一種治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物，所述藥物由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成：桂枝50～300份，茯苓50～400份，莪術(shù)50～400份，牡丹皮50～400份，蒲公英50～400份，紅花50～400份，桃仁50～400份，夏枯草100～1000份，海藻50～400份，昆布50～400份，香附50～400份，鱉甲50～1000份。本發(fā)明還提供其制備方法。應(yīng)用本發(fā)明的藥物可有效治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥，且無毒副作用。
【專利說明】一種治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物。【背景技術(shù)】
[0002]子宮肌瘤(Hysteromyoma)又稱子宮平滑肌瘤，是女性生殖器最常見的一種良性腫瘤。多無癥狀，少數(shù)表現(xiàn)為陰道出血，腹部觸及腫物以及壓迫癥狀等。如發(fā)生蒂扭轉(zhuǎn)或其他情況時可引起疼痛。以多發(fā)性子宮肌瘤常見。本病確切病因不明，現(xiàn)代西醫(yī)學采取性激素或手術(shù)治療，尚無其他理想療法。
[0003]子宮內(nèi)膜異位組織含有雌激素和孕激素受體，使其可以隨著月經(jīng)周期中激素水平的變化而生長和分化。子宮內(nèi)膜異位癥通常限于腹部器官的腹膜表面或者漿膜表面，常見于卵巢、闊韌帶后部、后盲管、以及子宮骶韌帶(有時形成子宮骶結(jié)節(jié))。子宮內(nèi)膜異位癥的臨床表現(xiàn)為骨盆疼痛、骨盆包塊、月經(jīng)改變和不孕，而位于腸道或膀胱的病變可在排便或排尿過程中引起疼痛、腹脹以及隨著月經(jīng)而出現(xiàn)的直腸出血(大多數(shù)子宮內(nèi)膜異位植入物在月經(jīng)期間都會出血)。卵巢或附件結(jié)構(gòu)上的子宮內(nèi)膜異位植入物可以形成子宮內(nèi)膜瘤(一種位于卵巢的囊性包塊)或附件粘連。據(jù)報道，子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)現(xiàn)于10-15%的25-44歲之間月經(jīng)活躍的女性，以及25% -50%的不孕女性。
[0004]子宮內(nèi)膜異位癥的治療包括:藥物抑制卵巢功能以阻止子宮內(nèi)膜植入物的生長和活性、保守性手術(shù)切除盡可能 多的子宮內(nèi)膜異位組織、前兩種治療的組合應(yīng)用以及全子宮切除術(shù)，通常同時切除卵巢和輸卵管。藥物治療包括:雌激素抑制，促性腺激素釋放激素激動劑或拮抗劑，雄激素以及孕激素，但是都存在一定的副作用。如雌激素抑制的副作用包括腹脹、乳房觸痛、突破出血以及深靜脈血栓形成等。
[0005]而中醫(yī)的優(yōu)勢就在于可免除手術(shù)帶來的痛苦和西藥激素對身體的危害，中藥制劑對身體的危害小，副作用小，能夠治標治本，從根本上解決問題，因此開發(fā)出一種治療子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的中藥藥物勢在必行。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物及其制備方法。
[0007]本發(fā)明提供了一種治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物，所述藥物由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:桂枝50~300份，茯苓50~400份，莪術(shù)50~400份，牡丹皮50~400份，蒲公英50~400份，紅花50~400份，桃仁50~400份，夏枯草100~1000份，海藻50~400份，昆布50~400份，香附50~400份，鱉甲50~1000份。
[0008]優(yōu)選地，所述藥物由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:桂枝100~200份，茯苓160-300份，莪術(shù)160-300份，牡丹皮160-300份，蒲公英160-300份，紅花160-300份，桃仁160-300份，夏枯草570-700份，海藻160-300份，昆布160-300份，香附160-300份，鱉甲 570-750 份。[0009]更優(yōu)選地，所述藥物由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:桂枝152份，茯苓228份，莪術(shù)228份，牡丹皮228份，蒲公英228份，紅花228份，桃仁228份，夏枯草760份，海藻228份，昆布228份，香附228份，鱉甲380份。
[0010]本發(fā)明的第二個目的是要求保護藥物的劑型，所述藥物的劑型為片劑或丸劑。
