專利名稱：纖維癥預防或者治療劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及纖維癥治療劑。具體而言，涉及以編碼轉化生長因子(TGF)-P I的基因為靶的小干擾RNA (siRNA)和使用了它的醫(yī)藥品。
背景技術：
肺纖維癥是指由于過量的膠原和其它細胞外基質(zhì)的蓄積而導致肺組織纖維化的癥狀。在肺纖維癥中，特發(fā)性肺纖維癥是中位生存期平均為3年、5年生存率為20 40%的預后不良的慢性難治性疾病。作為肺纖維癥的治療，可使用類固醇藥物、免疫抑制劑，但目前沒有可改善預后這樣的有效的治療法，因此需要開發(fā)新的治療藥。近年來，逐漸清楚許多疾病是由于基因而發(fā)病的，關于肺纖維癥，也報告了許多基因的參與(專利文獻I 4、非專利文獻I 6)。作為參與肺纖維癥的主要因子，報告有TGF-^ I (專利文獻I 2、非專利文獻2 6)、Smad3 (非專利文獻1)、MCP_1 (專利文獻3)等。另一方面，核酸特別是siRNA引起與細胞中存在的特定序列相同或者幾乎相同的基因的mRNA的降解，阻礙靶基因的表達(RNA干擾)。因此，由RNA干擾所產(chǎn)生的阻礙靶基因表達的功能在減少或治療由特定的基因或基因組的異常表達所引起的疾病癥狀方面是有用的。關于肺纖維癥相關基因，也進行了使用siRNA來嘗試抑制該基因的表達的報告(專利文獻I 4、非專利文獻I 6)。然而，至今為止報告的技術僅顯示了 siRNA序列對實驗動物(小鼠、大鼠)的疾病相關基因的抑制效果，而對人類基因沒有充分地顯示出特異的效果。另外，關于siRNA的抑制效果，也僅顯示出在200nM (非專利文獻1)、20 500nM (非專利文獻5)的效果，并沒有示出在低濃度下可效率良好抑制肺纖維癥相關基因的表達的核酸分子。關于以TGF-P I基因為靶的siRNA，至今為止報告有數(shù)十種siRNA (專利文獻1、5 7),但 TGF-0 I 的基因的全長為 2346 個喊基(GenBank Accession N0.NM_000660.3),從該基因的全長選出約20mer左右的序列的組合存在無數(shù)個，因此并不容易從中設計出可效率良好抑制該基因的表達的dsRNA、siRNA分子。專利文獻專利文獻1:國際公開第2007/109097號小冊子專利文獻2:國際公開第2003/035083號小冊子專利文獻3:日本特開2007-119396號公報專利文獻4:日本特表2009-516517號公報專利文獻5:國際公開第2009/061417號小冊子專利文獻6:國際公開第2008/109548號小冊子專利文獻7:國際公開第2007/79224號小冊子非專利文獻非專利文獻I:ffang Z, Gao Z, Shi Y，Sun Y，Lin Z, Jiang H，Hou T, Wang Q, YuanX，Zhu X, Wu H，Jin Y，J Plast Reconstr Aesthet Surg，1193-1199，60，2007非專利文獻2:Hwang M, Kim HJj Noh HJj Chang YCj Chae YMj Kim KHj Jeon JPj LeeTS, Oh HK, Lee YS, Park KK, Exp Mol Pathol, 48-54，81，2006非專利文獻3:Takabatake Y, Isaka Y, Mizui Μ, Kawachi H, Shimizu F，ItoΤ, Hori Μ, Imai Ε, Gene Ther,965-973，12，2005非專利文獻4:Xu W，Wang Lff, Shi JZ, Gong ZJ, HepatobiliaryPancreat DisInt, 300-308, 8, 2009非專利文獻5:Liu XJ, Ruan CM, Gong XF, Li XZ, Wang HL, WangMW, YinJQ,Biotechnol Lett, 1609-1615, 27, 2005非專利文獻6:福元重太郎，末次彩子，原田知佳，河口知允，濱田直樹，前山隆茂，桑野和善，中西洋一，日本呼吸器學會雜志，185，46，2008
