一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物。該組微衛(wèi)星引物的36對(duì)丹頂鶴微衛(wèi)星引物，是針對(duì)三堿基至六堿基重復(fù)的微衛(wèi)星位點(diǎn)設(shè)計(jì)的引物，能夠擴(kuò)增出具有較高多態(tài)性且重復(fù)性好的丹頂鶴微衛(wèi)星座位序列；通過(guò)微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)可實(shí)現(xiàn)丹頂鶴的親子鑒定，未來(lái)可通過(guò)該組引物建立丹頂鶴圈養(yǎng)種群現(xiàn)代遺傳管理檔案，從而為解決丹頂鶴種群管理混亂等現(xiàn)實(shí)問(wèn)題提供理論支持；也可用于野生丹頂鶴的遺傳多樣性分析，為丹頂鶴的保護(hù)做出相應(yīng)貢獻(xiàn)。
【專利說(shuō)明】—組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬基因微衛(wèi)星生物領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物。
【背景技術(shù)】
[0002]丹頂鶴屬于國(guó)家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物，目前全世界的丹頂鶴總數(shù)估計(jì)僅有1500只左右，其中在中國(guó)境內(nèi)越冬的有1000只左右，近年來(lái)隨著人類活動(dòng)區(qū)域的不斷擴(kuò)大以及人類對(duì)土地資源的開(kāi)發(fā)強(qiáng)度不斷增加，丹頂鶴的生存受到了嚴(yán)重的威脅，分布區(qū)域不斷縮小，數(shù)量不斷下降。
[0003]在人們的關(guān)注下丹頂鶴生存環(huán)境得到了一些改善。但仍存在一系列問(wèn)題，嚴(yán)重制約著丹頂鶴種群的進(jìn)一步發(fā)展。棲息地的喪失是丹頂鶴所面臨的一個(gè)主要威脅。環(huán)境污染也是一個(gè)潛在威脅。此外在圈養(yǎng)條件下，丹頂鶴種群的小規(guī)模、再分配，以及非自然選擇的危險(xiǎn)，可能導(dǎo)致遺傳變異的損失以及諸如親子關(guān)系混亂、近親繁殖等問(wèn)題。建立丹頂鶴譜系，并應(yīng)用遺傳標(biāo)記對(duì)丹頂鶴進(jìn)行親子鑒定，遺傳評(píng)估和監(jiān)測(cè)已成為丹頂鶴移地保護(hù)工程的當(dāng)務(wù)之急。
[0004]微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)具有高水平的雜合性和突變率、雙親遺傳模式等優(yōu)勢(shì)，加之便于檢測(cè)，被認(rèn)為是確定人和動(dòng)物間相互關(guān)系以及群體遺傳學(xué)研究的有效遺傳標(biāo)記，是目前用得最為廣泛的分子標(biāo)記之一?，F(xiàn)階段在丹頂鶴的微衛(wèi)星【技術(shù)領(lǐng)域】，僅有19個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)被開(kāi)發(fā)出來(lái):0.HASEGAWA(2000)等在丹頂鶴基因組中找到了 7個(gè)兩堿基重復(fù)微衛(wèi)星位點(diǎn)。Zhou Hong等(2010)年開(kāi)發(fā)了 12個(gè)丹頂鶴微衛(wèi)星位點(diǎn)并采用了 6個(gè)藍(lán)鶴的微衛(wèi)星位點(diǎn)(Meares et al.，2008) 共同進(jìn)行分析。由于目前公開(kāi)發(fā)表的微衛(wèi)星位點(diǎn)不多，并且我們?cè)趯?shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有位點(diǎn)尚不能滿足丹頂鶴親子鑒定的需要，因此更多的丹頂鶴微衛(wèi)星位點(diǎn)需要被開(kāi)發(fā)出來(lái)。
[0005]微衛(wèi)星序列在PCR擴(kuò)增過(guò)程中可能產(chǎn)生滑鏈現(xiàn)象，從而在電泳圖中呈現(xiàn)多個(gè)峰值，不容易判斷該等位基因到底是純合子還是雜合子。有研究顯示重復(fù)單位越短越容易產(chǎn)生滑鏈現(xiàn)象，也就是說(shuō)兩堿基重復(fù)的微衛(wèi)星位點(diǎn)較三堿基重復(fù)、四堿基重復(fù)或更多的堿基重復(fù)微衛(wèi)星位點(diǎn)PCR擴(kuò)增時(shí)滑鏈的概率更大；此外，由于采用微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行物種親子鑒定時(shí)對(duì)位點(diǎn)要求極高，因此研究多針對(duì)具體物種開(kāi)發(fā)而非采用近源物種微衛(wèi)星引物。為了更加準(zhǔn)確的研究丹頂鶴的遺傳多樣性，解決丹頂鶴種群管理混亂的問(wèn)題，迫切需要獲得更多穩(wěn)定性高，多態(tài)信息含量豐富的丹頂鶴微衛(wèi)星標(biāo)記。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物，該組微衛(wèi)星引物能擴(kuò)增出具有較高多態(tài)性且重復(fù)性好的微衛(wèi)星座位序列，微衛(wèi)星引物中的堿基重復(fù)數(shù)為3-6個(gè)，能夠較好的減少PCR擴(kuò)增過(guò)程中出現(xiàn)的滑鏈現(xiàn)象；該組微衛(wèi)星引物穩(wěn)定性高，多態(tài)信息含量豐富，能成功實(shí)現(xiàn)丹頂鶴親子鑒定，未來(lái)可通過(guò)該組引物建立丹頂鶴圈養(yǎng)種群現(xiàn)代遺傳管理檔案，從而為解決丹頂鶴圈養(yǎng)種群管理混亂等現(xiàn)實(shí)問(wèn)題提供理論支持；也可用于野生丹頂鶴的遺傳多樣性分析，為丹頂鶴的保護(hù)做出相應(yīng)貢獻(xiàn)。
[0007]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所釆用的技術(shù)方案是:
[0008]一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物，其特征在于，所述微衛(wèi)星引物為:
[0009]
【權(quán)利要求】
1.:組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物，其特征在于，所述微衛(wèi)星引物為:_
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物，其特征在于，所述微衛(wèi)星引物的PCR反應(yīng)條件為:
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物，其特征在于，所述微衛(wèi)星引物對(duì)應(yīng)的指標(biāo)參數(shù)為:
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一組丹頂鶴基因的微衛(wèi)星引物，其特征在于，所述該組微衛(wèi)星引物成功實(shí)現(xiàn)了丹頂鶴的親子鑒定，未來(lái)可應(yīng)用于丹頂鶴遺傳多樣性分析、圈養(yǎng)種群管理以及野外種群保護(hù)。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104164490SQ201410346013
【公開(kāi)日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年7月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月21日
【發(fā)明者】張亮, 侯蓉, 張志和, 沈富軍, 張文平, 劉玉良 申請(qǐng)人:成都大熊貓繁育研究基地