技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中草藥提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體的，涉及蟲草芪參膠囊的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。
背景技術(shù)：
：蟲草芪參膠囊主要由冬蟲夏草、黃芪、丹參、紅花以及酸棗仁制備而得，具有補(bǔ)肺益腎，活血化瘀等功效。適用于慢性腎炎患者導(dǎo)致的肺腎氣虛、瘀血阻滯等證候。蟲草芪參膠囊是一種有效治療慢性腎炎的藥物，其原料成分相對簡單，效果好，毒副作用小，備受患者青睞。申請人在制藥過程中發(fā)現(xiàn)，該藥物制備方法比較單一，對多種原料采用相同提取工藝，存在有效成分流失的缺陷，而且蟲草芪參膠囊每次需要服用4粒，每天三次，服藥量過大，部分病人很難接受，容易出現(xiàn)排斥情緒。如何通過改進(jìn)工藝，來最大限度的利用原料，提高藥效，是我們需要研究的問題。舉例來說，目前市售的黃芪注射液一般采用水提醇沉的方法制備，注射劑中有效成分為黃芪皂苷，不含黃芪多糖或含量極少，而黃芪多糖也是黃芪的有效成分，具有增強(qiáng)免疫力、抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、抗應(yīng)激、抗氧化等作用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提出蟲草芪參膠囊的制備方法，該方法簡單可行、最大限度提取了原料藥材的有效成分，提高了藥效，減少了藥物服用量。本發(fā)明還公開了蟲草芪參膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：蟲草芪參膠囊的制備方法，其包括如下步驟：步驟1）制備冬蟲夏草細(xì)粉，步驟2）制備黃芪浸膏，步驟3）制備丹參紅花浸膏，步驟4）制備酸棗仁浸膏，步驟5）混勻、干燥以及制粒。具體地，所述制備方法包括如下步驟：步驟1）制備冬蟲夏草細(xì)粉：取冬蟲夏草140g，粉碎成冬蟲夏草細(xì)粉；步驟2）制備黃芪浸膏：取黃芪1400g，粉碎，過200目篩，置于容器中，添加兩倍重量的85%（v/v）的乙醇，200rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為600W，提取時(shí)間為50min；然后置于4℃放置12h，過濾，濾渣備用；濾液減壓蒸發(fā)回收乙醇，并濃縮濾液至密度為1.2g/ml的浸膏A；將上述濾渣加兩倍重量的水，攪拌均勻，然后加入0.5wt%的中性蛋白酶，在37℃酶解120min，然后煮沸5min，然后加入占濾渣兩倍重量的無水乙醇，300rpm攪拌5min，然后靜置12h，去除上清液，收集沉淀，加水溶解，-20℃放置12h，然后3000rpm離心，過濾去除沉淀，將濾液減壓濃縮至密度為1.2g/ml的浸膏B；合并浸膏A和浸膏B得到黃芪浸膏；步驟3）制備丹參紅花浸膏：取丹參560g，粉碎，過200目篩，然后鋪成3mm厚度的平層，置于紫外線下照射15min，收集粉末；取紅花560g，將紅花和上述粉末混合，置于容器中，添加兩倍重量的75%（v/v）乙醇，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為600W，提取時(shí)間為30min；過濾，收集濾液，減壓回收乙醇，濃縮成1.3g/ml的丹參紅花浸膏；步驟4）制備酸棗仁浸膏：取酸棗仁280g，加水煎煮兩次，第一次加8倍重量的水，煎煮2小時(shí)，過濾后得到濾液和藥渣；往藥渣添加5倍重量的水，煎煮1.5小時(shí)，過濾得濾液；合并上述兩次的濾液，濃縮成密度為1.1g/ml的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達(dá)70％（體積分?jǐn)?shù)），靜置24小時(shí)，濾過，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏，即得酸棗仁浸膏；步驟5）混勻、干燥以及制粒：將步驟2）所得黃芪浸膏，步驟3）所得丹參紅花浸膏，步驟4）所得酸棗仁浸膏，混勻，60℃烘干，然后粉碎，加入步驟1）所得冬蟲夏草細(xì)粉，混勻，干燥，制粒。根據(jù)上述的制備方法制備的制劑。