專利名稱：基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片及其制備方法和應(yīng)用，屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
海產(chǎn)品砷污染問題一直是食品安全領(lǐng)域關(guān)注的焦點(diǎn)。與陸地生物不同，海洋生物普遍具有較強(qiáng)的砷富集能力，魚類、貝類、海藻等人類經(jīng)常食用的海產(chǎn)品中均含有較高濃度的砷。海產(chǎn)品中的砷主要以有機(jī)砷化物的形態(tài)存在(如甲基胂酸、甲基亞胂酸、砷糖、砷膽堿等)，約占總砷的95%左右。目前，砷糖和砷膽堿的毒性尚未被證實(shí)，但甲基亞胂酸已被證實(shí)具有較強(qiáng)的細(xì)胞和生殖毒性，而甲基胂酸可造成DNA損傷。近年來，海產(chǎn)品砷超標(biāo)的事件屢次見諸報(bào)端，使公眾對海產(chǎn)品的食用安全性產(chǎn)生了懷疑，嚴(yán)重影響了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)和出口貿(mào)易的發(fā)展。因而，控制并監(jiān)測海產(chǎn)品中砷含量具有十分重要的意義。
目前，世界各國對海產(chǎn)品中砷含量都有嚴(yán)格限制，我國海產(chǎn)品中的砷主要采用GB/ T 5009. 11-2003《食品中總砷及無機(jī)砷的測定》中規(guī)定的銀鹽法和氫化物原子熒光光度法進(jìn)行檢測。氫化物原子熒光光度法是我國海產(chǎn)品中砷檢測的主要方法，此方法僅能測定無機(jī)砷和總砷含量，不能檢測有機(jī)砷化物。20世紀(jì)70年代以來，電化學(xué)分析法、光譜法、色譜法、質(zhì)譜法和聯(lián)用技術(shù)等先進(jìn)的儀器測定方法逐步被應(yīng)用于砷檢測。其中，色譜技術(shù)可以準(zhǔn)確分離海產(chǎn)品中的有機(jī)砷化物，但檢測靈敏度不盡如人意；質(zhì)譜法和聯(lián)用技術(shù)(如氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等)能夠準(zhǔn)確測定海產(chǎn)品中各種有機(jī)砷化物的含量，但這兩種方法所需儀器昂貴，且樣品前處理極為復(fù)雜，實(shí)用性不高。由此可見，目前急需建立一種簡便、可靠且高特異性的針對海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物的檢測方法，以保障海產(chǎn)品的食用安全。
分子印跡技術(shù)是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種高分子合成技術(shù)，利用此技術(shù)合成的分子印跡聚合物(MIPs)具有構(gòu)效預(yù)定性、特異識(shí)別性和廣泛應(yīng)用性的特點(diǎn)。由于MPs 對目標(biāo)分子識(shí)別具有高特異性和選擇性，故被用作仿生傳感器的分子識(shí)別元件，這種與目標(biāo)分子的識(shí)別作用可以通過電極或壓電晶體等輸出，并轉(zhuǎn)換成可測信號(hào)，定量特異性檢測樣品中的各種有機(jī)小分子化合物。21世紀(jì)以來，隨著分子印跡技術(shù)的迅速發(fā)展，其存在的問題也日益突顯。目前存在問題表現(xiàn)在以下三方面(1)制備的MII^對目標(biāo)物質(zhì)識(shí)別的特異性不高，易受結(jié)構(gòu)類似物的干擾，造成假陽性結(jié)果。(2)制備MPs的功能單體種類過少。 常用的功能單體僅有甲基丙烯酸、三氟甲基丙烯酸、丙烯酰胺、N-乙烯基吡咯烷酮、2-乙烯基吡啶、4-乙烯基吡啶等，已不能滿足分子印跡技術(shù)發(fā)展的需求；(3)現(xiàn)階段MPs的制備僅停留在試驗(yàn)階段，用于實(shí)際樣品檢測的MII^較少見。因而，增強(qiáng)MII^對目標(biāo)物質(zhì)識(shí)別的特異性，開發(fā)并合成高特異性的特殊單體，構(gòu)建以MPs為識(shí)別元件的傳感器是分子印跡技術(shù)未來發(fā)展的方向。 發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供了一種檢測速度快、靈敏度高的基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片。
本發(fā)明還提供了基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片的制備方法以及利用其進(jìn)行海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物檢測的方法。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的所述的基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片，包括鉬石英晶體基片，其特征在于以基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物作為識(shí)別元件在所述鉬石英晶體基片表面形成反應(yīng)層；所述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物是將海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物模板分子、核酸適配子功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑和有機(jī)溶劑按摩爾比為0.1 2.5 3 0. 1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10的比例聚合而成。
所述功能單體為核酸適配子；所述交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N，N-亞甲基二丙烯酰胺、3，5-二 (丙烯酰胺)苯甲酸、N，N-l，4-亞苯基二丙烯酰胺、二乙烯基苯、N, 0- 二丙烯酰-L-苯丙胺醇、季戊四醇三丙烯酸酯或季戊四醇四丙烯酸酯；所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈；所述致孔劑為二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、異丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亞砜；所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷或四氯化碳。
上述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片的制備方法包括以下步驟(1)選擇能與海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物特異性識(shí)別并能夠合成相應(yīng)分子印跡聚合物的核酸適配子功能單體；(2)將海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物模板分子、核酸適配子功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑和有機(jī)溶劑按摩爾比=0. 1 2. 5 3 0.1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10混合均勻制成基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物溶液；(3)利用基片表面修飾技術(shù)，將基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物修飾到鉬石英晶體基片表面，形成反應(yīng)層。