[0011]本發(fā)明的第三個目的是要求保護上述治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的制備方法，包括片劑和丸劑的制備，所述片劑的制備方法為:取配方量的十二味藥，將桂枝5~100克粉碎成細粉，剩余的桂枝與牡丹皮、莪術(shù)、夏枯草、香附等4味加5~14倍20~95%乙醇回流提取I~3次，每次0.5~3小時，濾過，回收乙醇，濃縮至稠膏，20~100°C真空干燥；另取蒲公英、茯苓、紅花、桃仁、海藻、昆布、鱉甲等七味加5~14倍水提取I~3次，每次0.5~3小時；500~4000r/min轉(zhuǎn)速離心5~60分鐘,濾過,濾液濃縮至稠膏，20~100°C真空干燥；將上述干浸膏合并，粉碎成細粉，加入粉碎的桂枝粉、細粉總質(zhì)量I~10%的微晶纖維素、I~10%的羥丙甲基纖維素，混合均勻，過篩，用適量50%~95%乙醇制成顆粒，干燥，加0.5~3%硬脂酸鎂混勻，壓片，包薄膜衣(轉(zhuǎn)速10~200r/min，風溫20~IOO0C )，即得。
[0012]進一步地,所述丸劑的制備方法為:取配方量的十二味藥,粉碎成細粉,過篩(必須符合《中國藥典》對細粉的要求，即能全部通過五號篩，并含能通過六號篩不少于95%的粉末)，混勻；每100g粉末加煉蜜100_120g，制成蜜丸，即得。
[0013]本發(fā)明的第四個目的是要求保護上述藥物在制備治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物中的應(yīng)用。
[0014]本發(fā)明組方為桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、莪術(shù)、紅花、蒲公英、鱉甲、夏枯草、昆布、香附、海藻等十二味藥材。方中桂枝溫經(jīng)、行氣、通陽，暖宮消疲，溫腎扶陽、利水消積；牡丹皮、桃仁、莪術(shù)理氣活血、消癥散結(jié)；茯苓滲濕健脾；紅花活血中之滯；鱉甲、海藻軟堅散結(jié)、養(yǎng)陰清熱。具有通絡(luò)散瘀，軟堅散結(jié)，清熱消堅的功效，用于氣滯血瘀、瘀熱內(nèi)結(jié)所致的婦人盆腔結(jié)塊癥積，子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎性包塊等病。諸方合用，達到治愈子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥的功效。
[0015]本發(fā)明的丸劑已有多年的臨床應(yīng)用經(jīng)驗，有較完整的藥效學和毒理學資料，有確切的療效，適用于治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥，且無毒副作用；本發(fā)明的片劑是在丸劑的基礎(chǔ)上改變劑型的成果，所采用的的制劑工藝能保證藥物的有效性，片劑質(zhì)量在原料藥、中間體、制劑各個環(huán)節(jié)均有可靠保證，能為臨床試驗提供質(zhì)量合格的藥品。經(jīng)試驗，本發(fā)明的片劑同樣能夠用于治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥。
【具體實施方式】
[0016]以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。
[0017]實施例1
[0018]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的配方由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:
[0019] 桂枝152份，茯苓228份，莪術(shù)228份，牡丹皮228份，蒲公英228份，紅花228份，桃仁228份，夏枯草760份，海藻228份，昆布228份，香附228份，鱉甲380份。
[0020]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的片劑的制備方法如下:
[0021]取桂枝152g，茯苓228g，莪術(shù)228g，牡丹皮228g，蒲公英228g，紅花228g，桃仁228g，夏枯草760g，海藻228g，昆布228g，香附228g，鱉甲380g ；以上十二味，將桂枝33克粉碎成細粉，剩余的桂枝與牡丹皮、莪術(shù)、夏枯草、香附等4味加14倍60%乙醇回流提取二次，每次1.5小時，濾過，回收乙醇，濃縮至稠膏，60°C真空干燥。另取蒲公英、茯苓、紅花、桃仁、海藻、昆布、鱉甲等七味加14倍水提取三次，每次I小時。3000r/min轉(zhuǎn)速離心25分鐘，濾過，濾液濃縮至稠膏，60°C真空干燥。將上述干浸膏合并，粉碎成細粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏細粉總質(zhì)量5%的微晶纖維素、5%的羥丙甲基纖維素，混合均勻，過篩，用適量90%~93%乙醇制成顆粒，干燥，加質(zhì)量百分比1%硬脂酸鎂混勻，壓成1000片(0.4克/片，40~50N)，包薄膜衣(轉(zhuǎn)速30r/min,風溫30°C )，即得。
