專利名稱：一種檢測巰基化合物的熒光探針及其制備方法與使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測巰基化合物的熒光探針及其制備方法與使用方法。
背景技術(shù)：
巰基是是生物體中許多蛋白質(zhì)和小分子的重要組成部分，它們是與酶活性有關(guān)最具反應(yīng)性的官能團。大量的生物現(xiàn)象被認(rèn)為依賴于這些包含巰基的硫醇類物質(zhì)，如氧化還原反應(yīng)、甲基轉(zhuǎn)移反應(yīng)、二氧化碳固定反應(yīng)以及輔酶A參與的反應(yīng)等。體內(nèi)某些巰基分子的含量直接與多種疾病相關(guān)，如癌癥，帕金森癥，心血管疾病等。因而發(fā)展快速，靈敏，簡便的檢測巰基的方法在生物化學(xué)和臨床化學(xué)中具有重要意義。傳統(tǒng)的檢測方法有質(zhì)譜法，高效液相色譜法，電化學(xué)法，分光光度法、比色法等，而這些方法靈敏度低，不能適應(yīng)有些生物樣品中巰基化合物的測定。熒光法由于其探針特殊的光物理和光化學(xué)特性而具有靈敏度高、動態(tài)響應(yīng)范圍寬的特點，更重要的是能夠?qū)崿F(xiàn)對活體甚至單個細(xì)胞的實時可視化示蹤，成為目前廣泛采用的檢測細(xì)胞內(nèi)硫醇類物質(zhì)的一種重要手段。鑒于此，近年來巰基熒光探針成為了研究的焦點，并取得了較大的進(jìn)展。如發(fā)展的芳基鹵化物、丹磺酰氮丙啶類、芘類等，它們具有好的選擇性和靈敏度，對巰基的檢測限一般在納摩爾(nmol)左右，但這些探針自身都有較強的熒光，用于活體細(xì)胞成像時會造成較低的信噪比；苯并呋喃磺酰鹵類探針，雖然自身熒光較弱但是需要在堿性及高溫條件下與巰基反應(yīng)，也無法應(yīng)用于活體細(xì)胞的熒光成像；而乙酰鹵衍生物類巰基衍生試劑，能夠在室溫和生理PH下與巰基迅速反應(yīng)，但是光穩(wěn)定性較差，尤其是處于溶液中時不穩(wěn)定，容易失去熒光團，因而也難以滿足生物檢測和熒光成像的要求。到目前為止，能夠真正用于巰基化合物檢測的高靈敏，高響應(yīng)的探針還比較少見。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種基于2，4- 二硝基苯磺?；揎椀牡せ酋Ｂ妊苌锟捎糜趲€基化合物檢測的熒光探針及其制備與使用方法。檢測生物巰基的熒光探針有兩部分組成2，4- 二硝基苯磺?；鶠樽R別基團，丹磺酰氯衍生物為信息報告功能團，其結(jié)構(gòu)如式I。
權(quán)利要求
1.一種檢測巰基化合物的熒光探針制備方法，其特征在于該檢測生物巰基的熒光探針有兩部分組成2，4- 二硝基苯磺酰基為識別基團，丹磺酰氯衍生物為信息報告功能團，其結(jié)構(gòu)如式I ;
2.一種檢測生物巰基的熒光探針的使用方法包括以下步驟 步驟一，測量探針分子的核磁共振波譜 步驟二，測定探針分子對巰基的選擇性 將探針分子以少量DMSO溶解，再用無水乙醇配置成溶液；分別加入以無水乙醇溶解的待測樣品，使最終探針分子的濃度為0.1 mM，而待測樣品的濃度為5 mM ;反應(yīng)2小時后在熒光光譜儀上進(jìn)行測定，進(jìn)而確定探針分子對巰基的選擇性； 步驟三，測定探針分子對硫代乙醇酸的熒光-濃度曲線將探針分子以少量DMSO溶解，再用無水乙醇配置成溶液；分別加入不同濃度的硫代乙醇酸，使最終探針分子的濃度為0. I mM;反應(yīng)2小時后在熒光光譜儀上進(jìn)行測定，進(jìn)而得到熒光強度對濃度變化的曲線； 步驟四，測定探針分子對硫代乙醇酸的熒光-時間曲線 將探針分子以少量DMSO溶解，再用無水乙醇配置成溶液；加入硫代乙醇酸，使最 終探針分子的濃度為0.1 mM，而硫代乙醇酸的濃度為5 mM;反應(yīng)一定時間，檢測熒光強度，進(jìn)而得到熒光強度對時間變化的曲線。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種檢測巰基化合物的熒光探針及其制備方法與使用方法，現(xiàn)有技術(shù)難以滿足生物檢測和熒光成像的要求。本發(fā)明由兩部分組成，其中2,4-二硝基苯磺?；鶠樽R別基團，而丹磺酰氯衍生物為信息報告功能團，當(dāng)體系內(nèi)存在巰基時，巰基能與2,4-二硝基苯磺?；l(fā)生特異性反應(yīng)，使信息報告功能團的熒光發(fā)生變化，從而實現(xiàn)對巰基的特異性檢測。本發(fā)明探針分子合成簡便，穩(wěn)定性好，能夠長期保存使用，具有較高的巰基檢測靈敏度，具有優(yōu)秀的選擇性，與其它常見干擾分子無作用，具有長的熒光發(fā)射波長(>500nm)，能夠有效地避免來自生物大分子小于500nm背景熒光的干擾，可應(yīng)用于生物體系的檢測。
文檔編號C09K11/06GK102633694SQ20121009177
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月30日
發(fā)明者劉靜, 韓益豐 申請人:浙江理工大學(xué)