Nptx2基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法

專利名稱：Nptx2基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種新的抑癌基因一一NPTX2 基因及其編碼的蛋白質(zhì)在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤， 一類嚴(yán)重危害人類健康的疾病，其生成涉及多種基因和 基因以外的變化，最常發(fā)生變化的兩類基因?yàn)榘┗蚺c抑癌基因。2008 年，科學(xué)家們通過研究發(fā)現(xiàn)眾多新的與癌癥發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因。美國(guó) 弗吉尼亞聯(lián)邦大學(xué)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了一種稱為&^ /的新抑癌基因，它能夠參 與并抑制一種關(guān)鍵蛋白質(zhì)，這種蛋白質(zhì)在90%的人類癌癥中都過度表達(dá) (Su ZZ(2008). Proc Natl Acad Sci USA. 105:20906-20911)。 Zender等人則 在Cdl雜志上報(bào)道了13種新抑癌基因，其中的大多數(shù)人們之前都沒有意 識(shí)到它們和癌癥有關(guān)(ZenderL(2008). Cell. 135:852-864)。不斷擴(kuò)充的癌
基因與抑癌基因新名單無疑給人們帶來希望的曙光。
神經(jīng)元正五聚蛋白(Neuronal pentraxin, NP, NPTX)有兩個(gè)亞型，NPI CNPTX1)和NPIUNPTX2)。 NPTX2分布較廣，在腦、肝臟、胰腺、心臟、 骨骼肌和睪丸中均有表達(dá)。NPTX2基因位于人染色體7q2L3-q22.1 (GENBANK No.: NM—002523)，編碼431個(gè)氨基酸，NPTX2為一 47.05kDa的蛋白，有一個(gè)信號(hào)肽序列和三個(gè)N糖基化位點(diǎn)，是一種可分 泌蛋白(Hsu YC(1995). Genomics. 28:220-227; Schlimgen AK(1995). Neuton. 14:519-526)。
關(guān)于NPTX2的功能研究在神經(jīng)系統(tǒng)及其相關(guān)疾病中研究相對(duì)較多。 NPTX2基因在胰腺癌中的研究主要集中在表觀遺傳學(xué)方面，發(fā)現(xiàn)該基因 啟動(dòng)子CpG島甲基化參與其表達(dá)調(diào)控(Matsubayashi H(2006). Cancer Res. 66:1208-1217; Sato N(2008), Mod Pathol. 21:238-244; Park JK(2007). Pancreas. 35:e9-15; Parsi ML(2008). Clin Gastroenterol Hepatol. 6:1270-1278)。但尚無關(guān)于該基因?yàn)橐职┗虻膱?bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的抑癌基因一一NPTX2基因及其編 碼的蛋白質(zhì)在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明利用分子克隆及體外實(shí)驗(yàn)等方法，發(fā)現(xiàn)NPTX2基因在制備 抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用方面的新功能，并對(duì)其進(jìn)行了如下 研究
1. 利用實(shí)時(shí)定量PCR、細(xì)胞爬片等方法觀察到NPTX2基因在胰腺癌中 處于低表達(dá)狀態(tài)，且其低表達(dá)至少部分原函是由于該基因啟動(dòng)子的高甲 基化參與了表達(dá)調(diào)控。
2. 通過構(gòu)建真核表達(dá)載體和流式分析瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后人胰腺癌細(xì)胞株的細(xì) 胞凋亡情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染NPTX2基因全長(zhǎng)cDNA后細(xì)胞凋亡增加。
3. 利用上述構(gòu)建好的真核表達(dá)載體和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將含有該基因 的真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入人胰腺癌PANC-1細(xì)胞系中，通過G418篩選獲得 穩(wěn)定表達(dá)株。
4. 進(jìn)行了一系列體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NPTX2基因過表達(dá)可抑制胰腺癌細(xì)胞的 增殖、遷移和侵襲力。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定，NPTX2基因是一種潛在的抑癌基因，可為腫 瘤的分子治療提供新的靶點(diǎn)，亦可與其他藥物、分子治療聯(lián)合應(yīng)用，用 于預(yù)防或治療胰腺癌，或用于制備腫瘤診斷試劑。