[0022]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的丸劑的制備方法如下:
[0023]取配方量的桂枝，茯苓，莪術(shù)，牡丹皮，蒲公英，紅花，桃仁，夏枯草，海藻，昆布，香附，鱉甲，粉碎成細粉，過篩(必須符合《中國藥典》對細粉的要求，即能全部通過五號篩，并含能通過六號篩不少于95%的粉末)，混勻。每100克粉末加煉蜜100~120g,制成大蜜丸或小蜜丸，即得。
[0024]實施例2
[0025]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的配方由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:
[0026]桂枝50份，茯苓50份，莪術(shù)50份，牡丹皮50份，蒲公英50份，紅花50份，桃仁50份，夏枯草100份,海藻50份，昆布50份,香附50份,鳘甲50份。
[0027]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的片劑的制備方法如下:
[0028]取桂枝50g,獲茶50g,莪術(shù)50g,牡丹皮50g,蒲公英50g,紅花50g,桃仁50g,夏枯草100g，海藻50g，昆布50g，香附50g，鱉甲50g。以上十二味，取桂枝5克粉碎成細粉，剩余的桂枝與牡丹皮、莪術(shù)、夏枯草、香附等4味加5倍20%乙醇回流提取3次，每次0.5小時，濾過，回收乙醇，濃縮至稠膏，20°C真空干燥。另取蒲公英、茯苓、紅花、桃仁、海藻、昆布、鱉甲等七味加5倍水提取3次,每次0.5小時。4000r/min轉(zhuǎn)速離心5分鐘,濾過,濾液濃縮至稠膏，20°C真空干燥。將上述干浸膏合并，粉碎成細粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏細粉總質(zhì)量8 %的微晶纖維素、8 %的羥丙甲基纖維素，混合均勻，過篩，用適量50-55 %乙醇制成顆粒，干燥，加質(zhì)量百分比0.5%硬脂酸鎂混勻，壓成0.4克/片的片劑(20-30N)，包薄膜衣(轉(zhuǎn)速10r/min，風溫100°C )，即得。
[0029]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的丸劑的制備方法與實施例1中相同。
[0030]實施例3
[0031]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的配方由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:
[0032]桂枝300份，茯苓400份，莪術(shù)400份，牡丹皮400份，蒲公英400份，紅花400份，桃仁400份，夏枯草1000份，海藻400份，昆布400份，香附400份，鱉甲1000份。
[0033]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的片劑的制備方法如下:
[0034]取桂枝300g，茯苓400g，莪術(shù)400g，牡丹皮400g，蒲公英400g，紅花400g，桃仁400g，夏枯草lOOOg，海藻400g，昆布400g，香附400g，鱉甲lOOOg。將桂枝100克粉碎成細粉，剩余的桂枝與牡丹皮、莪術(shù)、夏枯草、香附等4味加12倍95%乙醇回流提取2次，每次2小時，濾過，回收乙醇，濃縮至稠膏，80°C真空干燥。另取蒲公英、茯苓、紅花、桃仁、海藻、昆布、鱉甲等七 味加12倍水提取2次，每次1.5小時。2000r/min轉(zhuǎn)速離心40分鐘，濾過，濾液濃縮至稠膏，80°C真空干燥。將上述干浸膏合并，粉碎成細粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏細粉總質(zhì)量4%微晶纖維素、4%羥丙甲基纖維素，混合均勻，過篩，用適量60-65%乙醇制成顆粒，干燥，加質(zhì)量百分比2%硬脂酸鎂混勻，壓成0.4克/片的片劑(100-120N)，包薄膜衣(轉(zhuǎn)速70r/min,風溫50°C ),即得。
[0035]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的丸劑的制備方法與實施例1中相同。
[0036]實施例4
[0037]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的配方由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:
