專利名稱：一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及牛奶制品的加工，尤其涉及一種牦牛乳水解乳蛋白的加工方法。
背景技術(shù)：
國外只有美國Gibco和Hyclone兩家公司利用牛乳生產(chǎn)水解乳蛋白，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷歐、 美、亞等國家。國內(nèi)水解乳蛋白的生產(chǎn)為空白，幾乎所有科研與生產(chǎn)用戶都依賴進(jìn)口產(chǎn)品， 進(jìn)口產(chǎn)品價格昂貴，大大增加了運(yùn)營成本。而且，傳統(tǒng)工藝水解牛乳使用強(qiáng)酸和強(qiáng)堿水解干酪素，一方面酸和堿都是化學(xué)物質(zhì)，造成一定的環(huán)境污染，另一方面，強(qiáng)酸和強(qiáng)堿作用強(qiáng)烈，水解程度不易掌握，容易破壞氨基酸，水解率低，失敗率高。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有牦牛乳利用的缺陷，提供了一種經(jīng)濟(jì)效益高、方法可操作性強(qiáng)的牦牛乳水解乳蛋白的加工方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案 一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，包括如下步驟
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，脫脂機(jī)脫脂，收集牦牛乳；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入氯化鈣溶液，調(diào)PH5.5 6. 5，然后放置于35 45°C水浴，加入小牛凝乳酶溶液，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素烘干，粉碎；
(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按4-8%濃度將凝乳酶干酪素溶于pH9.0 11. 0的水中，加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液PH維持在7. 5 8. 5，按E:S=1: (6 14)比例加入胰蛋白酶，水解，使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)70%。 再將溶液PH調(diào)至8. 5 9. 5，按E :S=1: (40 80)比例加入復(fù)合酶，水解；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)98%;所述復(fù)合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、 胰蛋白酶以質(zhì)量比1 (1 3) (0. 5 1. 5)混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液濾除變性的酶類和未水解的蛋白；
(7)、純化超濾，收集濾過液；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調(diào)節(jié)pH值為6.8 7. 2 ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在110 150°C下噴霧干燥，水分小于5%，得水解乳蛋白成品。使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度大于90%，即為合格；
優(yōu)選地，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比0. 0005 0. 0015%，所述胰蛋白酶的加入量標(biāo)準(zhǔn)為E :S=1:10，復(fù)合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質(zhì)量比1:2:1混合。本發(fā)明水解乳蛋白的方法用時短，使用雙酶水解較酸、堿水解，反應(yīng)條件溫和，水解徹底，水解率高。本發(fā)明的主要目的是充分利用當(dāng)?shù)仃笈Ｈ橘Y源，對現(xiàn)有牛乳和干酪素產(chǎn)品進(jìn)行科技創(chuàng)新，產(chǎn)業(yè)升級，使用雙酶水解酪蛋白，經(jīng)并使用生物級的小牛凝乳酶干酪素研制高附加值的水解乳蛋白和細(xì)胞用培養(yǎng)基產(chǎn)品。由生物級的凝乳酶干酪素所酶解而得的水解乳蛋白，酶解后所獲得的生物活性肽不僅附加值高，安全性好，工藝簡單，而且容易進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖
對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。實(shí)施例1
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，步驟如下
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，用脫脂機(jī)脫脂，轉(zhuǎn)速3000 4000r/min，離心時間25 35min,濾除沉淀，收集上清液；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入濃度為0.01 0. 02mol/ L的氯化鈣，調(diào)PH5. 5 6，然后放置于39 41°C水浴保溫25 35min，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比為0. 001% (即每100000ml的牛乳中加入Ig小牛凝乳酶)，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素于60 70°C真空干燥箱中烘干4 他，粉碎顆粒度為200
目；
G)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按6%濃度將凝乳酶干酪素溶于ρΗΙΟ.Ο的水中， 60 70°C加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液pH維持在7. 8 8. 0,溫度55°C，按E S=I: 10比例加入胰蛋白酶，水解證；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)70%。再將溶液pH調(diào)至9. 0 9. 5，溫度55°C，按E :S=1:60比例加入復(fù)合酶，維持紐；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)98%;復(fù)合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質(zhì)量比1:2:1混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸l(wèi)Omin，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液以3800r/min離心過濾30min，除去變性的酶類和未水解的蛋白；
(7)、純化使用截留分子量為IKD的膜包超濾，收集濾過液，去除水解不徹底的大分子量的多肽；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調(diào)節(jié)pH值為7.0 7. 2 ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在120 140°C下噴霧干燥，至水分小于5%，得水解乳蛋白成品。所得產(chǎn)品使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度95%。實(shí)施例2
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，步驟如下
