專利名稱：一種egcg甲基化衍生物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及茶葉深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種EGCG甲基化衍生物的制備方法。
背景技術(shù)：
表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)具有多種保健功能，是茶葉中公認(rèn)的核心功能活性成分之一，在醫(yī)藥和食品研究領(lǐng)域倍受關(guān)注；但由于兒茶素成分脂溶性差、體內(nèi)不穩(wěn)定以及生物利用度低等原因使其應(yīng)用受到了限制。近年來(lái)，隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn) EGCG經(jīng)分子修飾后形成的一些衍生物，生物利用度明顯提高，并且在某些方面表現(xiàn)出了比 EGCG更強(qiáng)的生理活性。因此，EGCG的分子修飾及其衍生產(chǎn)物的研究展現(xiàn)出了很大的研究開發(fā)價(jià)值。EGCG的分子修飾已經(jīng)成為了當(dāng)前茶葉天然產(chǎn)物研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。甲基化兒茶素具有明顯的抗過(guò)敏作用。在EGCG的分子修飾研究方面，甲基化分子修飾備受關(guān)注。甲基化兒茶素成分在抗過(guò)敏等方面比EGCG更強(qiáng)。例如，EGCG3" Me在動(dòng)物血液中的穩(wěn)定性明顯高于EGCG，并且口服吸收率比EGCG高9倍，因而具有較大的藥學(xué)價(jià)值和開發(fā)應(yīng)用前景；然而，茶葉中甲基化兒茶素成分的含量普遍偏低，只有在少數(shù)特異茶樹種質(zhì)中EGCG3" Me的含量在1 %以上，這使甲基化兒茶素成分的提取、利用以及藥學(xué)價(jià)值的開發(fā)面臨材料來(lái)源困難等問(wèn)題。采用EGCG為原料，實(shí)現(xiàn)EGCG的甲基化修飾，從而大量制備甲基化」L茶素成分，具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。簽于茶葉中甲基化兒茶素成分具有很強(qiáng)的抗過(guò)敏以及消炎等保健功能，而目前尚無(wú)系統(tǒng)的甲基化兒茶素成分的制備方法，因此研究化學(xué)合成技術(shù)來(lái)制備生產(chǎn)甲基化兒茶素成分，符合當(dāng)前功能性成分開發(fā)的要求，市場(chǎng)前景廣闊，能產(chǎn)生一定的經(jīng)濟(jì)效益以及社會(huì)效益。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種EGCG甲基化衍生物的制備方法，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)步驟(1)將茶多酚提取物(EGCG含量彡80% )加入丙酮溶液中，繼而加入碳酸鹽或者強(qiáng)堿作為催化劑，氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣體，構(gòu)成反應(yīng)體系；(2)將反應(yīng)體系在65-75°C磁力攪拌回流，同時(shí)在回流過(guò)程中緩慢滴加碘甲烷，直至EGCG與碘甲烷的物質(zhì)的量之比達(dá)到 1:2-1: 6;反應(yīng)2-4小時(shí)后終止反應(yīng)；過(guò)濾后將濾液低溫旋轉(zhuǎn)濃縮干燥，得到固體產(chǎn)物； (3)將上述固體產(chǎn)物用水溶解后，通過(guò)裝有葡聚糖凝膠材料的層析柱；采用10% -80%的醇溶液作為洗脫溶劑進(jìn)行梯度洗脫，依次收集分別含有4'，4" - 二甲基EGCG、4'，3"， 4〃 -三甲基EGCG以及4'，3〃，4〃，5〃 -四甲基EGCG的洗脫液；(4)將三種洗脫液體分別進(jìn)行干燥，得到4'，4〃 - 二甲基EGCG、4'，3〃，4〃 -三甲基EGCG以及4'，3〃，4〃， 5 〃 -四甲基EGCG三種甲基化的EGCG化合物。所述步驟(1)中茶多酚提取物(EGCG含量彡80% )可以是市場(chǎng)上的高EGCG茶多酚提取物，包括80% -98% EGCG含量的茶多酚產(chǎn)品。