[0038]桂枝200份，茯苓300份，莪術(shù)300份，牡丹皮300份，蒲公英300份，紅花300份，桃仁300份，夏枯草700份，海藻300份，昆布300份，香附300份，鱉甲750份。
[0039]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的片劑的制備方法如下:
[0040]取桂枝200g，茯苓300g，莪術(shù)300g，牡丹皮300g，蒲公英300g，紅花300g，桃仁300g，夏枯草700g，海藻300g，昆布300g，香附300g，鱉甲750g。將桂枝55克粉碎成細粉，剩余的桂枝與牡丹皮、莪術(shù)、夏枯草、香附等4味加8倍72%乙醇回流提取I次，提取3小時，濾過，回收乙醇，濃縮至稠膏，100°C真空干燥。另取蒲公英、茯苓、紅花、桃仁、海藻、昆布、鱉甲等七味加8倍水提取I次,每次3小時。2500r/min轉(zhuǎn)速離心60分鐘,濾過,濾液濃縮至稠膏，100°C真空干燥。將上述干浸膏合并，粉碎成細粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏細粉總質(zhì)量6%微晶纖維素、6%羥丙甲基纖維素，混合均勻，過篩，用適量80-85%乙醇制成顆粒，干燥，加質(zhì)量百分比3%硬脂酸鎂混勻，壓成0.4克/片的片劑(170-180N)，包薄膜衣(轉(zhuǎn)速100r/min，風溫80°C )，即得。
[0041]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的丸劑的制備方法與實施例1中相同。
[0042]實施例5
[0043]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的配方由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:
[0044]桂枝100份,獲茶160份,莪術(shù)160份,牡丹皮160份,蒲公英160份,紅花160份，桃仁160份，夏枯草570份，海藻160份，昆布160份，香附160份，鱉甲570份。
[0045]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的片劑的制備方法如下:
[0046]取桂枝100g,獲茶160g,莪術(shù)160g,牡丹皮160g,蒲公英160g,紅花160g,桃仁160g，夏枯草570g，海藻160g，昆布160g，香附160g，鱉甲570g。將桂枝15克粉碎成細粉，剩余的桂枝與牡丹皮、莪術(shù)、夏枯草、香附等4味加6倍80%乙醇回流提取3次，提取0.5小時，濾過，回收乙醇，濃縮至稠膏，65°C真空干燥。另取蒲公英、茯苓、紅花、桃仁、海藻、昆布、鱉甲等七味加6倍水提取3次，每次0.5小時。1000r/min轉(zhuǎn)速離心35分鐘，濾過，濾液濃縮至稠膏，65°C真空干燥。將上述干浸膏合并，粉碎成細粉，加入粉碎的桂枝粉、合并后干浸膏細粉總質(zhì)量9 %微晶纖維素、9 %羥丙甲基纖維素，混合均勻，過篩，用適量90-93 %乙醇制成顆粒，干燥，加質(zhì)量百分比1.5%硬脂酸鎂混勻，壓成0.4克/片的片劑(180-200N)，包薄膜衣(轉(zhuǎn)速180r/min,風溫100°C ),即得。
[0047]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的丸劑的制備方法與實施例1中相同。
[0048]實施例6
[0049]本發(fā)明的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的藥理、毒理學研究結(jié)果如下:
[0050]經(jīng)試驗，應(yīng)用本發(fā)明的方法制備得到的片劑和丸劑均對子宮肌瘤和子宮內(nèi)膜異位癥有良好的治療效果，其中，應(yīng)用實施例4和5的配方及方法制備的片劑和丸劑治療效果較好，應(yīng)用實施例1的配方及方法制備的片劑和丸劑治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的效果最佳，以下將以實施例1制備的片劑(為了方便區(qū)分，在下述試驗中，本發(fā)明將片劑稱為桂紅鱉甲片)和丸劑(以下稱為消瘤丸)詳細說明研究結(jié)果。
[0051]I桂紅鱉甲片和消瘤丸對內(nèi)膜異位的作用
[0052]1.1桂紅鱉甲片和消瘤丸對大鼠子宮內(nèi)膜異位的作用
