一種歐前胡素柔性脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用與流程

本發(fā)明涉及柔性脂質(zhì)體領(lǐng)域，特別涉及一種歐前胡素柔性脂質(zhì)體；本發(fā)明還涉及上述脂質(zhì)體的制備方法以及該脂質(zhì)體的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：柔性脂質(zhì)體是由普通脂質(zhì)體經(jīng)處方改進(jìn)而來,即在脂質(zhì)體的磷脂成分中不加或者少加膽固醇,同時加入了表面活性劑如膽酸鈉、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(吐溫)等作為膜軟化劑,使脂質(zhì)體的類脂膜具有高度的變形能力,通過皮膚層內(nèi)外滲透壓差的驅(qū)動，柔性脂質(zhì)體能高效穿透比其自身小數(shù)倍的角質(zhì)細(xì)胞間的孔道，再經(jīng)過多次變形，到達(dá)皮膚深處后其組成不變。柔性脂質(zhì)體從皮膚表層開始滲透逐漸到達(dá)真皮，隨后是更深的組織，當(dāng)周邊地區(qū)飽和后，再經(jīng)由淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血液。柔性脂質(zhì)體能夠顯著增加藥物的經(jīng)皮滲透，增強(qiáng)藥物的作用療效，降低刺激和減少不良反應(yīng)，提高生物利用度，因此柔性脂質(zhì)體越來越廣泛地成為各種大分子，脂溶性藥物及水溶性藥物的載體。常用的具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用的傘形科植物如白芷、前胡、羌活等均含有香豆素類(TCP)物質(zhì)，如歐前胡素(Imperatorin)、異歐前胡素(Isoimperatorin)、羌活醇(Notopterol)、補(bǔ)骨脂素(Psoralen)等，其中的歐前胡素是主要的藥理效應(yīng)成分之一。據(jù)研究表明，歐前胡素的主要藥理作用有：(1)抗炎作用：通過體內(nèi)外試驗(yàn)研究對卵白蛋白誘導(dǎo)變應(yīng)性鼻炎小鼠模型的作用發(fā)現(xiàn)，歐前胡素能調(diào)節(jié)caspase-1的活性從而產(chǎn)生抗炎作用；選用角叉菜膠致大鼠急性胸膜炎模型進(jìn)行抗炎實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)歐前胡素能抑制花生四烯酸代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生、抑制促炎細(xì)胞因子釋放，從而減少小鼠炎性滲出液的體積，降低白細(xì)胞計(jì)數(shù)，降低滲出液中PEG2、IL-1β、TNF-α含量，降低肺組織中MDA的含量；(2)鎮(zhèn)痛作用：對小鼠采用熱板法、醋酸扭體法等研究白芷中歐前胡素主要線型呋喃香豆素的成分的鎮(zhèn)痛活性，發(fā)現(xiàn)歐前胡素能顯著減少醋酸所致的小鼠的扭體次數(shù)，還能明顯延遲小鼠扭體的出現(xiàn)；而且歐前胡素具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，能明顯抑制熱板法所致的小鼠疼痛，在具有鎮(zhèn)痛活性的成分中歐前胡素的鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)；(3)抗菌、抗病毒作用：對大腸桿菌、弗氏痢疾桿菌、變形桿菌、傷寒桿菌具有不同程度的抑制作用，對革蘭陽性菌和革蘭陰性菌均有較強(qiáng)的抑制活性(最小抑菌濃度32～128m/ml)，還能夠抑制水泡性口腔炎病毒假型或糖蛋白gpl60包膜的人類免疫缺陷病毒I型(HIV-1)對T細(xì)胞和Hela細(xì)胞的感染；(4)解痙作用：通過家兔離體回腸法觀察歐前胡素的解痙活性，發(fā)現(xiàn)歐前胡素能明顯緩解BaCl2所致兔腸平滑肌痙攣，歐前胡素能緩解不同物質(zhì)導(dǎo)致的平滑肌強(qiáng)直性收縮及痙攣，解痙作用與罌粟堿的作用相當(dāng)，毒性較低使用安全；(5)其它作用：具有舒張血管活性的作用，歐前胡素通過作用于NO通路，能抑制血管壁增厚，并具有抑制心肌肥大、肥厚的作用，從而對高血壓、動脈粥樣硬化和肥厚型心肌病等有治療作用。因此，歐前胡素可以開發(fā)成為一種抗炎鎮(zhèn)痛的新產(chǎn)品。歐前胡素難溶于水，皮膚滲透性差，不易透過皮膚產(chǎn)生吸收，制備成傳統(tǒng)脂質(zhì)體其透皮效率低，傾向于停留在皮膚角質(zhì)層表層，無法到達(dá)到皮膚深處，因而制備成柔性脂質(zhì)體有利于提高經(jīng)皮滲透吸收。