其中，將基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物修飾到鉬石英晶體基片表面包括以下步驟(1)將鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡1-3小時(shí)，然后用去離子水沖洗3-5遍，再用超聲波清洗3-5min，晾干；(2)將晾干的鉬石英晶體基片浸泡于基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物溶液中5-lOmin取出，用洗脫劑洗脫20-30min，在室溫下干燥5-lOmin ；(3)重復(fù)步驟(2)的過程4-7次，制得所述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片。
為使基片達(dá)到更好的性能，上述制備方法還包括以下步驟將制得的基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片浸入PH6. 8-7. 5的緩沖液，保存在4°C冰箱， 12 24h后使用。5
所述洗脫劑為乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸；所述緩沖液為檸檬酸-磷酸溶液。
利用上述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片進(jìn)行海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物檢測的方法包括以下步驟將按上述任意一種方法制得的基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品中的有機(jī)砷化物進(jìn)行檢測。
利用分子印跡膜基片對海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物進(jìn)行檢測的工作原理為當(dāng)有物質(zhì)在石英晶片上吸附或沉淀時(shí)，晶體震蕩頻率發(fā)生變化(AF)，它與晶片上沉積物的質(zhì)量變化 (ΔΜ)間有簡單的線性關(guān)系。壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片共振頻率的變化AF 與吸附物質(zhì)量m的關(guān)系如下AF=- 2F02(pqyq) -"2m/A其中=Ftl為石英基本振動(dòng)頻率，P q為石英的密度=2. 65X 103kg/m3, μ q為剪切模量= 2. 95 X IO10Pa, A為基片表面積。
本發(fā)明中使用的是AT-cut基片，石英基本振動(dòng)頻率Ftl=QMHz，基片表面積A = 0. 19士0.01 X 10_4m2，因此可以得至IJ AF=-L 83X 108m/A 本發(fā)明的有益效果1.本發(fā)明所開發(fā)的基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片制備方法，將核酸適配子與海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物的特異性識(shí)別機(jī)制以及分子印跡聚合物對海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物的特異性識(shí)別機(jī)制相結(jié)合，具有良好的分子識(shí)別性能，大大提高了檢測海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物的靈敏度和選擇性。
2.將表面修飾技術(shù)應(yīng)用到基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片的制備當(dāng)中，使得基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片的制備具有可控性，提高了基片的靈敏度和準(zhǔn)確性。
3.壓電石英晶體微天平是一種高靈敏度的質(zhì)量檢測器，理論上檢測靈敏度可達(dá)到 ng級(jí)，因此本發(fā)明對海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物檢測具有高特異性、高靈敏度、高檢測精度，比電化學(xué)法檢測靈敏度高，抗干擾能力強(qiáng)。
4.本發(fā)明的分子印跡膜基片的特異性強(qiáng)，樣品中其它非特異性分子對檢測結(jié)果無影響；檢測速度快，完成一個(gè)基本檢測過程僅需1. 5min的時(shí)間，可在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)大量樣本的高通量篩選；成本低，檢測1個(gè)樣品僅需幾分錢。
4.基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片檢測海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物的方法操作快速簡單，反應(yīng)及結(jié)果均由儀器自動(dòng)完成和記錄，避免了主觀因素的影響， 并保證有很好的重復(fù)性，便于現(xiàn)場檢測。
圖1為基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物修飾到壓電石英晶體微天平鉬石英晶體基片表面過程示意圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1(一甲基胂酸)一種基于核酸適配子的一甲基胂酸分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與一甲基胂酸合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子一甲基胂酸，功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，致孔劑氯仿，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑二氯甲烷按摩爾比為 0. 1 2. 5 0. 1 60 0. 05 2. 0混合均勻，得到基于核酸適配子的一甲基胂酸分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡1 小時(shí)，然后用去離子水沖洗3遍，再用超聲波清洗3min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)如圖1所示將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的一甲基胂酸分子印跡聚合物溶液中5min，然后將鉬石英晶體基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脫鉬石英晶體基片表面20min，直至把這一層中的模版分子一甲基胂酸完全洗掉，在室溫下干燥10 min，如此循環(huán)，重復(fù)上述過程5次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH 6.8的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中14h，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的一甲基胂酸分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的一甲基胂酸分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的一甲基胂酸分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品提取液中的一甲基胂酸進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