[0053]健康雌性SD大鼠90只，體重250±20g，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，隨機選取10只作為空白對照組，其余80只用于造模。造模前一日，每鼠皮下注射苯甲酸雌二醇0.lmg/kg.d。以20%的烏拉坦(4ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠，下腹部剃毛后，用75%的酒精消毒。在下腹正中縱切一切口約2cm，暴露子宮。結(jié)扎右側(cè)卵巢端，并將右側(cè)子宮角遠端長約1.5cm的子宮段結(jié)扎后剪下，放入盛 有無菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中。剪成5_X 5_的子宮組織(包括肌層)2塊，以漿膜面對腹膜，粘膜面朝向腹腔，用6-0的不吸收線分別固定四角于切口兩側(cè)腹壁肌肉，逐層連續(xù)縫合腹部切口，常規(guī)關(guān)腹。注意觀察大鼠的呼吸、心跳，待其自然蘇醒。術(shù)后肌注青霉素預防感染，共3d，術(shù)后第二天注射苯甲酸雌二醇0.lmg/kg.d，每三天一次，共5次。
[0054]術(shù)后第15天，將造模成功動物隨機分為6組，即模型組、桂紅鱉甲片低(0.35g/kg ；相當于含生藥量2.926g/kg)、中(0.70g/kg;相當于含生藥量5.852g/kg)、高(1.40g/kg ；相當于含生藥量11.704g/kg)劑量組,消瘤丸組(4.50g/kg ;相當于含生藥量2.25g/kg),桂枝茯苓膠囊對照組(0.25g/kg)，配制相應(yīng)濃度藥物，按1.0ml/lOOg進行灌胃，空白對照組灌胃蒸餾水1.0ml/100g，連續(xù)給藥30天。
[0055]給藥結(jié)束后，所有大鼠用乙醚麻醉，打開腹腔，觀察異位內(nèi)膜病灶生長情況，并測量記錄異位內(nèi)膜的長度、寬度、厚度，計算異位體積，并記錄異位組織毛細血管以及粘連情況，將異位組織連同粘連的旁組織剪下固定于10%的甲醛中作病理檢查以及免疫組化法檢測⑶34的表達情況，解剖取卵巢稱重，計算器官系數(shù)(卵巢重量/大鼠體重X 100%，％)。
[0056]免疫組化染色步驟:石蠟切片常規(guī)脫蠟水化，滴加4%過氧化氫，放置20min，加熱修復抗原30min，PBS磷酸鹽緩沖液沖洗3min X 3次，滴加一抗(1: 50)，4°C孵育過夜，PBS沖洗3minX3次，二抗孵育20min，PBS沖洗3minX3次，DBA顯色，蘇木素復染后中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。染色后每只實驗動物切片隨機選取具有代表性的400倍鏡視野觀察、計數(shù)，讀片參照Formwitz評分方法，以切片中部細胞作為基數(shù)100%，根據(jù)受體陽性細胞百分數(shù)及染色深淺分四級:_級(陰性):陽性細胞<25% (I分)或不染色(I分)；+級(弱陽性):陽性細胞25%~50% (2分)，陽性染色呈黃色、較清晰(2分)；++級(陽性):陽性細51%~75% (3分)，陽性染色呈棕黃色、清晰(3分)；+++級(強陽性):陽性細胞>75% (4分)，細胞漿為褐色(4分)；以兩次評分的積作為最終分數(shù)。
[0057]1.2桂紅鱉甲片和消瘤丸對小鼠子宮內(nèi)膜異位癥的作用[0058]雌性昆明種小鼠90只，體重25±2g，造模前兩日肌注苯甲酸雌二醇0.05mL/只.do第3天除正常對照組12只外，其余78只動物進行造模，腹腔注射10%烏拉坦麻醉25mL/kg，固定于手術(shù)臺上，腹部消毒；打開腹腔，將小鼠左側(cè)子宮卵巢端及陰道端兩側(cè)結(jié)扎后，剪下，縱剖成2片(5mmX5mm)，縫在雙側(cè)腹壁上。術(shù)后三天每日腹腔注射青霉素170萬U/kg，術(shù)后每周肌肉注射苯甲酸雌二醇0.05mL/只.次，注射兩次，以促使異位子宮內(nèi)膜的生長。
[0059]實驗第2周造模成功動物隨機分6組，即為模型組、桂紅鱉甲片低劑量組(0.5g/kg)、桂紅鳘甲片中劑量組(1.0g/kg)、桂紅鳘甲片高劑量組(2.0g/kg),消瘤丸組(9.0g/kg,相當于含生藥量4.5g/kg),和桂枝獲茶膠囊組(1.6g/kg)。各組動物按0.2mL/10g灌胃給藥，空白對照組和模型組分別給予等量蒸餾水，連續(xù)給藥5周。
[0060]末次給藥后30分鐘頸椎脫白處死動物，固定于手術(shù)臺上，剃毛，腹部消毒，打開腹腔，觀察異位內(nèi)膜病灶生長情況，并測量記錄異位內(nèi)膜的長度、寬度、厚度，將子宮及異位組織連同粘連的旁組織剪下固定于10%的甲醛中作病理檢查、免疫組化法檢測CD34和VEGF的表達情況，稱量卵巢的重量，計算器官系數(shù)(卵巢重量/小鼠體重X 100%，%)0
[0061]免疫組化染色步驟:石蠟切片常規(guī)脫蠟水化，滴加4%過氧化氫，放置20min，加熱修復抗原30min，PBS磷酸鹽緩沖液沖洗3minX3次，滴加一抗(VEGF1:50，CD341:50)，4°C孵育過夜，PBS沖洗3minX3次，二抗孵育20min，PBS沖洗3minX3次，DBA顯色，蘇木素復染后中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。染色后每只實驗動物切片隨機選取具有代表性的400倍鏡視野觀察、計數(shù)，讀片參照Formwitz評分方法，以切片中部細胞作為基數(shù)100%，根據(jù)受體陽性細胞百分數(shù)及染色深淺分四級:_級(陰性):陽性細胞<25% (I分)或不染色(I分)；+級(弱陽性):陽性細胞25%~50% (2分)，陽性染色呈黃色、較清晰(2分)；++級(陽性):陽性細51%~75% (3分)，陽性染色呈棕黃色、清晰(3分)；+++級(強陽性):陽性細胞> 75% (4分)，細胞漿為褐色(4分)；以兩次評分的積作為最終分數(shù)。
