一種金釵石斛組培苗的培育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種金釵石斛組培苗的培育方法，選取成熟的蒴果，無菌播種到1/2MS+20％馬鈴薯+30g/L蔗糖+4g/L瓊脂粉培養(yǎng)基里，將長出的原球莖轉(zhuǎn)入相同培養(yǎng)基中進行原球莖增殖和分化培養(yǎng)，將形成的小苗轉(zhuǎn)入相同培養(yǎng)基中，進行壯苗和生根培養(yǎng)。每2個月轉(zhuǎn)接1次生長一致的小苗，株高約6.0～8.0厘米的組培苗時，每顆組培苗至少8～10條發(fā)達的根系。本發(fā)明方法簡單實用，獲得的組培苗發(fā)根多、成活率高，且生產(chǎn)成本低，污染率低，達到了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)水平。
【專利說明】一種金釵石斛組培苗的培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種金釵石斛組培苗的培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金釵石斛(Dendrobium nobile)為蘭科石斛屬多年生附生型草本植物，是我國傳統(tǒng)名貴中藥，具有較高的藥用價值，加上其花型奇特，花色艷麗，具有較高的觀賞價值，市場需求量大，但金釵石斛對生境要求比較特殊，自然生長比較緩慢，野生資源供不應(yīng)求。近年來，我國科技工作者利用植物組織培養(yǎng)的方法進行金釵石斛藥材的生產(chǎn)，并成功培育出組培苗。
[0003]目前金釵石斛組織培養(yǎng)主要用帶側(cè)芽的莖段、莖基部和種子作為外植體，以MS、1/2MS和N6為基本培養(yǎng)基、添加6-BA、NAA、IBA、KT和2，4_D等激素和椰乳、香蕉汁、椰汁、馬鈴薯汁等有機添加物進行誘導(dǎo)分化、增殖、生根培養(yǎng)，最終獲得金釵石斛組培苗。但現(xiàn)有的技術(shù)存在以下缺陷:基本培養(yǎng)基中添加的激素種類多，且濃度比較高，影響外植體的生長發(fā)育；選用的培養(yǎng)基種類比較多，過程比較復(fù)雜，增加了工作量；外植體一般選用莖段，導(dǎo)致繁殖速度很慢，無法產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)；轉(zhuǎn)接次數(shù)多，培養(yǎng)時間長，容易產(chǎn)生突變，并污染率也上升；培養(yǎng)基內(nèi)添加的有機附加物的采購價格較貴，導(dǎo)致生產(chǎn)成本提高很多。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，旨在提供一種金釵石斛組培苗的培育方法。
[0005]本發(fā)明采用金釵石斛的種子無菌萌發(fā)、原球莖的形成及苗分化、壯苗與生根培養(yǎng)技術(shù)。選取成熟的蒴果，將種子無菌播種到培養(yǎng)基上，30天后將長出的原球莖轉(zhuǎn)入相同培養(yǎng)基中進行原球莖增殖和苗分化培養(yǎng)，I個半月后將形成約1.0cm小苗轉(zhuǎn)入相同培養(yǎng)基中，進行壯苗和生根培養(yǎng)。每2個月轉(zhuǎn)接I次生長一致的小苗，將株高為6.0?8.0厘米的組培苗進行煉苗移栽，每棵組培苗至少8?10條發(fā)達的根系。
[0006]本發(fā)明具體通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0007]一種金釵石斛組培苗的培育方法，包括以下步驟:
[0008]I)金釵石斛果實的選擇和表面消毒；
[0009]2)金釵石斛種子的無菌萌發(fā)；
[0010]3)原球莖增殖和苗分化培養(yǎng)；
[0011]4)壯苗與生根培養(yǎng)。
[0012]進一步的，
[0013]步驟(I)具體為選擇金釵石斛果實，清水沖洗后，在70%酒精浸泡I分鐘，無菌水沖洗3次，再用0.1 %氯化汞表面消毒10分鐘，無菌水沖洗5次后，用無菌濾紙吸干表面水分。
[0014]步驟(2)具體為將金釵石斛果實切成兩半，去除果皮，將種子植入培養(yǎng)基上，培育金釵石斛原球莖。
[0015]步驟(3)具體為將金釵石斛原球莖轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基上，將原球莖增殖和分化培養(yǎng)。
[0016]步驟⑷具體為將小苗轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基，每2個月轉(zhuǎn)接I次小苗，2?3次后小苗達到6.0?8.0cm高時，進行煉苗、移栽。
[0017]本發(fā)明所述的培養(yǎng)基配方均采用:l/2MS+20%馬鈴薯+30g/L蔗糖+4g/L瓊脂粉，pH值為5.8。
[0018]本發(fā)明組培培育過程中培養(yǎng)條件均為:溫度26±2°C，光照12h/d，光照強度1500 ?2500Lx。
[0019]本發(fā)明的有益效果為:
[0020]I)本發(fā)明采用的培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基，無需添加激素；
[0021]2)整個培養(yǎng)環(huán)節(jié)均采用統(tǒng)一的培養(yǎng)基，無需每一環(huán)節(jié)改變培養(yǎng)基種類，大大促進工作效率；
[0022]3)外植體采用種子，繁殖速度快，容易產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)；
[0023]4)小苗的轉(zhuǎn)接次數(shù)少，培養(yǎng)時間短，有效降低突變率和污染率；
[0024]5)培養(yǎng)基內(nèi)添加的馬鈴薯市場價格較便宜，在產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中有效降低成本。