實(shí)施例2 (二甲基胂酸)一種基于核酸適配子的二甲基胂酸分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與二甲基胂酸合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子二甲基胂酸，功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯，致孔劑二氯甲烷，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑二氯甲烷按摩爾比 0. 5 2. 5 3 50 0. 1 2. 5，混合均勻，得到基于核酸適配子的二甲基胂酸分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡3 小時(shí)，然后用去離子水沖洗5遍，再用超聲波清洗5min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的二甲基胂酸分子印跡聚合物溶液中 lOmin，然后將鉬石英晶體基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脫鉬石英晶體基片表面25min， 直至把這一層中的模板分子二甲基胂酸完全洗掉，在室溫下干燥5min，如此循環(huán)，重復(fù)上述過程6次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH 6.8的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中12h，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的二甲基胂酸分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的二甲基胂酸分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的二甲基胂酸分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品提取液中的二甲基胂酸進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
實(shí)施例3 (甲基亞胂酸)一種基于核酸適配子的甲基亞胂酸分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與甲基亞胂酸合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子甲基亞胂酸，功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑N、N-亞甲基二丙烯酰胺，致孔劑甲醇，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑四氯化碳按摩爾比 2 2. 5 2. 5 55 0.01 10，混合均勻，得到基于核酸適配子的甲基亞胂酸分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡2 小時(shí)，然后用去離子水沖洗4遍，再用超聲波清洗3min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的甲基亞胂酸分子印跡聚合物溶液中 5min，然后將鉬石英晶體基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脫鉬石英晶體基片表面20min， 直至把這一層中的模版分子甲基亞胂酸完全洗掉，在室溫下干燥10 min，如此循環(huán)，重復(fù)上述過程7次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH 6.8的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中16h，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的甲基亞胂酸分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的甲基亞胂酸分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的甲基亞胂酸分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品提取液中的甲基亞胂酸進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
實(shí)施例4 (砷糖PO4)一種基于核酸適配子的砷糖PO4分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與砷糖PO4合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子砷糖PO4,功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑3，5_二(丙烯酰胺)苯甲酸，致孔劑異丙醇，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑二氯甲烷按摩爾比 0. 5 2. 5 1 55 0.05 10，混合均勻，得到基于核酸適配子的砷糖PO4分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡1 小時(shí)，然后用去離子水沖洗3遍，再用超聲波清洗3min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的砷糖PO4分子印跡聚合物溶液中5min， 然后將鉬石英晶體基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脫鉬石英晶體基片表面20min，直至把這一層中的模版分子砷糖PO4完全洗掉，在室溫下干燥10 min，如此循環(huán)，重復(fù)上述過程5 次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH7. 5的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中過夜，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的砷糖PO4分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的砷糖PO4分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的砷糖PO4分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品提取液中砷糖PO4進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