[0062]1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法
[0063]結(jié)果用均數(shù)土標準差(J ±SD)表示，數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，兩組
間比較采用t檢驗。
[0064]1.4.實驗結(jié)果
[0065]1.4.1桂紅鱉甲片和消瘤丸對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的作用
[0066]1.4.1.1桂紅鱉甲片和消瘤丸對大鼠體重與卵巢系數(shù)的影響，結(jié)果見表1。
[0067]表1桂紅鱉甲片和消瘤丸對大鼠體重、卵巢系數(shù)的影響(X 土SD)
[0068]
【權(quán)利要求】
1.一種治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物，其特征在于:所述藥物由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:桂枝50~300份，茯苓50~400份，莪術(shù)50~400份，牡丹皮50~400份，蒲公英50~400份，紅花50~400份，桃仁50~400份，夏枯草100~1000份，海藻50~400份，昆布50~400份，香附50~400份，鱉甲50~1000份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于:所述藥物由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:桂枝100~200份，茯苓160-300份，莪術(shù)160-300份，牡丹皮160-300份，蒲公英160-300份,紅花160-300份，桃仁160-300份，夏枯草570-700份，海藻160-300份，昆布160-300份，香附160-300份，鱉甲570-750份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物，其特征在于:所述藥物由以下質(zhì)量份數(shù)的各組分組成:桂枝152份，茯苓228份，莪術(shù)228份，牡丹皮228份，蒲公英228份，紅花228份，桃仁228份，夏枯草760份，海藻228份，昆布228份，香附228份，鱉甲380份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的藥物，其特征在于:所述藥物的劑型為片劑或丸劑。
5.權(quán)利要求1-3任一所述的治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物的制備方法，包括片劑和丸劑的制備，其特征在于:所述片劑的制備方法為:取配方量的十二味藥，將桂枝5~100克粉碎成細粉，剩余的桂枝與牡丹皮、莪術(shù)、夏枯草、香附等4味加5~14倍20~95%乙醇回流提取I~3次，每次0.5~3小時，濾過，回收乙醇，濃縮至稠膏，20~100°C真空干燥；另取蒲公英、茯苓、紅花、桃仁、海藻、昆布、鱉甲等七味加5~14倍水提取I~3次，每次0.5~3小時；500~4000 r/min轉(zhuǎn)速離心5~60分鐘,濾過,濾液濃縮至稠膏，20~100°C真空干燥；將上述干浸膏合并,粉碎成細粉,加入粉碎的桂枝粉、細粉總質(zhì)量I~10%的微晶纖維素、I~10%的羥丙甲基纖維素，混合均勻，過篩，用適量50%~95%乙醇制成顆粒，干燥，加0.5~3%硬脂酸鎂混勻，壓片，包薄膜衣(轉(zhuǎn)速10~200r/min，風溫20~100°C )，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于:所述丸劑的制備方法為:取配方量的十二味藥，粉碎成細粉，過篩，混勻；每100g粉末加煉蜜100-120g，制成蜜丸，即得。
7.權(quán)利要求1-3任一所述的藥物在制備治療子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K36/9066GK104013928SQ201410309279
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年7月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月1日
【發(fā)明者】聶繼紅, 王萍, 趙翡翠 申請人:新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院