上述制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，其應(yīng)檢出冬蟲夏草、原兒茶醛以及大黃，每粒膠囊制劑含黃芪甲苷應(yīng)不少于0.27mg。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：本發(fā)明制備方法簡單可行，對不同的中藥成分采用不同技術(shù)進(jìn)行處理，提高了各原料的有效成分，增加了藥效，減少了原料浪費(fèi)；丹參提取時(shí)，采用煎煮的方式，容易導(dǎo)致酚酸以及酮類物質(zhì)的分解，本發(fā)明方法采用微波醇提的方式，避免了上述缺陷；較小的粒徑能夠提高黃芪有效組分的浸出率，配合微波醇提等獲得苷類化合物以及多糖類，避免了成分的流失；本發(fā)明丹參提取方法采用合適強(qiáng)度的紫外線進(jìn)行輔助破壁，提高了有效成分的溶出度，同時(shí)采用微波輔助水提，時(shí)間短，提高了提取效率，降低了能耗；紅花中的綠原酸等酸類物質(zhì)、酚類有效物質(zhì)不易采用煎煮的方式，本發(fā)明采用微波輔助醇提，保留了有效成分，避免了綠原酸等有效的丟失；本發(fā)明制備的膠囊制劑有效成分高，效果好，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示其效果優(yōu)于現(xiàn)有的膠囊制劑，可用于進(jìn)一步的臨床研究。本發(fā)明還提出了蟲草芪參膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有助于GMP生產(chǎn)車間的質(zhì)量控制。具體實(shí)施方式為了使本
技術(shù)領(lǐng)域：
的人員更好地理解本申請中的技術(shù)方案，下面將結(jié)合本申請具體實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行更加清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本申請一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本申請中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實(shí)施例1蟲草芪參膠囊的制備方法，其包括如下步驟：1）取冬蟲夏草140g，粉碎成冬蟲夏草細(xì)粉；2）取黃芪1400g，粉碎，過200目篩，置于容器中，添加兩倍重量的85%（v/v）的乙醇，200rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為600W，提取時(shí)間為50min；然后置于4℃放置12h，過濾，濾渣備用；濾液減壓蒸發(fā)回收乙醇，并濃縮濾液至密度為1.2g/ml的浸膏A；采用高效液相色譜法測試黃芪甲苷含量為1.27mg/ml；將濾渣加兩倍重量的水，攪拌均勻，然后加入0.5wt%的中性蛋白酶(20萬U/g)，在37℃酶解120min，然后煮沸5min，然后加入占濾渣兩倍重量的無水乙醇，300rpm攪拌5min，然后靜置12h，去除上清液，收集沉淀，加水溶解，-20℃放置12h，然后3000rpm離心，過濾去除沉淀，將濾液減壓濃縮至密度為1.2g/ml的浸膏B；合并浸膏A和浸膏B得到黃芪浸膏；采用凝膠色譜法測得浸膏B中黃芪多糖分子量多分布于20000～40000，占總糖的70％以上；3）取丹參560g，粉碎，過200目篩，然后鋪成3mm厚度的平層，置于紫外線下照射15min，收集粉末；取紅花560g，將紅花和上述粉末混合，置于容器中，添加兩倍重量的75%（體積份數(shù)）乙醇，300rpm攪拌提取，提取過程中控制微波功率為600W，提取時(shí)間為30min；過濾，收集濾液，減壓回收乙醇，濃縮成1.3g/ml的丹參紅花浸膏；所述紫外線強(qiáng)度為3000uW/cm2；4）取酸棗仁280g，加水煎煮兩次，第一次加8倍重量的水，煎煮2小時(shí)，過濾后得到濾液和藥渣；往藥渣添加5倍重量的水，煎煮1.5小時(shí)，過濾得濾液；合并上述兩次的濾液，濃縮成密度為1.1g/ml的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達(dá)70％（體積分?jǐn)?shù)），靜置24小時(shí)，濾過，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至密度為1.3g/ml的浸膏，即得酸棗仁浸膏；5）將步驟2）所得黃芪浸膏，步驟3）所得丹參紅花浸膏，步驟4）所得酸棗仁浸膏，混勻，60℃烘干，然后粉碎，加入步驟1）所得冬蟲夏草細(xì)粉，混勻，干燥制成1000粒。