實(shí)施例5 (砷糖0H)一種基于核酸適配子的砷糖OH分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與砷糖OH合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子砷糖0H，功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑N，N-1,4-亞苯基二丙烯酰胺，致孔劑乙腈，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑二氯甲烷按摩爾比為80. 3 2. 5 0. 1 50 0. 05 3混合均勻，得到基于核酸適配子的砷糖OH分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡1 小時(shí)，然后用去離子水沖洗3遍，再用超聲波清洗3min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)如圖1所示將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的砷糖OH分子印跡聚合物溶液中5min，然后將鉬石英晶體基片取出，用水洗脫鉬石英晶體基片表面20min，直至把這一層中的模版分子砷糖OH完全洗掉，在室溫下干燥10 min，如此循環(huán)，重復(fù)上述過程5次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH6. 9的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中14h，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的砷糖OH分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的砷糖OH分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的砷糖OH分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品提取液中的砷糖OH進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
實(shí)施例6 (砷糖SO3)一種基于核酸適配子的砷糖SO3分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與砷糖SO3合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子砷糖SO3,功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑二乙烯基苯，致孔劑二氯甲烷， 引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑二氯甲烷按摩爾比0.5 2. 5 3 50 0. 1 2. 5，混合均勻，得到基于核酸適配子的砷糖S03分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡3 小時(shí)，然后用去離子水沖洗5遍，再用超聲波清洗5min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的砷糖SO3分子印跡聚合物溶液中 lOmin，然后將鉬石英晶體基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脫鉬石英晶體基片表面25min， 直至把這一層中的模板分子砷糖SO3完全洗掉，在室溫下干燥5min，如此循環(huán)，重復(fù)上述過程6次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH 6.8的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中12h，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的砷糖SO3分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的砷糖SO3分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的砷糖SO3分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品提取液中的砷糖SO3進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
實(shí)施例7 (砷糖SO4)一種基于核酸適配子的砷糖SO4分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與砷糖SO4合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子砷糖SO4,功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑N，O-二丙烯酰-L-苯丙胺醇，致孔劑二甲基亞砜，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑四氯化碳按摩爾比 2 2. 5 2. 5 40 0.01 5，混合均勻，得到基于核酸適配子的砷糖SO4分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡2 小時(shí)，然后用去離子水沖洗4遍，再用超聲波清洗3min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的砷糖SO4分子印跡聚合物溶液中5min，然后將鉬石英晶體基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脫鉬石英晶體基片表面20min，直至把這一層中的模版分子砷糖SO4完全洗掉，在室溫下干燥10 min，如此循環(huán)，重復(fù)上述過程7 次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH 7. 1的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中16h，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的砷糖SO4分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的砷糖SO4分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的砷糖SO4分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品提取液中的砷糖SO4進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
實(shí)施例8 (砷膽堿)一種基于核酸適配子的砷膽堿分子印跡膜基片的制備方法，包括以下步驟(1)選擇能與砷膽堿合成分子印跡聚合物的功能單體核酸適配子；(2)將模板分子砷膽堿，功能單體核酸適配子，交聯(lián)劑季戊四醇三丙烯酸酯，致孔劑四氯化碳，引發(fā)劑偶氮二異丁腈，有機(jī)溶劑二氯甲烷按摩爾比 0.5 2.5 3 35 0.05 10，混合均勻，得到基于核酸適配子的砷膽堿分子印跡聚合物溶液；(3)先將壓電石英晶體微天平的鉬石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡1 小時(shí)，然后用去離子水沖洗3遍，再用超聲波清洗3min，晾干，保證基片表面光亮無雜質(zhì)；(4)將鉬石英晶體基片浸泡在基于核酸適配子的砷膽堿分子印跡聚合物溶液中5min， 然后將鉬石英晶體基片取出，用乙腈-乙酸(混合比例為多少)混合液洗脫鉬石英晶體基片表面25min，直至把這一層中的模版分子砷膽堿完全洗掉，在室溫下干燥15 min,如此循環(huán)， 重復(fù)上述過程6次。