本發(fā)明提供了 NPTX2基因及其編碼的蛋白質(zhì)在制備抗腫瘤藥物和 腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用。
上述的腫瘤是胰腺癌。


圖1是實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)NPTX2基因在胰腺癌組織和癌旁正常胰 腺組織中的相對(duì)表達(dá)量。
圖2 AsPC-l、 BxPC-3、 CFPAC、 PANC-1和PaTu8988 5株人胰腺癌細(xì)胞 細(xì)胞爬片結(jié)果，5株人胰腺癌細(xì)胞株均有NPTX2蛋白表達(dá)，在5Aza-dC 處理后5株人胰腺癌細(xì)胞株中NPTX2蛋白的表達(dá)水平均有不同程度的
4增高。
圖3是NPTX2基因全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-NPTX2)轉(zhuǎn)染人胰腺癌 BxPC-3細(xì)胞株(以pcDNA3.1(+)作為對(duì)照)，轉(zhuǎn)染48h后以Annexin V和 PI雙標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，重復(fù)后分析兩組的凋亡率。 圖4是NPTX2基因全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-NPTX2)轉(zhuǎn)染人胰腺癌 BxPC-3細(xì)胞株(以pcDNA3.1(+)作為對(duì)照)，轉(zhuǎn)染48h后以Annexin V和 PI雙標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的代表結(jié)果。
圖5是NPTX2基因全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-NPTX2)轉(zhuǎn)染人胰腺癌
PANC-1細(xì)胞株(以pcDNA3.1(+)作為對(duì)照)，轉(zhuǎn)染48h后以Annexin V和
PI雙標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，重復(fù)后分析兩組的凋亡率。
圖6是NPTX2基因全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-NPTX2)轉(zhuǎn)染人胰腺癌
PANC-1細(xì)胞株(以pcDNA3.1(+)作為對(duì)照)，轉(zhuǎn)染48h后以Annexin V和
PI雙標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的代表結(jié)果。
圖7是NPTX2對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖能力的實(shí)驗(yàn)研究。
圖8是NPTX2對(duì)PANC-1細(xì)胞遷移能力影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(100倍放大)。
A) pcDNA3.1(+)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)鏡下表現(xiàn);B) pcDNA3.1(+)-NPTX2
轉(zhuǎn)染組細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)鏡下表現(xiàn)；C)pcDNA3.1(+)-NPTX2轉(zhuǎn)染組和對(duì)照
組細(xì)胞遷移率統(tǒng)計(jì)結(jié)果； *表示pcDNA3.1(+)組與
pcDNA3.1(+)-NPTX2組有顯著差異(P<0.05)。
圖9是NPTX2對(duì)PANC-1細(xì)胞侵襲力影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。A) pcDNA3.1(+) 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞侵襲力實(shí)驗(yàn)鏡下表現(xiàn)；B) pcDNA3.1(+)-NPTX2轉(zhuǎn)染組細(xì)胞 侵襲力實(shí)驗(yàn)鏡下表現(xiàn)；C)pcDNA3.1(+)-NPTX2轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組細(xì)胞侵 襲力統(tǒng)計(jì)結(jié)果；*表示pcDNA3.1(+)組與pcDNA3.1(+)-NPTX2組有顯 著差異(P<0.05)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的實(shí)施不 僅限于此。 一.材料及方法
(一)材料
人胰腺癌細(xì)胞PANC-1和BxPC-3購自ATCC;細(xì)胞培養(yǎng)用DMEM，胎牛血清，0.05%胰酶溶液，青、鏈霉素溶液購自 GIBICO公司；
