fā)酵液、粗膏的制備；粗膏經過0.5倍石油醚萃取其香氣成分三次，萃取液合并，經過40℃減壓濃縮后得到澄清透明液體，即得發(fā)酵煙草提取物產品。
實施例3以云南紅大煙葉為產香菌株篩選對象，采用添加5％紅河煙膏的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進行篩選，稀釋涂布平板法純化后得到表面優(yōu)勢短桿菌；以牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基接種該優(yōu)勢短桿菌，25℃培養(yǎng)1天，制取短桿菌種子液；紅河煙膏1kg，用5kg水稀釋后115℃滅菌30min，冷卻至室溫，成為液體發(fā)酵培養(yǎng)基；按液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的5％接種上述短桿菌種子液，30℃通氣發(fā)酵3天，發(fā)酵液65℃減壓濃縮得到具有紅大特征的發(fā)酵煙草提取物產品。
實施例4以土耳其香料煙為產香菌株篩選對象，采用添加5％土耳其香料煙(10倍)水提液的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基進行密封搖瓶篩選，富集表面厭氧菌，3天后稀釋涂布平板篩選得到表面兼性厭氧芽孢桿菌；以添加5％土耳其香料煙(10倍)水提液的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基接種該兼性厭氧芽孢桿菌，30℃培養(yǎng)2天，制取兼性厭氧芽孢桿菌種子液；復配煙膏(保山香料煙膏和紅河煙膏按1∶8重量比混合)500g，用2.5kg水稀釋后115℃滅菌30min，冷卻至室溫為液體發(fā)酵培養(yǎng)基；按液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的2％接種上述厭氧芽孢桿菌種子液，30℃密閉培養(yǎng)2天，65℃減壓濃縮發(fā)酵液，得到粗膏，通過30％乙醇沉淀，60℃減壓濃縮回收乙醇后得到香料煙特征的發(fā)酵煙草提取物產品。
實施例5以巴西煙葉為產香菌株篩選對象，采用添加10％巴西煙葉(10倍)水提液的PDA培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，采用單細胞挑取法得到煙葉表面酵母菌純菌株；以添加2％巴西煙葉(10倍)水提液的PDA液體培養(yǎng)基接種該酵母菌，30℃培養(yǎng)7天，制取酵母種子液；復配煙葉(玉溪煙葉和紅河煙葉按1∶1重量比混合)1kg，添加8kg水，80℃水浴提取2小時，過濾后得到水提物，補充水提物重量的0.5％酵母膏、0.1％蛋白胨，115℃滅菌30min后冷卻至室溫，成為液體發(fā)酵培養(yǎng)基；按液體發(fā)酵培養(yǎng)基重量的5％接種上述酵母菌種子液，30℃通氣培養(yǎng)1天后密閉轉入后發(fā)酵，6天后取出，發(fā)酵液65℃減壓濃縮后得到粗膏；通過75％乙醇沉淀后，除去沉淀物，55℃減壓濃縮得到發(fā)酵煙草提取物產品。
實施例6同實施例5方法篩選酵母菌，并進行發(fā)酵液、粗膏的制備；粗膏經過0.5倍二氯甲烷萃取其香氣成分三次，萃取液合并，經過40℃減壓濃縮后得到澄清透明液體，即得發(fā)酵煙草提取物產品。
權利要求
1.一種發(fā)酵煙草提取物，其特征在于按以下方法制取以特征突出的代表性煙葉為篩選對象，采用篩選培養(yǎng)基，通過微生物純化方法獲取煙葉表面的產香菌株；并以產香菌株為出發(fā)菌種，采用篩選用的液體培養(yǎng)基20～40℃活化1小時～7天制得種子液；以滅菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)基0.5％～50％的接種量添加種子液，在溫度10℃～50℃下發(fā)酵1小時～7天，得到的發(fā)酵液進行濃縮，或者對濃縮液經過醇類溶劑沉淀，除去沉淀物后進行濃縮提取，或者對濃縮液進行脂溶性溶劑萃取，萃取液進行濃縮，得到發(fā)酵煙膏產品。
2.根據權利要求1所述的發(fā)酵煙草提取物，其特征在于所述的特征突出的煙葉是津巴布韋煙葉、紅大煙葉、土耳其香料煙、巴西煙葉。
3.根據權利要求1所述的發(fā)酵煙草提取物，其特征在于所述的微生物純化方法為稀釋涂布平板法、平板劃線分離法及單細胞挑取法。
4.根據權利要求1所述的發(fā)酵煙草提取物，其特征在于用于篩選的培養(yǎng)基為添加0.1％～20％煙草水提物或煙膏水稀釋液的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基。
5.根據權利要求1所述的發(fā)酵煙草提取物，其特征在于所述的液體發(fā)酵液為煙葉水提物或煙膏的水稀釋液，或在上述水提物與稀釋液中添加酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氫鉀。
6.根據權利要求1所述的發(fā)酵煙草提取物，其特征在于用于提取的醇類溶劑為水與乙醇的復合溶劑。
7.根據權利要求1所述的發(fā)酵煙草提取物，其特征在于用于提取的脂溶性溶劑為石油醚、二氯甲烷。
全文摘要
本發(fā)明是一種煙用發(fā)酵煙草提取物及其制備方法。是按以下方法制備而得的以特征突出的代表性煙葉為篩選對象，通過微生物純化技術獲取煙葉表面的產香菌株。并以產香菌株為出發(fā)菌種，活化后添加至滅菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵后通過直接濃縮或醇類溶劑沉淀后濃縮或脂溶性溶劑萃取后濃縮得到。本發(fā)明與現有的煙草提取物相比具有以下優(yōu)點采用了煙草陳化過程的產香菌株，該類菌株對煙堿耐受性高，對煙草類發(fā)酵培養(yǎng)基的適用性好，所得的發(fā)酵煙草提取物嗅香突出，能夠強化卷煙中某種煙葉原料的特征。
文檔編號C11B9/00GK1903089SQ200610048609
公開日2007年1月31日 申請日期2006年8月8日 優(yōu)先權日2006年8月8日
發(fā)明者李仙, 李秀紅, 劉煜宇, 陳嶺峰, 王定偉, 李成斌, 張曉龍, 尹開云 申請人:云南瑞升煙草技術(集團)有限公司