目前國內(nèi)外在歐前胡素脂質(zhì)體劑型研究暫時處于空白，將其制備成柔性脂質(zhì)體的方法具有極大的潛在價值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種包封率高，粒徑小，體外累計(jì)滲透量高，穩(wěn)定性好的歐前胡素柔性脂質(zhì)體。本發(fā)明要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種上述脂質(zhì)體的制備方法，以保證脂質(zhì)體的分布均勻性。本發(fā)明還提供一種上述脂質(zhì)體在制備皮膚外用抗炎鎮(zhèn)痛藥品中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的前一技術(shù)方案是這樣的：一種歐前胡素柔性脂質(zhì)體，所述的柔性脂質(zhì)體包括以下組分：歐前胡素、大豆卵磷脂、膽固醇、吐溫80及泊洛沙姆P188。需要說明的是，歐前胡素與大豆卵磷脂、膽固醇的質(zhì)量比例為1:25:1.5～1:35:1.5。需要說明的是，大豆卵磷脂與吐溫80、泊洛沙姆P188質(zhì)量比例為5.6:0.5:1.8～5.6:3:1.9。需要說明的是，所述的脂質(zhì)體粒徑為100～300nm。本發(fā)明的后一技術(shù)方案這這樣的：一種歐前胡素柔性脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟：步驟1：按比例稱取歐前胡素、大豆卵磷脂、膽固醇，加入吐溫80乙醇溶液加熱振蕩至溶解；步驟2：在水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，除去有機(jī)溶劑，形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠及泊洛沙姆P188水溶液，旋轉(zhuǎn)水化至洗脫，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲即分散完畢，放置冰箱4℃保存。需要說明的是，步驟1所述的吐溫80乙醇溶液的濃度為5～20mg/ml。需要說明的是，步驟2所述的水浴溫度為40～60℃。需要說明的是，步驟3所述的旋轉(zhuǎn)水化時間為0.5～2h。需要說明的是，步驟4所述的探頭超聲時間為10～20min。本發(fā)明還公開了上述的歐前胡素柔性脂質(zhì)體在制備皮膚外用抗炎鎮(zhèn)痛藥品中的應(yīng)用。本發(fā)明與傳統(tǒng)方法相比，具有以下優(yōu)勢：1、本發(fā)明所制備的歐前胡素柔性脂質(zhì)體把歐前胡素包裹在雙磷脂層中，保證了包裹的活性成分具有良好的穩(wěn)定性，同時修飾了脂質(zhì)體磷脂層的流動性，具備柔性性質(zhì)，產(chǎn)生彈性和形變更好地滲透入皮膚深層，極大增加透皮吸收效果，使用泊洛沙姆P188作為水化溶液可使脂質(zhì)體表面穩(wěn)定，使得脂質(zhì)體間相互排斥避免絮集，增加了穩(wěn)定性，提高歐前胡素的經(jīng)皮滲透吸收，延長藥物的皮膚滲透作用時間，提高在皮膚內(nèi)的滯留時間，生物利用度得到有效增長；2、本發(fā)明所制備的歐前胡素柔性脂質(zhì)體的包封率達(dá)60～80％，粒徑范圍處于50～200nm中，表面電位為-(30～50)mv，體外累積滲透量達(dá)40～60％，穩(wěn)定性好；3、本發(fā)明所述的制備方法簡單方便，易于工業(yè)化，同時反應(yīng)條件溫和，整個工藝過程機(jī)械化程度高，使產(chǎn)品質(zhì)量和工藝具由良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。附圖說明圖1為實(shí)施例4所制得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體的粒徑分布圖；圖2為實(shí)施例4所制得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體的Zeta電位圖；圖3為實(shí)施例1-4所制得的歐前胡素脂質(zhì)體與飽和溶液的經(jīng)皮滲透吸收曲線圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求范圍內(nèi)所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例1：步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入無水乙醇20ml在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠及30ml去離子水，旋轉(zhuǎn)30min將薄膜從瓶壁水化至從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實(shí)施例所得的歐前胡素普通脂質(zhì)體粒徑大小為(118.20±3.00)nm，Zeta電位大小為(-40.87±1.14)mv，透析袋方法測得包封率為(70.70±0.28)％，呈現(xiàn)白色混懸液，靜置底部有絮狀物，搖動可變均勻乳白色。