含NPTX2全長(zhǎng)cDNA的pReceiver-M15-NPTX2質(zhì)粒購自廣州復(fù)能基因 公司；
載體構(gòu)建所需限制性內(nèi)切酶購自TaKaRa公司；DNA回收試劑盒購自 V-Gene公司；
序列測(cè)定由Invitrogen公司完成；PCR引物由Invitrogen公司合成；
5-aza-2'-deoxycytidine貝勾自Sigma公司；
兔多克隆抗人NPTX2抗體購自Protein Tech Group公司；
細(xì)胞轉(zhuǎn)染所需Lipo2000脂質(zhì)體購自Invitrogen公司；
Annexin V-FITC試劑盒購自上海晶美生物技術(shù)有限公司；
細(xì)胞增殖和遷移實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)板購自Coming公司；細(xì)胞侵襲力實(shí)驗(yàn)所
需培養(yǎng)板購自Millipore公司。
實(shí)施例1:實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)NPTX2基因在胰腺癌組織和癌旁正常
胰腺組織中的表達(dá)
1.組織中總RNA提取
1) RNA超凈臺(tái)開始前紫外線消毒，低溫離心機(jī)預(yù)制冷；
2) 加1000plTrizol于1.5mlEP管內(nèi)，編號(hào)標(biāo)記，放入冰箱待用；
3) 無水乙醇灼燒研缽、鑷子和勺子，待充分冷卻，加入少許液氮；
4) 放入組織，加少許液氮，蓋一次性手套，將組織研磨成粉狀，研磨
過程中需反復(fù)加入液氮；
5) 將組織粉末移入已加100(^1 Trizol的EP管內(nèi)；
6) 將裂解后的細(xì)胞和Trizol—起移入1.5ml Eppendorf離心管中，冰上
放置5 min;
7) 加入200i^l氯仿，劇烈振蕩混勻30s， 4°C ， 12，000g ，離心10min;
8) 將上清液小心轉(zhuǎn)移到無菌RNase-free 1.5ml離心管中，加入700^1異
丙醇，顛倒混勻，冰上放置30min;
9) 12,000g ，離心10min，棄上清，沉淀中加入70。/o乙醇lml;
10) 4°C ， 12，000g ，離心10min，小心棄上清，放置超凈臺(tái)快速晾干；
11) 加入適量去離子甲酰胺或DEPC水溶解沉淀，測(cè)定RNA濃度及純度，分管存放，-S(TC冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 2. RT-PCR操作流程
按照PrimeScript RT reagent Kit說明書(TaKaRa公司)進(jìn)行。
3. 實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)
按照TaKaRa公司提供的SYBR戶mm'x五X7^，試劑盒說明書制備 反應(yīng)體系，將加好體系的PCR反應(yīng)管放入ABI 7500 sequence detection system中PCR反應(yīng)條件為95'C預(yù)變性30 s;繼而95"C變性5 s， 6(TC復(fù) 性34s，共40個(gè)循環(huán)。其中，以GAPDH作為內(nèi)參照，以去核酸無菌水 作為陰性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)所用引物如表l。
表l A^TA2mRNAPCR引物序列和擴(kuò)增片斷大小 基因 引物序列 擴(kuò)增片段
上游5，- CCT CCC ACT CCG CAC AAA C -3'下游
133 bp
5'陽CAC CGC ATA GGA GAA GGG G -3' GylPZ)//上游5'-GCA CCG TCA AGG CTG AGA A-3'下游
145 bp
(內(nèi)參照) 5'- ATG GTG GTG AAG ACG CCA GT -3'
4.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果分析
采用ABI 7500 system soft進(jìn)行分析，每個(gè)標(biāo)本中NPTX2基因的CT
值通過下列公式進(jìn)行計(jì)算ACT二CTnptx2-CTgapdh;而NPTX2基因
的相對(duì)表達(dá)量則用以下公式進(jìn)行計(jì)算AACT = ACT sample-ACT calibrat。r; NPTX2基因的表達(dá)則通過2-^ct計(jì)算得來。經(jīng)spss 15.0軟件 分析發(fā)現(xiàn)。結(jié)果見圖1，胰腺癌組織中的相對(duì)表達(dá)量顯著低于癌旁正常 胰腺組織中的表達(dá)量(尸<0.05)
實(shí)施例2:細(xì)胞爬片方法檢測(cè)NPTX2基因在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況
1. 爬片準(zhǔn)備
1) 爬片釆用一般的蓋玻片；
2) 將爬片用的蓋玻片置于重鉻酸鉀、濃硫酸中浸泡24h;
3) 自來水沖干凈后，再用雙蒸水沖洗；
4) 沖洗干凈后置于烤箱烘干；
5) 經(jīng)多聚賴氨酸涂片后，高壓消毒，烘干，備用；