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及提供對治療纖維癥有效的siRNA和使用它的醫(yī)藥品的技術。本發(fā)明人等為了解決上述課題而進行了深入研究，結果發(fā)現(xiàn)以人類TGF-β I基因為靶的特定的siRNA在人體細胞中能夠有效地抑制TGF-β I的表達，進而在肺纖維癥模型小鼠的肺中，能夠在不誘導干擾素反應的情況下，改善肺纖維癥的癥狀。S卩，本發(fā)明涉及以下I) 19)的內(nèi)容。I) 一種siRNA,以選自序列號I中的喊基序號為1285 1318號的喊基、1398 1418號的堿基、1434 1463號的堿基、1548 1579號的堿基、1608 1628號的堿基、1700 1726號的堿基、1778 1798號的堿基、1806 1826號的堿基以及1887 1907號的堿基中的連續(xù)的17 23個 堿基為靶序列，全長為30個核苷酸以下。2)根據(jù)上述I)的siRNA，其中，siRNA選自以下(a) (S)。(a)由序列號2所示的正義序列和序列號3所示的反義序列形成的siRNA(b)由序列號4所示的正義序列和序列號5所示的反義序列形成的siRNA(c)由序列號6所示的正義序列和序列號7所示的反義序列形成的siRNA(d)由序列號8所示的正義序列和序列號9所示的反義序列形成的siRNA(e)由序列號10所示的正義序列和序列號11所示的反義序列形成的siRNA(f)由序列號12所示的正義序列和序列號13所示的反義序列形成的siRNA(g)由序列號14所示的正義序列和序列號15所示的反義序列形成的siRNA(h)由序列號16所示的正義序列和序列號17所示的反義序列形成的siRNA(i)由序列號18所示的正義序列和序列號19所示的反義序列形成的siRNA(j)由序列號20所示的正義序列和序列號21所示的反義序列形成的siRNA(k)由序列號22所示的正義序列和序列號23所示的反義序列形成的siRNA(I)由序列號24所示的正義序列和序列號25所示的反義序列形成的siRNA(m)由序列號26所示的正義序列和序列號27所示的反義序列形成的siRNA(η)由序列號28所示的正義序列和序列號29所示的反義序列形成的siRNA(ο)由序列號30所示的正義序列和序列號31所示的反義序列形成的siRNA(P)由序列號32所示的正義序列和序列號33所示的反義序列形成的siRNA(q)由序列號34所示的正義序列和序列號35所示的反義序列形成的siRNA(r)由序列號36所示的正義序列和序列號37所示的反義序列形成的siRNA
(s)由序列號54所示的正義序列和序列號55所示的反義序列形成的siRNA3)根據(jù)上述I)或2)的siRNA，其中，從上述siRNA的正義鏈的3’末端的末端側起除去懸突核苷酸的連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA。4)根據(jù)上述I) 3)的siRNA，其中，從上述siRNA的反義鏈的5’末端的末端側起連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA。5)根據(jù)上述I) 4)的siRNA，其中，從上述siRNA的正義鏈的3’末端的末端側起除去懸突核苷酸的連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA，且從反義鏈的5’末端的末端側起連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA。6)根據(jù)上述I) 5)的siRNA，反義鏈的5’末端被單磷酸化或者單硫代磷酸化。7) 一種醫(yī)藥組合物，含有上述I) 6)中任一項的siRNA。8) 一種TGF-P I基因表達抑制劑，含有上述I) 6)中任一項的siRNA作為有效成分。9) 一種纖維癥預防或者治療劑，含有上述I) 6)中任一項的siRNA作為有效成分。10)—種肺纖維癥或肺癌的預防或者治療劑，含有上述I) 6)中任一項的siRNA作為有效成分。11)上述I) 6)的siRNA在制造TGF-@ I基因表達抑制劑中的應用。12)上述I) 6)的siRNA在制造纖維癥預防或者治療劑中的應用。