【具體實施方式】
[0025]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明，以下所述，僅是對本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以下實施例所做的任何簡單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0026]實施例1
[0027]一種金釵石斛組培苗的培育方法，包括以下步驟:
[0028]I)果實表面消毒
[0029]先用軟毛刷輕輕刷洗金釵石斛果實，流水沖洗干凈，然后70%酒精浸泡I分鐘，無菌水沖洗3次，再用0.1 %氯化汞表面消毒10分鐘，無菌水沖洗5次后，把果實放在無菌濾紙上，吸干表面水分。
[0030]2)種子的無菌播種培養(yǎng)
[0031]用無菌解剖刀將金釵石斛果實切成兩半后，用鑷子捏住果皮，輕輕抖動，把種子散落到干的無菌濾紙上，用無菌藥勺將種子播入到培養(yǎng)基l/2MS+20%馬鈴薯+30g/L蔗糖+4g/L瓊脂粉(pH5.8)(下同)上，稍加搖動培養(yǎng)瓶，使種子散布均勻。培養(yǎng)30天后種子開始萌發(fā)，逐漸形成綠色原球莖。培養(yǎng)條件為:溫度(26±2) °C，光照12h/d，光照強度1500?2500Lxo
[0032]3)原球莖的分化、壯苗與生根培養(yǎng)
[0033]金釵石斛原球莖形成后，轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基里進行增殖和分化培養(yǎng)。20天后可觀察到瓶內(nèi)原球莖增殖積累在培養(yǎng)基中，此時把原球莖轉(zhuǎn)接于相同新鮮培養(yǎng)基上，讓原球莖分化成一株或叢生苗，有些小苗基部也產(chǎn)生新的原球莖。
[0034]將小苗轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基里，進行生根培養(yǎng)和壯苗培養(yǎng)，此步驟要注意苗的一致性，同時要淘汰掉劣質(zhì)苗。每2個月按上述方法，在相同的培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)接I次小苗，共轉(zhuǎn)接2?3次后小苗達到6.0?8.0厘米高的瓶苗，同時長出較粗較長根，此時瓶苗可出瓶煉苗、移
Mo
[0035]培養(yǎng)條件為:溫度(26 ±2) 0C，光照12h/d，光照強度1500?25001x。
[0036]該金釵石斛組培培育方法，I個金釵石斛果實可以培養(yǎng)出10000?12500叢組培苗。實際計算如下個果實可以接8?10個母瓶，每I個母瓶可以接5個中母瓶，每I個中母瓶可以接5個二次中母瓶，每I個二次中母瓶接5個子瓶，最終共培育出1000?1250瓶組培苗，一瓶內(nèi)有10叢組培苗，即培育出10000?12500叢組培苗，I叢組培苗3?5株金釵石斛。
[0037]以上過程，共需要6?8月時間。
[0038]與以往金釵石斛繁殖方式相比，本方法采用無激素培養(yǎng)法，且整體培養(yǎng)階段均采用相同的培養(yǎng)基，極大提高了種苗繁殖速度和減少工作量，獲得的組培苗生長健壯，發(fā)根多，移栽成活率高，生產(chǎn)成本低，污染率低，達到了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)水平。
【權(quán)利要求】
1.一種金釵石斛組培苗的培育方法，其特征在于包括以下步驟:1)金釵石斛果實的選擇和表面消毒；2)金釵石斛種子的無菌萌發(fā)；3)原球莖增殖和分化培養(yǎng)；4)壯苗與生根培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金釵石斛組培苗的培育方法，其特征在于:步驟(I)具體為選擇金釵石斛果實，清水沖洗后，在70%酒精浸泡I分鐘，無菌水沖洗3次，再用0.1%氯化汞表面消毒10分鐘，無菌水沖洗5次后，用無菌濾紙吸干表面水分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金釵石斛組培苗的培育方法，其特征在于:步驟(2)具體為將金釵石斛果實切成兩半，去除果皮，將種子植入培養(yǎng)基上，培育金釵石斛原球莖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金釵石斛組培苗的培育方法，其特征在于:步驟(3)具體為將金釵石斛原球莖轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基上，進行原球莖增殖和分化培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金釵石斛組培苗的培育方法，其特征在于:步驟(4)具體為將小苗轉(zhuǎn)入新鮮培養(yǎng)基，每2個月轉(zhuǎn)接I次小苗，2?3次后小苗達到6.0?8.0cm高時，進行煉苗、移栽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1?5中任一項所述的一種金釵石斛組培苗的培育方法，其特征在于:所述的培養(yǎng)基為:l/2MS+20%馬鈴薯+30g/L蔗糖+4g/L瓊脂粉，pH值為5.8。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金釵石斛組培苗的培育方法，其特征在于:所述的培養(yǎng)條件為--溫度26±2°C，光照12h/d，光照強度1500?2500Lx。
【文檔編號】A01H4/00GK104429962SQ201410745002
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月10日
【發(fā)明者】白音, 包英華 申請人:白音, 包英華