實(shí)施例2:步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液16ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠及1％泊洛沙姆P188溶液30ml，旋轉(zhuǎn)30min將薄膜從瓶壁水化至從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4:在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實(shí)施例所得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體粒徑大小為(116.47±2.39)nm，Zeta電位大小為(-42.87±1.22)mv，透析袋方法測得包封率為(71.26±2.00)％，呈現(xiàn)白色混懸液，搖動可變均勻乳白色。實(shí)施例3：步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液16ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入1％十二烷基硫酸鈉溶液30ml，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實(shí)施例所得的歐前胡素陰離子柔性脂質(zhì)體粒徑大小為(77.47±0.80)nm，Zeta電位大小為(-63.99±1.45)mv，透析袋方法測得包封率為(69.60±1.05)％，呈現(xiàn)澄清透明溶液液，靜置無變化。實(shí)施例4：步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液16ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入1％十六烷基三甲基溴化銨溶液30ml，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。如圖1所示，所得的歐前胡素柔性陽離子脂質(zhì)體粒徑大小為(102.40±1.15)nm，如圖2所示，Zeta電位大小為(62.68±1.68)mv。透析袋方法測得包封率為(75.22±0.89)％，呈現(xiàn)澄清透明溶液液，靜置無變化。實(shí)施例5步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂750mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液13.2ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.6％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實(shí)施例所得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體粒徑大小為(124.26±0.83)nm，Zeta電位大小為(-41.34±1.62)mv，透析袋方法測得包封率為(42.51±1.56)％，呈現(xiàn)澄清透明溶液，靜置過夜后出現(xiàn)混懸狀態(tài)，搖晃可澄清。實(shí)施例6步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂1050mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液18.5ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.8％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實(shí)施例所得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體粒徑大小為(148.71±1.42)nm，Zeta電位大小為(-43.73±1.12)mv，透析袋方法測得包封率為(67.34±2.01)％，呈現(xiàn)澄清透明溶液液，靜置無變化。實(shí)施例7步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液8ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.8％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實(shí)施例所得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體粒徑大小為(137.71±0.83)nm，Zeta電位大小為(-36.81±0.73)mv，透析袋方法測得包封率為(63.81±1.21)％，呈現(xiàn)澄清透明溶液液，靜置無變化。