趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了趕黃草提取物在制備降血糖藥物治療藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述趕黃草提取物通過(guò)實(shí)驗(yàn)：（1）體外α-淀粉酶抑制活性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示趕黃草提取物對(duì)α-淀粉酶有顯著的抑制作用。（2）趕黃草提取物對(duì)小鼠淀粉耐量實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明趕黃草提取物能明顯降低小鼠的給淀粉后的血糖濃度。（3）趕黃草提取物灌胃對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn),結(jié)果顯示對(duì)高血糖治療的同時(shí)并無(wú)明顯毒副作用。因此，本發(fā)明為臨床防治糖尿病提供了新的途徑，本發(fā)明趕黃草提取物制備方法簡(jiǎn)便，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取物，具體涉及中藥提取物的應(yīng)用，尤其涉及趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]由于生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變、日趨緊張的生活節(jié)奏以及少動(dòng)多坐的生活方式等諸多因素，全球糖尿病發(fā)病率增長(zhǎng)迅速，糖尿病已經(jīng)成為繼腫瘤、心血管病變之后第三大嚴(yán)重威脅人類健康的慢性疾病。當(dāng)糖尿病患者經(jīng)過(guò)飲食和運(yùn)動(dòng)治療后，血糖的控制仍不能達(dá)到治療目標(biāo)時(shí)，需采用藥物治療。為此，研究和開(kāi)發(fā)有效的降血糖的藥物有著極其重要的意義。目前，用于降血糖的藥物主要有口服降糖藥物和注射降糖藥物。其中口服降糖藥物以非胰島素類藥物為主，分為a-糖苷酶抑制劑(阿卡波糖)、雙胍(二甲雙胍)類，促胰島素分泌劑類和胰島素增敏劑。a -糖苷酶抑制劑、雙胍類及胰島素增收劑單獨(dú)使用一般不會(huì)引起低血糖，但與其他藥物連用時(shí)仍可能發(fā)生；而雙胍類的降糖藥對(duì)腸胃的傷害較大，容易導(dǎo)致消化不良，嚴(yán)重時(shí)可能會(huì)導(dǎo)致酮尿和乳酸酸中毒。現(xiàn)代藥理研究證明，很多單味中藥具有降糖作用，中醫(yī)藥治療糖尿病不僅降低血糖，更重要的是注重防治糖尿病并發(fā)癥，起到提高生活質(zhì)量和延長(zhǎng)壽命的作用。趕黃草(Penthorum chinense Pursh)又名扯根菜、水澤蘭、山珍珠等，據(jù)《天寶本草》、《救荒本草》等記載，趕黃草具有通絡(luò)活血、祛瘀除濕、活血散瘀等作用。文獻(xiàn)報(bào)道趕黃草具有防治肝炎、肝保護(hù)的藥理活性，但至今尚未見(jiàn)趕黃草提取物治療聞血糖的報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明所要解決的技 術(shù)問(wèn)題在于研究設(shè)計(jì)趕黃草提取物在制藥中的用途。
[0004]本發(fā)明提供了趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明所述趕黃草提取物是通過(guò)下列方法制得的:
[0006]趕黃草全草粉碎后，用20%~80%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量為趕黃草重量的10倍量W/L，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環(huán)境下烘干至恒重，得到趕黃草提取物。
[0007]趕黃草原料可以通過(guò)市售得到。
[0008]本發(fā)明所述趕黃草提取物通過(guò)下列藥效實(shí)驗(yàn)，證明其具有降血糖的作用。
[0009]( I)體外a -淀粉酶抑制活性試驗(yàn)
[0010]樣品溶解于DMS0,配制成10mg/ml的溶液，a -淀粉酶的活性按照Caraway方法(Am.J.Clin.Path.，1959，32，97-99，)檢測(cè)，測(cè)得趕黃草提取物能抑制a -淀粉酶的活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示趕黃草提取物在278ug/ml濃度下a-淀粉酶的抑制活性超過(guò)陽(yáng)性藥(阿卡波糖)。因此趕黃草提取物有較強(qiáng)降血糖的作用，可用于非正常高血糖疾病的治療。
[0011](2 )體內(nèi)小鼠淀粉耐量實(shí)驗(yàn)
[0012]采用小鼠淀粉耐量模型，觀察本發(fā)明趕黃草提取物灌胃給藥后的降血糖作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，趕黃草提取物高、中、低劑量組對(duì)小鼠有顯著的降血糖作用，并且高、中、低三劑量組呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
[0013](3 )小鼠灌胃給予趕黃草提取物的最大耐受量MTD>8.0g/kg,為趕黃草提取物有效劑量(200mg/kg)的40倍，并未見(jiàn)到小鼠有明顯異常。因此趕黃草提取物對(duì)高血糖治療的同時(shí)并無(wú)明顯毒副作用。
[0014]因此，本發(fā)明趕黃草提取物可用于制備降血糖的藥物。
[0015]本發(fā)明所述藥物為由趕黃草提取物作為活性成分與藥用輔料組成的藥物組合物。
[0016]本發(fā)明趕黃草提取物制備方法簡(jiǎn)便，具有明顯的降血糖活性，為防治非正常高血糖提供了基礎(chǔ)，為臨床治療聞血糖提供了新的中藥，療效確切，副作用小，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1趕黃草20%，50%, 80%乙醇提取物HPLC對(duì)照?qǐng)D
[0018]縱坐標(biāo)為響應(yīng)強(qiáng)度，單位(AU)，橫坐標(biāo)為時(shí)間，單位(分鐘)
[0019]A:趕黃草20%乙醇提取物；B:趕黃草50%乙醇提取物；C:趕黃草80%乙醇提取物。
[0020]圖2趕黃草提取物對(duì)小鼠餐后血糖的降低作用
[0021]縱坐標(biāo)為血糖值，單位(m mol)，橫坐標(biāo)為時(shí)間，單位(分鐘)
