3?[(3?{[4?(4?嗎啉基甲基)?1H?吡咯?2?基]亞甲基}?2?氧代?2,3?二氫?1H?吲哚?5?基)甲基]?1,3?噻唑烷?2,4?二酮和EGFRTYR激酶抑制劑的組合的制作方法

本發(fā)明涉及式(I)的3-[(3-{[4-(4-嗎啉基甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)-甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮:

或其Z或E異構(gòu)體和/或其與可藥用酸或堿的加成鹽與人表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑的新的組合，其用于治療非小細(xì)胞肺癌、更尤其是對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑有抗性的患者的非小細(xì)胞肺癌。

背景技術(shù)：

非小細(xì)胞肺癌是當(dāng)今世界上癌癥死亡的主要原因(Goldstraw,P.,D.Ball,J.R.Jett,C.T.Le,E.Lim,A.G.Nicholson,和F.A.Shepherd,2011,Non-small-cell lung cancer:Lancet,第378卷,第9804期,第1727-1740頁(yè)；Jemal,A.,F.Bray,M.M.Center,J.Ferlay,E.Ward,和D.Forman,2011,Global cancer statistics:CA Cancer J Clin,第61卷,第2期,第69-90頁(yè))。在診斷時(shí)，大多數(shù)患者具有晚期病理學(xué)病變，一年存活率30％和五年存活率10％(美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院，國(guó)家癌癥研究所http://seer.cancer.gov/archive/csr/1975_2011/results_merged/topic_delaygraphs_overview.pdf；http://www.cancerresearchuk.org/cancer-info/cancerstats/types/lung/survival/lung-cancer-survival-statistics)。EGFR基因的激活突變導(dǎo)致癌基因成癮，換言之癌癥細(xì)胞變得依賴該變異型以實(shí)現(xiàn)其生長(zhǎng)和存活。所述突變常見于肺的腺癌的中，在高加索患者中占病例的15％，在亞洲患者中占病例的40-50％(Shigematsu,H.等人,2005,Clinical and biological features associated with epidermal growth factor receptor gene mutations in lung cancers:J Natl Cancer Inst,第97卷,第5期,第339-346頁(yè))。在具有EGFR基因突變的患者中，EGFR酪氨酸激酶抑制劑與化學(xué)療法相比顯著延緩疾病的進(jìn)程，被認(rèn)為是基準(zhǔn)治療。目前市場(chǎng)上的治療手段包括第一代抑制劑的吉非替尼和厄洛替尼和第二代治療劑的阿法替尼等，各代都靶向EGFR的活化的突變。不幸地是，通過(guò)獲得其它基因的和蛋白質(zhì)改變(其能產(chǎn)生EGFR酪氨酸激酶抑制劑的抗性)大多數(shù)患者在治療后數(shù)月復(fù)發(fā)。已經(jīng)鑒定了一些抗性機(jī)制，尤其是在大多數(shù)對(duì)治療有抗性的患者中發(fā)現(xiàn)了一種新的EGFR受體的突變(T790M:在790位甲硫氨酸替代蘇氨酸)。在對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑產(chǎn)生抗性后，預(yù)后變得非常差，為患者提供的化學(xué)療法功效非常低。在這點(diǎn)上，為了改善無(wú)疾病進(jìn)展的生存期的、對(duì)非小細(xì)胞肺癌(尤其是對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑有抗性的患者的非小細(xì)胞肺癌)的新的治療供選方案的研究仍然是目前的問(wèn)題。尤其是，使對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑有抗性的患者再敏感化，是需要研究的一個(gè)堅(jiān)定的治療策略。目前正在開發(fā)專門作用于獲得了諸如T790M的次級(jí)突變的患者的第三代EGFR酪氨酸激酶抑制劑，且似乎恢復(fù)了治療的活性。作用于除T790M突變之外的抗性途徑和/或涉及其他細(xì)胞受體的其他供選方案仍然是需要的并且是患者期待已久的，可以尤其與第三代抑制劑進(jìn)行組合。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

下文除非另外指定，“3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮”被理解為以下含義：“3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]-亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮及其Z或E異構(gòu)體和/或與可藥用酸或堿的加成鹽”。

3-[(3-{[4-(4-嗎啉基甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的強(qiáng)效抑制劑，尤其可用于治療癌癥、且尤其用于治療轉(zhuǎn)移的實(shí)體瘤。其在專利申請(qǐng)WO2011/015728和WO2015/004395中有描述。

根據(jù)本發(fā)明，已證明了在之前用EGFR酪氨酸激酶抑制劑抑制劑治療過(guò)的動(dòng)物模型中，3-{[(3-{[4-(4-嗎啉基甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基]甲基}-1,3-噻唑烷-2,4-二酮的作用能除去對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑的抗性。

這些作用使得3-{[(3-{[4-(4-嗎啉基甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基]甲基}-1,3-噻唑烷-2,4-二酮和EGFR酪氨酸激酶抑制劑的組合可以應(yīng)用于所關(guān)注的非小細(xì)胞肺癌的治療中，尤其是在盡管治療過(guò)但仍觀察到疾病的進(jìn)展或復(fù)發(fā)的患者的非小細(xì)胞肺癌。