實(shí)施例8步驟1：分別稱取歐前胡素30mg、大豆卵磷脂900mg、膽固醇45mg置于1L圓底燒瓶中，加入吐溫濃度為10mg/ml的乙醇溶液24ml，在45℃水浴恒溫下加熱溶解；步驟2：在水浴溫度45℃恒溫水浴條件下使用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，減壓蒸發(fā)40min除去有機(jī)溶劑使類脂溶液在瓶壁形成一層均勻的薄膜；步驟3：向薄膜層中加入適量的小玻璃珠，加入0.8％泊洛沙姆P188溶液30ml，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)水化40min，至薄膜層從瓶壁被洗脫下來，即得歐前胡素脂質(zhì)體混懸液；步驟4：在冰浴條件下將脂質(zhì)體用探頭超聲15min，每3s間歇一次，功率為150W，超聲分散完畢即得，放置冰箱4℃保存。本實(shí)施例所得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體粒徑大小為(104.28±1.42)nm，Zeta電位大小為(-45.62±0.33)mv，透析袋方法測得包封率為(68.32±0.62)％，呈現(xiàn)澄清透明溶液液，靜置無變化。實(shí)施例9：對脂質(zhì)體穩(wěn)定性進(jìn)行測定：取實(shí)施例2所制得的歐前胡素柔性脂質(zhì)體于冰箱4℃條件下保存，分別于0天、15天及30天測定其包封率，粒徑、Zeta電位,并觀察外觀，以確定其穩(wěn)定性，其結(jié)果如表1所示：表1歐前胡素柔性脂質(zhì)體穩(wěn)定性結(jié)果從表1可以看出，歐前胡素柔性脂質(zhì)體在4℃條件下穩(wěn)定性良好，0天、15天及30天各項(xiàng)結(jié)果沒有顯著性差異(p>0.05)，可預(yù)測歐前胡素柔性脂質(zhì)體的穩(wěn)定性良好。實(shí)施例10對柔性脂質(zhì)體的體外透皮吸收性能進(jìn)行測試：取健康體重合格的SD大鼠，頸椎脫臼處死，用8％的硫化鈉溶液把腹部皮膚進(jìn)行脫毛處理，然后將腹部皮膚剝離，剔除該皮膚皮下脂肪組織及筋膜，用生理鹽水沖洗干凈保存使用；使用改良的Franz擴(kuò)散池進(jìn)行透皮吸收實(shí)驗(yàn)，將皮膚夾于雙室擴(kuò)散池中間，角質(zhì)層面向供給池，真皮層面面向接收池；供給池分別注入1ml的歐前胡素飽和水溶液、歐前胡素普通脂質(zhì)體、歐前胡素柔性脂質(zhì)體、歐前胡素陰離子柔性脂質(zhì)體及歐前胡素陽離子柔性脂質(zhì)體，接收池分別注入3％吐溫水溶液17ml，在0.5、1、2、4、6、8、12、24h時間取2ml接受液并補(bǔ)充相應(yīng)的釋放介質(zhì)，采用HPLC方法測定歐前胡素含量，計(jì)算累計(jì)透皮滲透量，每個樣品平行實(shí)驗(yàn)三次取SD值。圖3為實(shí)施例1-4所制得的歐前胡素脂質(zhì)體與飽和溶液的經(jīng)皮滲透吸收曲線圖，可以看出所有脂質(zhì)體均有很好的透皮滲透能力，歐前胡素普通脂質(zhì)體、歐前胡素柔性脂質(zhì)體、歐前胡素陰離子柔性脂質(zhì)體及歐前胡素陽離子柔性脂質(zhì)體的透皮累積滲透量分別是飽和水溶液的18.07倍、21.88倍、17.40倍、14.66倍。表2為實(shí)施例1-實(shí)施例4所制得的不同歐前胡素樣品在大鼠鼠皮的累積滲透量，可以看出柔性脂質(zhì)體透皮滲透量最高，原因?yàn)槿嵝灾|(zhì)體增強(qiáng)了脂質(zhì)體對皮膚表層的滲透性，脂質(zhì)體本身柔性特質(zhì)的發(fā)揮，使得脂質(zhì)體的透皮能力大大增強(qiáng)，將載入藥物帶入皮膚深層次結(jié)構(gòu)層，比普通脂質(zhì)體效果更好，相比陰離子柔性脂質(zhì)體和陽離子柔性脂質(zhì)體，可以看出脂質(zhì)體表面帶高濃度離子對透皮滲透有阻礙作用，透皮效果甚至低于普通脂質(zhì)體，沒有得到有效的提高，綜合對比發(fā)現(xiàn)，表明帶柔性脂質(zhì)體具有相當(dāng)良好的皮膚透過性能，有利于活性成分的作用的充分發(fā)揮。表2不同歐前胡素樣品在大鼠鼠皮的累積滲透量樣品24h平均累積滲透量(％)SD飽和水溶液2.530.08普通脂質(zhì)體(實(shí)施例1)45.722.21柔性脂質(zhì)體(實(shí)施例2)55.382.57陰離子柔性脂質(zhì)體(實(shí)施例3)44.031.25陽離子柔性脂質(zhì)體(實(shí)施例4)37.091.52以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3