13)上述I) 6)的siRNA在制造肺纖維癥或肺癌的預防或者治療劑中的應用。14)用于抑制TGF-3 I基因表達的上述I) 6)的siRNA。15)用于預防或者治療纖維癥的上述I) 6)的siRNA。16)用于預防或者治療肺纖維癥或肺癌的上述I) 6)的siRNA。17) 一種TGF-P I基因表達抑制方法，其特征在于，將上述I) 6)的siRNA給予人或動物。18) 一種預防或者治療纖維癥的方法，其特征在于，將上述I) 6)的siRNA給予人或動物。19) 一種預防或者治療肺纖維癥或肺癌的方法，其特征在于，將上述I) 6)的siRNA給予人或動物。本發(fā)明的siRNA能夠以低濃度效率良好地抑制或者阻礙TGF-@ I的表達，因此作為用于預防或者治療纖維癥的醫(yī)藥品是有用的。
圖1是表示siRNA弓丨起的TGF-3 ImRNA的表達抑制率的圖。圖2是表示嵌合體型siRNA引起的TGF-P ImRNA的表達抑制率的圖。圖3是表示鍵合有磷酸或者硫代磷酸的嵌合體型siRNA引起的TGF- ^ ImRNA的表達抑制率的圖。圖4是表示肺纖維癥模型的TGF-P I的表達抑制率的圖。圖5是肺組織切片(H.E.染色和馬松三色染色)的光學顯微鏡照片(倍率:5倍)。
具體實施例方式本發(fā)明的作為siRNA的靶的序列為選自序列號I中的堿基序號為1285 1318號的喊基、1398 1418號的喊基、1434 1463號的喊基、1548 1579號的喊基、1608 1628號的堿基、1700 1726號的堿基、1778 1798號的堿基、1806 1826號的堿基以及1887 1907號的堿基中的連續(xù)的17 23個堿基，但是，其中，作為選自各組的連續(xù)的17 23個堿基，優(yōu)選為19 23個堿基，更優(yōu)選為21個堿基。序列號I所示的堿基序列為TGF- β I的mRNA的堿基序列，該序列信息在GenBank中，被注冊為 GenBank Accession N0.ΝΜ_000660.3。本發(fā)明的siRNA是作為與TGF-β I的mRNA的上述靶序列互補的序列的反義鏈與作為與該反義鏈互補的序列的正義鏈雜交而成的，具有切斷該TGF-β I的mRNA的活性(RNA干擾作用)，具有阻止該mRNA的翻譯的能力，即阻礙該TGF-β I基因的表達的能力。就本發(fā)明的siRNA的核苷酸長度而言，正義鏈、反義鏈可以為相同的核苷酸長度，也可以為不同的核苷酸長度，其全長為30個核苷酸以下，優(yōu)選為25個核苷酸以下，更優(yōu)選為23個核苷酸以下、或者21個核苷酸。另外，正義鏈和反義鏈的兩端可以為平滑末端，各自鏈的3’側也可以為懸突(突出末端)。在此，“平滑末端”是指在雙鏈RNA的末端部分，正義鏈的末端區(qū)域和與其配對的反義鏈的末端區(qū)域在不形成單鏈部分的情況下配對的結構。另外，“懸突”也被稱為懸垂端，是指在雙鏈RNA的末端部分的正義鏈的末端區(qū)域或者與其配對的反義鏈的末端區(qū)域，不存在配對的堿基，因此無法形成雙鏈而存在單鏈部分(突出末端)的結構。突出末端部分的堿基數(shù)為I 10個核苷酸，優(yōu)選為I 4個核苷酸，進一步優(yōu)選為I 2個核苷酸。應予說明，突出末端的長度在兩條鏈之間是沒有關系的，兩條鏈可以為相互不同的長度。突出末端部分的核苷酸可以為RNA，也可以為DNA，優(yōu)選與作為靶的TGF-β I的mRNA互補的堿基，但只要保持上述RNA干擾能力，也可以為非互補的堿基。本發(fā)明的siRNA可以為由2條分別的鏈構成的I個雙鏈RNA，除此之外，也可以為I條鏈通過采用莖-環(huán)結構而形成的雙鏈RNA。S卩，在本發(fā)明的siRNA中，也包括在正義鏈的5’末端和反義鏈的3’末端形成了由2 4個核苷酸構成的環(huán)的RNA、在正義鏈的3’末端和反義鏈的5’末端形成了由2 4個核苷酸構成的環(huán)的RNA。