在根據(jù)本發(fā)明的組合中更尤其是，該3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮為Z異構(gòu)體形式。

優(yōu)選在根據(jù)本發(fā)明的組合中，該3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮為鹽形式、尤其是鹽酸鹽或甲磺酸鹽。

還更有利地是，本發(fā)明的組合包含3-[((3Z)-3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮甲磺酸鹽。

在根據(jù)本發(fā)明的EGFR酪氨酸激酶抑制劑中，提及的可以是第一代和第二代抑制劑厄洛替尼、吉非替尼和阿法替尼和第三代抑制劑AZD9291(奧斯替尼)或盧瑟替尼(rociletinib)。

根據(jù)一個(gè)有利的實(shí)施方案，根據(jù)本發(fā)明的組合的EGFR酪氨酸激酶抑制劑是式(II)的N-(3-乙炔基苯基)-6,7-二(2-甲氧基乙氧基)-喹唑啉-4-胺或厄洛替尼:

或其與可藥用酸或堿的加成鹽、尤其是其鹽酸鹽。

根據(jù)另一個(gè)有利的實(shí)施方案，根據(jù)本發(fā)明的組合的EGFR酪氨酸激酶抑制劑是式(III)的N-(3-氯-4-氟-苯基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉-4-基丙氧基)喹唑啉-4-胺或吉非替尼:

或其與可藥用酸或堿的加成鹽。

優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的組合包含3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮的Z異構(gòu)體或其可藥用鹽，以及吉非替尼或其可藥用鹽。

還更特別地是，本發(fā)明涉及3-[((3Z)-3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)-甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮甲磺酸鹽和吉非替尼或其可藥用鹽的組合。

本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮和EGFR酪氨酸激酶抑制劑的組合，以及一種或多種可藥用賦形劑。

本發(fā)明還涉及所述藥物組合物在治療非小細(xì)胞肺癌中的用途，更尤其是在治療對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑有抗性的患者的非小細(xì)胞肺癌中的用途。

在本發(fā)明的藥物組合物中，提及的更尤其可以是適合用于口服、胃腸外、肌內(nèi)和靜脈內(nèi)、透皮或經(jīng)皮、鼻、直腸、經(jīng)舌、眼或呼吸途徑施用的那些，更具體是片劑、糖錠劑、舌下片劑、明膠膠囊劑、glossettes、膠囊劑、錠劑、注射劑、氣霧劑、滴眼劑或滴鼻劑、栓劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、皮膚凝膠劑等。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮以口服形式施用。

除了3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮和EGFR酪氨酸激酶抑制劑之外，本發(fā)明的藥物組合物還包含一種或多種選自稀釋劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、吸收劑、著色劑、甜味劑、矯味劑等的賦形劑或載體。

可提及的實(shí)例無(wú)任何限制性地包括:

-用作稀釋劑的:乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素、甘油；

-用作潤(rùn)滑劑的:二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其鎂鹽和鈣鹽、聚乙二醇；

-用作粘合劑的:硅酸鋁和硅酸鎂、淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和聚乙烯吡咯烷酮；

-用作崩解劑的:瓊脂、藻酸及其鈉鹽、泡騰混合物。

所述組合中的各化合物可以同時(shí)或相繼施用。相應(yīng)的藥物組合物可以允許活性成分的立即或延遲釋放。此外，所述組合中的各化合物可以以兩種獨(dú)立的藥物組合物的形式施用，每種藥物組合物包含所述活性成分中的一種，或以單一的藥物組合物(其中各活性成分是混合的)的形式施用。

使用的劑量根據(jù)患者的性別、年齡和重量、施用途徑、癌癥的性質(zhì)和任何組合治療的性質(zhì)而不同，范圍為每天300至1500mg 3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮的游離堿的等同物、且更優(yōu)選為每天400至800mg游離堿的等同物、還更尤其是每天500至600mg游離堿的等同物。EGFR酪氨酸激酶抑制劑的劑量將等于當(dāng)其獨(dú)自施用時(shí)使用的量或更低。例如，在吉非替尼的情況中，施用的劑量為每天250mg。對(duì)于厄洛替尼，為每天25至150mg。

附圖說(shuō)明

圖1顯示厄洛替尼-抗性的HCC827腫瘤的生長(zhǎng)的抑制。

具體實(shí)施方式

藥物組合物

包含100mg 3-[3-{[4-(4-嗎啉基甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮甲磺酸鹽的游離堿的等同物的1000片,Z異構(gòu)體.............................................................121g

羥乙酸淀粉鈉......................................................20g

玉米淀粉.........................................................133g

乳糖一水合物.....................................................357g

硬脂酸鎂.........................................................6.7g

二氧化硅.........................................................1.3g

聚維酮..........................................................46.6g

臨床前試驗(yàn)