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，用脫脂機(jī)脫脂，轉(zhuǎn)速3000 4000r/min，離心時間25 35min,濾除沉淀，收集上清液；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入濃度為0.01 0. 02mol/L的氯化鈣，調(diào)PH6. 0 6. 5，然后放置于35 40°C水浴保溫25 35min，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比為0. 0005% (即每100000ml的牛乳中加入0. 5g小牛凝乳酶)，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素于60 70°C真空干燥箱中烘干4 他，粉碎顆粒度為200
目；
(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按4%濃度將凝乳酶干酪素溶于pH9.0的水中， 60 70°C加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液pH維持在7. 5 8. 0,溫度55°C，按E S=I:6比例加入胰蛋白酶，水解證；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)70%。再將溶液pH調(diào)至8. 5 9. 0，溫度55°C，按E :S=1 40比例加入復(fù)合酶，維持紐；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)96%;復(fù)合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質(zhì)量比1:1:1. 5混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸l(wèi)Omin，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液以3800r/min離心過濾30min，除去變性的酶類和未水解的蛋白；
(7)、純化使用截留分子量為IKD的膜包超濾，收集濾過液，去除水解不徹底的大分子量的多肽；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調(diào)節(jié)pH值為6.8 7. O ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在110 130°C下噴霧干燥，至水分小于5%，得水解乳蛋白成品。所得產(chǎn)品使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度94%。實(shí)施例3
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，步驟如下
(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，用脫脂機(jī)脫脂，轉(zhuǎn)速3000 4000r/min，離心時間25 35min,濾除沉淀，收集上清液；
(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入濃度為0.Ol 0. 02mol/ L的氯化鈣，調(diào)PH6. 1 6. 4，然后放置于41 45°C水浴保溫25 35min，所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比為0. 0015% (即每IOOOOOml的牛乳中加入1. 5g小牛凝乳酶)，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；
(3)、將(2)中凝乳酶干酪素于60 70°C真空干燥箱中烘干4 他，粉碎顆粒度為180
目；
(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按6%濃度將凝乳酶干酪素溶于pHll.O的水中， 60 70°C加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液pH維持在8. 1 8. 5，溫度55°C，按E S=I: 14比例加入胰蛋白酶，水解證；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)70%。再將溶液pH調(diào)至8. 7 9. 2，溫度55°C，按E :S=1 80比例加入復(fù)合酶，維持紐；使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度達(dá)99%;復(fù)合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質(zhì)量比1:3:0. 5混合；
(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸l(wèi)Omin，滅活酶；
(6)、過濾將步驟(5)的料液以3800r/min離心過濾30min，除去變性的酶類和未水解的蛋白；(7)、純化使用截留分子量為IKD的膜包超濾，收集濾過液，去除水解不徹底的大分子量的多肽；
(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調(diào)節(jié)pH值為6.9 7. 1 ；
(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液在130 150°C下噴霧干燥，至水分小于5%，得水解乳蛋白成品。所得產(chǎn)品使用高效液相色譜測定各氨基酸含量，計算水解度，水解度96%。最后應(yīng)說明的是以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)、脫脂以鮮牦牛乳為原料，脫脂機(jī)脫脂，收集牦牛乳；(2)、制備凝乳酶干酪素在步驟(1)脫脂后的牦牛乳中加入氯化鈣溶液，調(diào)PH5.5 6. 5，然后放置于35 45°C水浴，加入小牛凝乳酶溶液，攪拌使牦牛乳凝固得凝乳酶干酪素；(3)、將(2)中凝乳酶干酪素烘干，粉碎；(4)、稱取步驟(3)的凝乳酶干酪素，按4-8%濃度將凝乳酶干酪素溶于pH9.0 11. 0 的水中，加熱使凝乳酶干酪素完全溶解，將溶液PH維持在7. 5 8. 5，按E:S=1: (6 14) 比例加入胰蛋白酶，水解。
2.再將溶液pH調(diào)至8.5 9. 5，按E:S=1: (40 80)比例加入復(fù)合酶，水解；所述復(fù)合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質(zhì)量比1 :(1 3) :(0. 5 1.5)混合；(5)、滅活酶將步驟(4)的水解液煮沸，滅活酶；(6)、過濾將步驟(5)的料液濾除變性的酶類和未水解的蛋白；(7)、純化超濾，收集濾過液；(8)、濃縮將步驟(7)中濾液濃縮，調(diào)節(jié)pH值為6.8 7. 2 ；(9)、干燥將步驟(8)中濃縮液噴霧干燥，使水分小于5%，得水解乳蛋白成品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于所述小牛凝乳酶在牦牛乳中的重量體積比0. 0005 0. 0015%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于所述胰蛋白酶的加入量標(biāo)準(zhǔn)為E :S=1:10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，其特征在于所述復(fù)合酶是指糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以質(zhì)量比1:2:1混合。
全文摘要
一種利用牦牛乳制備水解乳蛋白的方法，屬于牛奶制品加工領(lǐng)域，牦牛乳經(jīng)脫脂、制備凝乳酶干酪素、烘干粉碎、水解、滅活酶、純化、濃縮、干燥等步驟，得水解乳蛋白成品。本發(fā)明水解乳蛋白的方法用時短，使用雙酶水解較酸、堿水解，反應(yīng)條件溫和，水解徹底，水解率高。
文檔編號A23J1/20GK102150741SQ20111005365
公開日2011年8月17日 申請日期2011年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月7日
發(fā)明者喬自林, 令世鑫, 馮玉萍, 馮若飛, 李明生, 馬忠仁 申請人:喬自林, 令世鑫, 馮玉萍, 馮若飛, 李明生, 馬忠仁