(5)將(4)中制備的基片浸入到pH7. 0的檸檬酸-磷酸緩沖液中，保存在4°C的冰箱中過夜，以便除去基片表面過量的基于核酸適配子的砷膽堿分子印跡聚合物，當(dāng)基片用去離子水徹底清洗以后，制備成功基于核酸適配子的砷膽堿分子印跡膜基片。
將制得的基于核酸適配子的砷膽堿分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平， 對樣品提取液中砷膽堿進(jìn)行檢測，結(jié)果見表1。
表1本發(fā)明基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片檢測效果
權(quán)利要求
1.一種基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片，包括金石英晶體基片，其特征在于以基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物作為識(shí)別元件在所述金石英晶體基片表面形成反應(yīng)層；所述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物是將海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物模板分子、核酸適配子功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑和有機(jī)溶劑按摩爾比為0.1 2.5 3 0. 1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10的比例聚合而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分子印跡聚合物，其特征在于有機(jī)砷化物為甲基胂酸、甲基亞胂酸、砷糖或砷膽堿。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片，其特征在于所述交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N, N-亞甲基二丙烯酰胺、3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸、N, N-l，4-亞苯基二丙烯酰胺、二乙烯基苯、N， 0-二丙烯酰-L-苯丙胺醇、季戊四醇三丙烯酸酯或季戊四醇四丙烯酸酯；所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈；所述致孔劑為二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、異丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亞砜；所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷或四氯化碳。
4.一種權(quán)利要求1或2或3所述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)選擇能與海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物特異性識(shí)別并能夠合成相應(yīng)分子印跡聚合物的核酸適配子功能單體；(2)將海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物模板分子、核酸適配子功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑和有機(jī)溶劑按摩爾比=0. 1 2. 5 3 0.1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10混合均勻制成基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物溶液；(3)利用基片表面修飾技術(shù)，將基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物修飾到金石英晶體基片表面，形成反應(yīng)層。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，將基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物修飾到金石英晶體基片表面包括以下步驟(1)將金石英晶體基片用去離子水清洗，再用純甲醇浸泡1-3小時(shí)，然后用去離子水沖洗3-5遍，再用超聲波清洗3-5min，晾干；(2)將晾干的金石英晶體基片浸泡于基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物溶液中5-lOmin取出，用洗脫劑洗脫20-30min，在室溫下干燥5-lOmin ；(3)重復(fù)步驟(2)的過程4-7次，制得所述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于其還包括以下步驟將制得的基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片浸入PH6. 8-7. 5的緩沖液，保存在4°C冰箱，12 24h后使用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述洗脫劑為乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸；所述緩沖液為檸檬酸-磷酸溶液。
8.一種利用上述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片進(jìn)行海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物檢測的方法包括以下步驟將按上述任意一種方法制得的基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片連接到壓電石英晶體微天平，對樣品中的有機(jī)砷化物進(jìn)行檢測。
全文摘要
本發(fā)明公開了基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片及其制備方法和應(yīng)用，以基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物作為識(shí)別元件在所述金石英體基片表面形成反應(yīng)層；所述基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡聚合物是將海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物模板分子、核酸適配子功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑和有機(jī)溶劑按摩爾比為0.1～2.5∶3∶0.1～3∶30～60∶0.01～0.15∶1.0～10的比例聚合而成。將表面修飾技術(shù)應(yīng)用到基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片的制備當(dāng)中，使得基于核酸適配子的海產(chǎn)品中有機(jī)砷化物分子印跡膜基片的制備具有可控性，提高了基片的靈敏度和準(zhǔn)確性。
文檔編號(hào)G01N5/02GK102519820SQ20111044985
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者于京華, 劉素, 崔敏, 廉文靜, 李 杰, 葛慎光, 邢憲榮, 顏梅, 黃加棟 申請人:濟(jì)南大學(xué)