進而，還包括在正義鏈的5’末端和反義鏈的3’末端以及正義鏈的3’末端和反義鏈的5’末端這兩端形成了由2 4個核苷酸構成的環(huán)的RNA。本發(fā)明的siRNA與靶序列優(yōu)選相同，但在可誘導上述RNA干擾的范圍內(nèi)，可以實質(zhì)上相同、即同源的序列。具體而言，只要本發(fā)明的siRNA的反義鏈序列與靶序列雜交，就可以有I個或數(shù)個(例如，2、3、4個)的錯配。即，在本發(fā)明的siRNA中，包括相對于靶序列而言取代、添加或者缺失了 I個或數(shù)個堿基且可誘導RNA干擾的siRNA，或者與靶序列具有85%以上、優(yōu)選為90%以上、更優(yōu)選為95%以上，進一步優(yōu)選為98%以上的序列同源性且可誘導RNA干擾的siRNA。應予說明，就此時的雜交條件而言，將本發(fā)明的siRNA給予體內(nèi)作為醫(yī)藥品使用時，為體內(nèi)的條件，將本發(fā)明的siRNA在體外作為試劑使用時，為中度嚴謹?shù)臈l件或者高度嚴謹?shù)臈l件，作為這樣的條件，例如，可舉出400mM的NaCl、40mM的PIPES pH值6.4、ImM的EDTA、在50°C 70°C、12 160小時下的雜交條件。關于這些條件，為本領域技術人員所公知，在Sambrook et al.(Molecular Cloning:A Laboratory Manual second edition,ColdSpring Harbor Laboratory Press, New York, USA, 1989)中記載。另外，序列同源性通過Lipman-Pearson 法(Science, 227，1435, (1985))等計算即可，例如，使用遺傳信息處理軟件Genetyx-Win (Ver.5.1.1 ;軟件開發(fā))的同源性分析(Search homology)程序,使 Unit size to compare (ktup)為 2,進行查詢,從而算出。另外，在本發(fā)明的siRNA中，只要可誘導上述RNA干擾，就包括將正義鏈或者反義鏈中的任一方的核苷酸全部轉換成DNA的siRNA (雜合體型)、將正義鏈和/或反義鏈的一部分核苷酸轉換成DNA的siRNA (嵌合體型)。在此，從RNA核苷酸向DNA的轉換是指從AMP向dAMP、從GMP向dGMP、從CMP向dCMP、從 UMP 向 dTMP 轉換。作為雜合體型，優(yōu)選將正義鏈的核苷酸轉換成DNA的siRNA。作為嵌合體型，可舉出將下游側(正義鏈的3’末端側，反義鏈的5’末端側)的一部分核苷酸轉換成DNA的siRNA。具體而言，可舉出將正義鏈的3’末端側和反義鏈的5’末端側的核苷酸一并轉換成DNA的siRNA、將正義鏈的3’末端側或者反義鏈的5’末端側中任一方的核苷酸轉換成DNA的siRNA。另外，轉換的核苷酸長度優(yōu)選為直到與RNA分子的1/2長度相當?shù)暮塑账釣橹沟娜我忾L度，例如可舉出從末端起，I 13個核苷酸、優(yōu)選I 10個核苷酸。從RNA干擾效果、RNA分子的穩(wěn)定性、安全性等角度出發(fā)，作為優(yōu)選的嵌合體型siRNA，例如可舉出核苷酸長度分別為19 23個核苷酸且將下述長度的核苷酸以任意數(shù)目連續(xù)地轉換成DNA的siRNA,即，從正義鏈的3’末端側起除去了懸突核苷酸的I 10個核苷酸、優(yōu)選I 8個核苷酸，更優(yōu)選I 6個核苷酸以及從反義鏈的5’末端側起I 10個核苷酸、優(yōu)選I 8個核苷酸，更優(yōu)選I 6個核苷酸(參照后述〔表2〕)。另外，此時，更優(yōu)選正義鏈(排除懸突核苷酸)與反義鏈的DNA轉換數(shù)目相同。另外，就本發(fā)明的siRNA而言，只要可誘導上述RNA干擾，其核苷酸(核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸)就可以為糖、堿基和/或磷酸鹽被化學修飾過的核苷酸類似物。