2. 胰腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)及細(xì)胞爬片
71) 超凈工作臺(tái)及細(xì)胞室用紫外線照1 2小時(shí)；
2) 將蓋玻片置于一次性細(xì)胞培養(yǎng)皿中，每株細(xì)胞分為3個(gè)培養(yǎng)皿進(jìn)行
培養(yǎng)；
3) 胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)，根據(jù)需要種入適當(dāng)密度的細(xì)胞；
4) 待細(xì)胞貼壁后，其中一個(gè)予以去甲基化試劑5-aza-2'-deoxycytidine
(5-Aza-dC)處理，5-Aza-dC終濃度為lpM，每24h更換一次，連 續(xù)培養(yǎng)4天(Sato N(2003). Cancer Res. 63:3735-42.);
5) 干預(yù)結(jié)束后棄培養(yǎng)液；
6) 用lxPBS洗3x3min;
7) 用95°/。乙醇固定15min;
8) 用lxPBS洗3x3min;
9) 1 : 200稀釋兔多克隆抗NPTX2抗體孵育4"C過夜(以lxPBS代替一
抗作為陰性對(duì)照)；
10) 0.01mol/LPBS沖洗3x3min;
11) 加二抗30min;
12) 0.01mol/L PBS沖洗3x3min;
13) 滴加顯色劑DAB，顯色3-5min;
14) 流水沖洗5min，中止反應(yīng)；
15) 0.01mol/LPBS沖洗3x3min;
16) 蘇木精襯染3-5min，流水沖洗3 min終止反應(yīng)；
17) 鹽酸乙醇藍(lán)化30s，流水沖洗3min終止反應(yīng)，烘干后中性樹脂封 片。
結(jié)果見圖2，細(xì)胞爬片結(jié)果提示，AsPC-l、 BxPC-3、 CFPAC、 PANC-1 和PaTu8988 5株人胰腺癌細(xì)胞株均有NPTX2蛋白表達(dá)。在5Aza-dC處 理后5株人胰腺癌細(xì)胞株中NPTX2蛋白的表達(dá)水平均有不同程度的增 咼。
實(shí)施例3: NPTX2基因全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-NPTX2)轉(zhuǎn)染人胰
腺癌細(xì)胞株
1. pcDNA3.1 (+)-NPTX2質(zhì)粒構(gòu)建及純化
參考pReceiver-M15-NPTX2質(zhì)粒圖譜(廣州復(fù)能基因公司，Cat No. EX-T7060-M15)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1(+)圖譜(Invitrogen 公司，Cat.No.V79020)所提供的多克隆酶切位點(diǎn)，選取EcoRI， Notl兩
個(gè)內(nèi)切酶做為酶切位點(diǎn)。經(jīng)過雙酶切后將目的片段插入哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3.1(+)，得到哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-NPTX2
(具體步驟可參考唐華，第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，(2007)29:2240-2242; 劉艷麗，臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，(2006)22:94-96)。
構(gòu)建的pcDNA3.1(+)-NPTX2質(zhì)粒采用QIAGEN Plasmid Mini Kits 進(jìn)行質(zhì)粒抽提、純化。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染
人胰腺癌細(xì)胞PANC-1和BxPC-3培養(yǎng)于含10%滅活肽牛血清的 DMEM培養(yǎng)基中，于37"C， 5%002的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 細(xì)胞，計(jì)數(shù)，接種于24孔板，置37。C 5XC02條件下培養(yǎng)24h，待細(xì)胞 密度生長(zhǎng)至90%按照Lipofectamine 2000脂質(zhì)體說明書(Invitrogen公 司)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
3. 胰腺癌細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
(1) 胰腺癌細(xì)胞G418篩選濃度摸索
將PANC-1細(xì)胞稀釋到1000個(gè)細(xì)胞/ml，在0.2mg /ml 1.2mg/ml的 G418濃度范圍內(nèi)進(jìn)行篩選，選擇出在10~]4天內(nèi)使細(xì)胞全部死亡的最 低G418濃度來進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。(Zheng LD (2005). World J Gastroenterol. 11:79-83;雷毅雄(2002).癌變.畸變.突變.14:171-173.)