用法用量：口服，一次3粒，0.45g/粒，一日3次。對照例1一種用于治療慢性腎炎的蟲草芪參膠囊，其由下述重量的原料制備而得：冬蟲夏草140g、黃芪1400g、丹參560g、紅花560g、酸棗仁280g所述蟲草芪參膠囊的制備方法為：按照重量稱取原料藥備用（1）取冬蟲夏草粉碎成細(xì)粉；（2）取黃芪、丹參、紅花、酸棗仁加水煎煮兩次，第一次加10倍量水，煎煮2小時(shí)，過濾后得到濾液和藥渣；（3）在步驟（2）中所得到的藥渣添加8倍量水，煎煮1.5小時(shí)，過濾得濾液；（4）合并步驟（2）和步驟（3）的濾液，濃縮成相對密度為1.16-1.18（50℃）的清膏，冷卻，添加乙醇使含醇量達(dá)70％（體積分?jǐn)?shù)），靜置24小時(shí)，濾過，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至密度為1.38-1.40g/ml(50℃)的干浸膏，粉碎，加入步驟（1）制備的細(xì)粉混勻，干燥制成1000粒。用法用量：口服，一次4粒，0.45g/粒，一日3次。實(shí)施例2本發(fā)明蟲草芪參膠囊GPM車間處方和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測見表1-2：表1名稱用量kg儲(chǔ)存要求冬蟲夏草67.2置陰涼干燥處，防蛀黃芪672置通風(fēng)干燥處，防潮，防蛀丹參268.8置干燥處紅花268.8置陰涼干燥處，防潮，防蛀酸棗仁134.4置陰涼干燥處，防蛀淀粉適量密閉，在干燥處保存?？招哪z囊48萬粒密閉，在溫度10-25℃，相對濕度35-65%條件下保存。表2實(shí)施例3動(dòng)物毒性試驗(yàn)健康昆明品系小鼠40只，雌雄各半，體重為18.3±1.9g，將40只小鼠隨機(jī)分為兩組，每組雌雄各半，其中20只為對照組，灌以常水；另外20只小鼠給予實(shí)施例1制備的膠囊制劑，劑量為200mg/kg，每天三次，應(yīng)用小鼠進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)表明：與對照組比較，給藥后小鼠未見明顯差異，實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察兩周，小鼠全身狀況、攝食、飲水、體重增長均正常。給藥當(dāng)天及給藥后兩周內(nèi)，未見動(dòng)物死亡，提示該藥毒性低，臨床用藥安全。實(shí)施例4藥效對比試驗(yàn)動(dòng)物：SD雄性大鼠80只，體重218±22g，健康清潔級，本公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。分組處理：80只SD雄性大鼠，根據(jù)體重?zé)o顯著差異隨機(jī)選取20只為空白對照組，其余60只進(jìn)行阿霉素腎病模型制備。將模型大鼠隨機(jī)分為模型對照組（灌胃生理鹽水，劑量100mg/kg）、實(shí)施例1組（灌胃實(shí)施例1的制劑，劑量100mg/kg）、對照例1組（灌胃對照例1的制劑，劑量100mg/kg），每組20只。每日灌胃一次，連續(xù)一月。各組大鼠分別于試驗(yàn)開始時(shí)和結(jié)束時(shí)留取24h尿量以測量24h尿蛋白定量（磺柳酸法）。觀察指標(biāo)：包括大鼠飲食量、體毛、大便、精神狀態(tài)及體重、水腫等情況。結(jié)果：模型對照組大鼠精神較差，食量減少，體重減輕，體毛蓬松，自第三周開始水腫明顯。實(shí)施例1組和對照例1組大鼠精神較好，食量較多，體重重于模型對照組，水腫較輕，而實(shí)施例1組體重、精神、食量、水腫狀況好于對照例1組。各組大鼠尿蛋白定量動(dòng)態(tài)變化比較見表3所示。表3組別開始時(shí)間檢測結(jié)果結(jié)束時(shí)間檢測結(jié)果空白對照組22.15±3.9723.28±4.03模型對照組228.27±48.35364.53±67.81實(shí)施例1組231.64±54.33217.65±50.72對照例1組226.08±48.69279.04±69.36最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3