A)對(duì)厄洛替尼-抗性細(xì)胞系HCC827的細(xì)胞生存測(cè)試

使用的是能測(cè)定抗腫瘤化合物的抗增殖能力的細(xì)胞生存測(cè)試。選擇的細(xì)胞系是細(xì)胞系HCC827、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，其存活依賴于EGFR。使用的參數(shù)為IC50，即與未處理的對(duì)照細(xì)胞相比抑制50％細(xì)胞增殖的產(chǎn)品的濃度。在試驗(yàn)前2天將細(xì)胞以適合的密度接種(150μl)于96-孔板的孔中。1列包含代表100％增殖的未處理的對(duì)照細(xì)胞。將其它列與測(cè)試產(chǎn)品一起孵育4個(gè)倍增時(shí)間。EGFR酪氨酸激酶抑制劑厄洛替尼用于細(xì)胞系HCC827的細(xì)胞存活的中位抑制劑濃度為10nM。通過(guò)將細(xì)胞系HCC827長(zhǎng)期暴露于厄洛替尼產(chǎn)生對(duì)厄洛替尼的獲得性抗性:以在培養(yǎng)基中1μM的劑量將細(xì)胞暴露于厄洛替尼直至倍增時(shí)間穩(wěn)定，即約2個(gè)月。然后厄洛替尼對(duì)該抗性細(xì)胞系HCC827的細(xì)胞存活的中位抑制濃度約為11.5μM，其比如上文所述的對(duì)非抗性細(xì)胞系HCC827的中位抑制濃度高約1000倍。然后將抗性細(xì)胞暴露于3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮鹽酸鹽(100nM的濃度)及與之組合的增加劑量的厄洛替尼。3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮鹽酸鹽獨(dú)自對(duì)存活沒有作用。在組合中，厄洛替尼對(duì)抗性細(xì)胞系HCC827的中位抑制濃度回到約3.8nM，其接近對(duì)非-抗性細(xì)胞系HCC827的中位抑制濃度。

該結(jié)果顯示3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮能在對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑有抗性的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中恢復(fù)對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑的敏感性。

B)厄洛替尼-抗性的HCC827腫瘤的生長(zhǎng)的抑制

將在體外產(chǎn)生對(duì)厄洛替尼的抗性的細(xì)胞系HCC827(非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系)在皮下部位以5.10⁶細(xì)胞/小鼠的量移植至雌性SCID小鼠。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到約200mm³，將腫瘤隨機(jī)分配至具有八只小鼠的各組。歷經(jīng)19天的時(shí)期，使用50mg/kg的劑量的化合物A(3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮鹽酸鹽)和12.5mg/kg的劑量的厄洛替尼進(jìn)行每日治療，其為口服施用(載體分別為醋酸銨/HEC和PEG300/乙醇/水緩沖液)，如圖1上的三角形所示。使用游標(biāo)卡尺每周測(cè)量腫瘤體積兩次至三次。在圖上記錄中位腫瘤體積(包括四分位距)。

在治療末尾的第19天，對(duì)于厄洛替尼，使用所述化合物獨(dú)自治療的生長(zhǎng)抑制為65％，且對(duì)于3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮鹽酸鹽(化合物A)，為83％。當(dāng)這兩種化合物組合使用，腫瘤完全消退，且當(dāng)停止治療后，所述消退隨時(shí)間持續(xù)至第30天。觀測(cè)到的這兩種產(chǎn)品之間的協(xié)同作用在研究期間是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(p<0.001)。

臨床研究

具有非小細(xì)胞肺癌的患者出現(xiàn)對(duì)使用EGFR酪氨酸激酶抑制劑(吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、奧斯替尼或盧瑟替尼)的治療的抗性，對(duì)所述治療不再敏感，且疾病進(jìn)展。

概念驗(yàn)證性研究(proof of concept study)正在進(jìn)行中以證實(shí)臨床前試驗(yàn)中所觀測(cè)到的結(jié)果，且顯示在當(dāng)前吉非替尼情況中，3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮能夠在已經(jīng)變得有抗性的罹患非小細(xì)胞肺癌的患者中恢復(fù)對(duì)EGFR抑制劑的敏感性。根據(jù)患者的分子譜將患者囊括進(jìn)來(lái)。該研究包括I期，目標(biāo)為評(píng)估耐受譜并測(cè)定用于持續(xù)發(fā)展的推薦劑量。將包括約20位患者。在該期期間，將在28天的周期內(nèi)使用以下劑量治療患者：每天400、500或600mg 3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮游離堿的等同物，以及每天250mg的吉非替尼。所述治療將被保持，直至疾病進(jìn)展。在該期末尾，將開始II期，目標(biāo)為評(píng)估3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮和吉非替尼的組合的活性。所述II期將包括約150個(gè)患者。將每2個(gè)月評(píng)價(jià)腫瘤。將在28-天的周期內(nèi)使用I期中確定的3-[(3-{[4-(4-嗎啉基-甲基)-1H-吡咯-2-基]亞甲基}-2-氧代-2,3-二氫-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮的推薦劑量以及每天250mg吉非替尼來(lái)治療患者。