(2) 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株的篩選
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24h-48h左右，在DMEM培養(yǎng)基內(nèi)加入G418進(jìn)行篩選， 每3-4d更換一次G418。
4. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)pcDNA3.1(+)-NPTX2對(duì)人胰腺癌細(xì)胞凋亡的影響 實(shí)驗(yàn)設(shè)三組pcDNA3.1(+)轉(zhuǎn)染組、pcDNA3.1(+)組、空白對(duì)照組。每組 設(shè)3個(gè)復(fù)孔，重復(fù)檢測(cè)2次。具體步驟如下
1) 轉(zhuǎn)染48h后，棄培養(yǎng)液，用PBS洗滌，加入胰蛋白酶，消化細(xì)胞；
2) 收集細(xì)胞1000rpm/min離心5min，棄上清，冷PBS洗滌3次，震
蕩加入70%預(yù)冷乙醇混勻，4'C固定過夜；
3) 上機(jī)前細(xì)胞用PBS洗3次；
4) 用lx結(jié)合緩沖液洗滌，再加入無DNA酶污染的RNA酶A (終濃度
50jLig/ml) 10jil和碘化丙碇(PI，終濃度50嗎/ml) 300(il;
5) 室溫避光染色30min后用PBS補(bǔ)齊體積為200(il，上流式細(xì)胞儀進(jìn)行
9檢測(cè)，每份標(biāo)品至少重復(fù)檢測(cè)3次。
結(jié)果見圖3至圖6，圖3: pcDNA3.1(+)轉(zhuǎn)染BxPC-3細(xì)胞組的細(xì)胞 凋亡比率顯著高于pcDNA3.1(+)對(duì)照組CPO.05);圖4: BxPC-3細(xì)胞兩 組細(xì)胞凋亡檢測(cè)部分結(jié)果；圖5: pcDNA3.1(+)轉(zhuǎn)染PANC-l細(xì)胞組的細(xì) 胞凋亡比率顯著高于pcDNA3.1(+)對(duì)照組(尸O.05);圖6: PANC-1細(xì)胞
兩組細(xì)胞凋亡檢測(cè)部分結(jié)果。
實(shí)施例4: NPTX2對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲力檢測(cè)
(1) 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 應(yīng)用已篩選建立的人胰腺癌PANC-1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，實(shí)驗(yàn)方法參
照文獻(xiàn)報(bào)道(Shridhar R(2004). Oncogene, 2004;23:10)，收集1 、 3、 5、 7 和9d細(xì)胞，用0.1%結(jié)晶紫染色，再用33%醋酸溶液洗脫；酶聯(lián)免疫儀 上用570nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度OD值(OD570)。結(jié)果見圖7，在培養(yǎng)第9 天開始NPTX2過表達(dá)可抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖能力(尸<0.05)。
(2) 細(xì)胞遷移及侵襲力實(shí)驗(yàn)
應(yīng)用已篩選建立的人胰腺癌PANC-1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，用帶有PET 膜的24孔板(Coming, Lowell, MA, USA)進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，用24孔細(xì) 胞侵襲分析培養(yǎng)板(Millipore Corp., Bedford, MA， USA)行細(xì)胞侵襲力實(shí) 驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)報(bào)道(ShridharR(2004). Oncogene，2004;23:10)，步
驟如下
收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用無血清培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)，按50，000/200 pi/ 孔接種于24孔板小室；下室內(nèi)加入5%(遷移實(shí)驗(yàn))或10%(侵襲力實(shí)驗(yàn)) 血清作為趨化因子，置37'C 5XC02條件下培養(yǎng)；收集不同時(shí)間細(xì)胞， 用PBS洗滌，用棉簽拭去小室內(nèi)側(cè)膜上附著的細(xì)胞；用0.1%結(jié)晶紫染 色，再用33%醋酸溶液洗脫；酶聯(lián)免疫儀上用570nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 OD值(OD570)。結(jié)果見圖8和圖9，在培養(yǎng)36h開始NPTX2過表達(dá) 可抑制胰腺癌細(xì)胞的遷移能力(戶O.05);在培養(yǎng)48h開始NPTX2過表 達(dá)可抑制胰腺癌細(xì)胞的侵襲力(尸<0.05)。
以上結(jié)果說明NPTX2為一種新的抑癌基因，該基因可用于制備抗 腫瘤藥物。
權(quán)利要求
1、NPTX2基因及其編碼的蛋白質(zhì)在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的NPTX2基因及其編碼的蛋白質(zhì)在制備抗腫瘤 藥物和腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤是胰腺癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類健康，不斷擴(kuò)充的癌基因與抑癌基因新名單無疑給人們帶來希望。本發(fā)明的目的是尋找新的抑癌基因。神經(jīng)元正五聚蛋白(NPTX)有兩個(gè)亞型，NPTX1和NPTX2，其中NPTX2分布較廣，在腦、肝臟、胰腺、心臟、骨骼肌和睪丸中均有表達(dá)。本發(fā)明利用分子克隆及體外實(shí)驗(yàn)等方法，發(fā)現(xiàn)NPTX2基因就是一種新的抑癌基因。本發(fā)明提供了NPTX2基因及其編碼的蛋白質(zhì)在制備抗腫瘤藥物和腫瘤診斷試劑中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K48/00GK101584868SQ20091005445
公開日2009年11月25日 申請(qǐng)日期2009年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月7日
發(fā)明者玲 張, 李兆申, 軍 高 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)