作為堿基被修飾過的核苷酸類似物，例如，可舉出5位修飾尿嘧啶或者胞嘧啶(例如，5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5- (2-氨基)丙基尿嘧啶、5-鹵代胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶等)；8位修飾腺嘌呤或者鳥嘌呤(例如，8-溴鳥嘌呤等);脫氮核苷酸(例如，7-脫氮腺嘌呤等)；0-和N-烷基化核苷酸(例如，N6-甲基腺嘌呤等)等。另外，作為糖被修飾過的核苷酸類似物，例如，可舉出核糖核苷酸的2’-OH被H、OR、R、齒原子、SH、SR、NH2, NHR、NR2、或CN (在此，R表示碳原子數(shù)為I 6的烷基、烯基或者炔基)等取代的2’位糖取代體、5’末端的-OH發(fā)生單磷酸化或者單硫代磷酸化的5’末端磷酸化體、5’末端單硫代磷酸化體。作為磷酸鹽被修飾過的核苷酸類似物，可舉出用硫代磷酸酯基取代硫酸酯基而成的核苷酸類似物，所述硫酸酯基將鄰接的核糖核苷酸進行鍵合。另外，本發(fā)明的siRNA與上述核苷酸類似物不同，特定的取代基或功能性分子可以與從正義鏈的5’末端側或者3’末端側起第I 6號核苷酸(5’末端、3’末端、或者末端以外的內(nèi)部的堿基、糖)中的至少一個直接或者介由接頭鍵合，優(yōu)選該取代基或功能性分子與從正義鏈的5’末端側起第I 6號， 優(yōu)選第I 4號核苷酸中的至少一個鍵合。
在此，作為取代基而言，作為一個例子，可以舉出氨基；巰基；硝基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的烷基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的氨基烷基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的硫代烷基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的烷氧基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的氨基烷氧基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的硫代烷氧基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的單或二烷基氨基；碳原子數(shù)為I 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的烷基巰基；碳原子數(shù)為2 40 (優(yōu)選為2 20，進一步優(yōu)選為4 12)的聚環(huán)氧乙烷基；碳原子數(shù)為3 39 (優(yōu)選為3 21，進一步優(yōu)選為3 12)的聚環(huán)氧丙烷基等。通過鍵合這些取代基，從而能夠顯著增強RNA干擾效果。作為功能性分子，可例示糖、蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、DNA、RNA (包括tRNA)、核酸適體、修飾核苷酸、低分子有機 無機材料、膽固醇、樹枝狀大分子、脂質(zhì)、高分子材料等。通過附加功能性分子，從而能夠兼?zhèn)鋬?yōu)異的RNA干擾效果和基于該功能性分子的有用效果。作為上述糖，例如，可舉出葡萄糖、半乳糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖等單糖，任意組合這些單糖而成的寡糖或者多糖等。作為上述蛋白質(zhì)，可以使用存在于體內(nèi)的蛋白質(zhì)、具有藥理作用的蛋白質(zhì)、具有分子識別作用的蛋白質(zhì)等，作為該蛋白質(zhì)的一個例子，可以舉出輸入蛋白b蛋白質(zhì)、抗生物素蛋白、抗體等。作為上述DNA，具體而言，可例示堿基長度為5 50的DNA，優(yōu)選堿基長度為5 25 的 DNA。