步驟(1)中優(yōu)選碳酸鈉或氫氧化鈉作為反應(yīng)體系的催化劑，氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣體。步驟O)中優(yōu)選在65-70°C磁力攪拌回流，同時(shí)在回流過(guò)程中緩慢滴加碘甲烷，優(yōu)選直至EGCG與碘甲烷的物質(zhì)的量之比達(dá)到1 4;反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為2-3小時(shí)后終止反應(yīng)。步驟(3)中葡聚糖凝膠材料優(yōu)選為kphadex LH-20 ；步驟(3)中醇為甲醇；步驟 (3)中層析處理的流速為1-4柱床體積/小時(shí)，洗脫溶劑的流速為2-6柱床體積/小時(shí)。步驟(4)干燥方法分為冷凍干燥、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或者噴霧干燥。本發(fā)明主要是在碳酸鈉或者氫氧化鈉的催化下，碘甲烷作為甲基供體，使EGCG甲基化，制備得到甲基化EGCG單成分。本發(fā)明制備出的三種EGCG甲基化衍生物成分純度在 95 %以上。該制備方法簡(jiǎn)便易行，成本較低，適用于制備兒茶素甲基化衍生物單體成分。EGCG三種甲基化衍生物的化學(xué)分子式
權(quán)利要求
1.一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯甲基化衍生物的制備方法，其特征在于，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)(1)將茶多酚提取物加入丙酮溶液中，其中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量>80%，再加入碳酸鹽或強(qiáng)堿作為催化劑，氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣體，構(gòu)成反應(yīng)體系；(2)將反應(yīng)體系在65-75°C磁力攪拌回流，同時(shí)在回流過(guò)程中緩慢滴加碘甲烷，直至表沒食子兒茶素沒食子酸酯與碘甲烷的物質(zhì)的量之比達(dá)到1:2-1:6 ；反應(yīng)2-4小時(shí)后終止反應(yīng)；過(guò)濾后將濾液低溫旋轉(zhuǎn)濃縮干燥，得到固體產(chǎn)物；(3)將上述固體產(chǎn)物用水溶解后，通過(guò)裝有葡聚糖凝膠材料的層析柱；采用體積百分比為10%-80%的醇溶液作為洗脫溶劑進(jìn)行梯度洗脫，依次收集分別含有4'，4" - 二甲基 EGCG、4'，3〃，4〃 -三甲基EGCG以及4'，3〃，4〃，5〃 -四甲基EGCG的洗脫液；(4)將三種洗脫液體分別進(jìn)行干燥，得到4'，4"-二甲基表沒食子兒茶素沒食子酸酯、4'，3"，4"-三甲基表沒食子兒茶素沒食子酸酯以及4'，3"，4"，5〃 -四甲基表沒食子兒茶素沒食子酸酯三種化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯甲基化衍生物的制備方法， 其特征在于，所述步驟(3)中葡聚糖凝膠材料為kphadex LH-20或者kphadex LH-60 ；所述步驟(3)中的醇為甲醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯甲基化衍生物的制備方法， 其特征在于，所述步驟(3)中層析處理的流速為1-4柱床體積/小時(shí)，洗脫溶劑的流速為 2-6柱床體積/小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯甲基化衍生物的制備方法， 其特征在于，所述步驟(3)采用分步收集儀收集洗脫液，設(shè)定10-20ml/管，收集50-100管， 然后全部用HPLC檢測(cè)，參考標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比，再根據(jù)檢測(cè)結(jié)果合并相同成分的洗脫液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯甲基化衍生物的制備方法， 其特征在于，所述步驟(4)干燥方法分為冷凍干燥、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或者噴霧干燥。
全文摘要
本發(fā)明提供一種EGCG甲基化衍生物的制備方法，是在碳酸鈉或者強(qiáng)堿的催化下，碘甲烷作為甲基供體，使EGCG甲基化，制備得到甲基化EGCG衍生物。本發(fā)明制備出的三種EGCG甲基化物的成分其純度在95%以上。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，操作簡(jiǎn)便易行，制備成本較低，適用于制備兒茶素甲基化衍生物單體成分，本發(fā)明制備的化合物的結(jié)構(gòu)式為。
文檔編號(hào)C07D311/62GK102344432SQ20111021024
公開日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者呂海鵬, 孫業(yè)良, 林 智, 譚俊峰, 郭麗 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所