作為上述肽，例如，可舉出八聚精氨酸肽R8、核定位信號肽序列(HIV-lTat、SV40T抗原等)、核輸出信號肽(HIV-lRev、MAPKK等)、細胞膜融合肽等。作為上述修飾核苷酸，例如，可舉出修飾硫代磷酸酯型、硼烷磷酸酯型DNA/RNA等的磷酸骨架而成的修飾核苷酸；2，-OMe 修飾 RNA、2，-F 修飾 RNA 等 2，修飾核苷酸；交聯(lián) LNA (Locked Nucleic Acid)、ENA (2，-0，4’ -C-Ethylene-bridged nucleic acids)等核苷酸的糖分子而成的修飾核苷酸；PNA (肽核酸)、嗎啉代核苷酸等基本骨架不同的修飾核苷酸等(參照國際公開第2008/140126號小冊子、國際公開第2009/123185號小冊子)。作為上述低分子有機 無機材料，例如，可舉出Cy3、Cy5等熒光物質(zhì)；生物素；量子點；金微粒等。作為上述樹枝狀大分子，例如，可舉出聚酰胺-胺型樹枝狀大分子等。作為上述脂質(zhì)，例如，可舉出亞油酸、DOPE (I, 2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine)等，除此之外，也可舉出在國際公開第2009/123185號小冊子中記載的具有2個疏水基團的雙鏈脂質(zhì)。作為上述高分子材料，例如，可舉出聚乙二醇、聚乙烯亞胺等。在此，作為具有功能性分子的基團，可以為功能性分子的殘基本身，另外，也可以為雙官能接頭中的一個官能團與功能性分子的殘基鍵合而成的基團。換言之，在前者的情況下，功能性分子直接鍵合在上述正義鏈RNA的規(guī)定部位，在后者的情況下，功能性分子介由雙官能接頭而鍵合在上述正義鏈RNA的規(guī)定部位。在此，作為雙官能接頭，只要是含有2個官能團的接頭，就沒有特別限制，例如，可使用3-(2-吡啶二硫)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯、N-4-馬來酰亞胺丁酸、S- (2-吡啶二硫)半胱胺、碘代乙酸琥珀酰亞胺酯、N- (4-馬來酰亞胺丁酰氧基)琥珀酰亞胺、N-[5- (3’-馬來酰亞胺丙酰胺基)-1-羧基戊基]亞氨基二乙酸、N- (5-氨基戊基)-亞氨基二乙酸等。關于上述正義鏈RNA中的取代基或者功能性分子或者連接它們的接頭的鍵合部位，沒有特別限定，但優(yōu)選它們?nèi)〈鷺嫵烧x鏈RNA的規(guī)定的核苷酸的磷酸部分的羥基的氫原子而進行鍵合。本發(fā)明的siRNA，具體而言，例如可例示以下(a) (S)所示的由正義序列和反義序列形成的雙鏈RNA分子。表1:A I靶部位堿基號丨
權利要求
1.一種siRNA，其以選自序列號I中的堿基序號為1285 1318號的堿基、1398 1418號的喊基、1434 1463號的喊基、1548 1579號的喊基、1608 1628號的喊基、1700 1726號的堿基、1778 1798號的堿基、1806 1826號的堿基以及1887 1907號的堿基中的連續(xù)的17 23個堿基為靶序列，全長為30個核苷酸以下。
2.根據(jù)權利要求1所述的siRNA，其中，siRNA選自以下(a) (s): Ca)由序列號2所示的正義序列和序列號3所示的反義序列形成的siRNA (b)由序列號4所示的正義序列和序列號5所示的反義序列形成的siRNA (c)由序列號6所示的正義序列和序列號7所示的反義序列形成的siRNA Cd)由序列號8所示的正義序列和序列號9所示的反義序列形成的siRNA Ce)由序列號10所示的正義序列和序列號11所示的反義序列形成的siRNA Cf)由序列號12所示的正義序列和序列號13所示的反義序列形成的siRNA (g)由序列號14所示的正 義序列和序列號15所示的反義序列形成的siRNA (h)由序列號16所示的正義序列和序列號17所示的反義序列形成的siRNA (i)由序列號18所示的正義序列和序列號19所示的反義序列形成的siRNA (j)由序列號20所示的正義序列和序列號21所示的反義序列形成的siRNA (k)由序列號22所示的正義序列和序列號23所示的反義序列形成的siRNA (I)由序列號24所示的正義序列和序列號25所示的反義序列形成的siRNA Cm)由序列號26所示的正義序列和序列號27所示的反義序列形成的siRNA (n)由序列號28所示的正義序列和序列號29所示的反義序列形成的siRNA (O)由序列號30所示的正義序列和序列號31所示的反義序列形成的siRNA (P)由序列號32所示的正義序列和序列號33所示的反義序列形成的siRNA (q)由序列號34所示的正義序列和序列號35所示的反義序列形成的siRNA Cr)由序列號36所示的正義序列和序列號37所示的反義序列形成的siRNA (s)由序列號54所示的正義序列和序列號55所示的反義序列形成的siRNA。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的siRNA，其中，從所述siRNA的正義鏈的3’末端的末端側起除去懸突核苷酸的連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA。
4.根據(jù)權利要求1 3中任一項所述的siRNA，其中，從所述siRNA的反義鏈的5’末端的末端側起連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA。
5.根據(jù)權利要求1 4中任一項所述的siRNA，其中，從所述siRNA的正義鏈的3’末端的末端側起除去懸突核苷酸的連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA，且從反義鏈的5’末端的末端側起連續(xù)的I 10個核苷酸被轉換成DNA。
6.根據(jù)權利要求1 5中任一項所述的siRNA，其中，反義鏈的5’末端被單磷酸化或者單硫代磷酸化。
7.一種醫(yī)藥組合物，含有權利要求1 6中任一項所述的siRNA。
8.一種TGF-P I基因表達抑制劑，含有權利要求1 6中任一項所述的siRNA作為有效成分。
9.一種纖維癥預防或者治療劑，含有權利要求1 6中任一項所述的siRNA作為有效成分。
10.一種肺纖維癥或肺癌的預防或者治療劑，含有權利要求1 6中任一項所述的siRNA作為有效成分。
11.權利要求1 6中任一項所述的siRNA在制造TGF-βI基因表達抑制劑中的應用。
12.權利要求1 6中任一項所述的siRNA在制造纖維癥預防或者治療劑中的應用。
13.權利要求1 6中任一項所述的siRNA在制造肺纖維癥或肺癌的預防或者治療劑中的應用。
14.用于抑制TGF-βI基因表達的權利要求1 6中任一項所述的siRNA。
15.用于預防或者治療纖維癥的權利要求1 6中任一項所述的siRNA。
16.用于預防或者治療肺纖維癥或肺癌的權利要求1 6中任一項所述的siRNA。
17.一種TGF-β I基因表達抑制方法，其特征在于，將權利要求1 6中任一項所述的siRNA給予人或動物。
18.一種預防或者治療纖維癥的方法，其特征在于，將權利要求1 6中任一項所述的siRNA給予人或動物。
19.一種預防或者治療肺纖維癥或肺癌的方法，其特征在于，將權利要求1 6中任一項所述的siRNA給予人或動物。
全文摘要
本發(fā)明提供對治療纖維癥有效的siRNA和使用了它的醫(yī)藥品。一種siRNA，其以選自序列號1中的堿基序號為1285～1318號的堿基、1398～1418號的堿基、1434～1463號的堿基、1548～1579號的堿基、1608～1628號的堿基、1700～1726號的堿基、1778～1798號的堿基、1806～1826號的堿基以及1887～1907號的堿基中的連續(xù)的17～23個堿基為靶序列，全長為30個核苷酸以下。
文檔編號A61P43/00GK103119166SQ20118004486
公開日2013年5月22日 申請日期2011年10月14日 優(yōu)先權日2010年10月14日
發(fā)明者埃斯特班·C·加巴扎, 小林哲, 豐福秀一, 福田綾子, 長谷川哲也 申請人:國立大學法人三重大學, 大塚制藥株式會社