[0022]A:模型對(duì)照組；B:低劑量組；C:陽(yáng)性藥組；D:中劑量組；E:空白對(duì)照組；F:高劑量組
[0023]圖3趕黃草提取物降小鼠餐后血糖的量效關(guān)系
[0024]縱坐標(biāo)為AUC:曲線下面積,單位(mmol/L ? min)
[0025]橫軸為不同組別:A:模型對(duì)照組；B:趕黃草提取物200mg/kg組；C:趕黃草提取物400mg/kg組；D:趕黃草提取物600mg/kg組；E:陽(yáng)性對(duì)照組；F:空白組
[0026]注廣給藥組跟模型組比較P < 0.05
【具體實(shí)施方式】:
[0027]下面用非限定性實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
[0028]實(shí)施例所用原料市售得到。
[0029]實(shí)施例1趕黃草提取物的制備
[0030]將5kg趕黃草(市售)全草粉碎后，用80%的乙醇50L浸泡過(guò)夜，80%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量50L，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環(huán)境下烘干至恒重(564g)，按生藥量計(jì)得率為11.3%。制備得的趕黃草提取物按實(shí)施例4進(jìn)行HPLC (高效液相)檢測(cè)。
[0031]實(shí)施例2趕黃草提取物的制備
[0032]將5kg趕黃草(市售)全草粉碎后，用50%的乙醇50L浸泡過(guò)夜，50%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量50L，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環(huán)境下烘干至恒重(541g)，按生藥量計(jì)得率為10.8%。制備得的趕黃草提取物按實(shí)施例4進(jìn)行HPLC (高效液相)檢測(cè)。
[0033]實(shí)施例3趕黃草提取物的制備[0034]將5kg趕黃草(市售)全草粉碎后，用20%的乙醇50L浸泡過(guò)夜，20%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量50L，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環(huán)境下烘干至恒重(516g)，按生藥量計(jì)得率為10.3%。制備得的趕黃草提取物按實(shí)施例4進(jìn)行HPLC (高效液相)檢測(cè)。
[0035]實(shí)施例4趕黃草20%，50%, 80%乙醇提取物HPLC對(duì)照?qǐng)D
[0036]將實(shí)施例1、2、3得到的趕黃草提取物分別進(jìn)高效液相進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種提取方法得到的趕黃草提取物成分幾乎沒(méi)有差異，見(jiàn)圖1。
[0037]所米用HPLC 條件如下:色譜柱:Diamonsil C18column (4.6mmX 250mm, 5 u m, Dikma);流動(dòng)相:A相為乙腈，B相為0.2%甲酸緩沖液(pH=3.0);梯度洗脫:0min-65min-70min,流動(dòng)相A:B的比例為10 =90-50:50-90:10 ;流速:1.0ml/min，運(yùn)行時(shí)間70min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫為300C ;進(jìn)樣量IOu 10
[0038]實(shí)施例5趕黃草提取物體外a -淀粉酶抑制活性試驗(yàn)
[0039]I材料與方法
[0040]1.1試驗(yàn)藥物
[0041]實(shí)施例1制 備的趕黃草提取物
[0042]1.2實(shí)驗(yàn)材料
[0043]阿卡波糖(拜耳，50mg/片)，葡萄糖檢測(cè)試劑盒(葡萄糖氧化酶_過(guò)氧化酶法，上海榮盛生物技術(shù)有限公司，)a -淀粉酶(Wako Pure Chemicals Ind., Osaka, Japan),酶標(biāo)儀(EIx800, Biotek),96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Corning/Costar)
[0044]1.3實(shí)驗(yàn)方法
[0045]1.3.1顯色劑:先將苯甲酸鈉10.8克，碘化鉀5克溶于400ml水中，然后定容至500mlo
[0046]1.3.2用25mM的PIPES緩沖液將a -淀粉酶配制成27.8mg/L溶液(PH=6.9)。稱量趕黃草提取物(實(shí)施例1制得，)用DMSO配成10mg/ml的溶液，再用水分別稀釋成139ug/ml和278ug/ml,同時(shí)將阿卡波糖用蒸懼水配制成濃度為278ug/ml溶液；將淀粉用蒸懼水配制成濃度為0.16%的淀粉溶液。
[0047]1.3.3用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，實(shí)驗(yàn)分為4組，分別為空白組對(duì)照(蒸餾水)，陽(yáng)性對(duì)照組(阿卡波糖)，2個(gè)樣品測(cè)定組，每組各設(shè)6個(gè)復(fù)孔。
[0048]1.3.4分別將上述2個(gè)濃度的趕黃草提取物及阿卡波糖溶液加入板孔上編組的相應(yīng)各孔，每孔25ul樣品溶液，空白對(duì)照組加等量蒸餾水，分別于每組其中三個(gè)孔加入12.5ul a -淀粉酶溶液，另三個(gè)孔加入12.5ul蒸餾水，37°C溫孵lOmin，最后分別于各孔加A 500uL顯色試劑終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀630nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(A)，按下劉方法計(jì)算抑制
率(％):抑制率(％) - [I (A樣品不加酶A樣品瞞)/ (A空白對(duì)照不加酶A空白對(duì)照；(jn酶)]X 100%
[0049]2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0050]表2趕黃草提取物體外a -淀粉酶抑制活性(n=3, i±s)組別抑制率
空白組O
[0051]陽(yáng)性對(duì)照組65 ±2,0%
139ug/ml趕黃草提取物83 土 2.0%
278ug/ml趕黃草提取物80 土 3.0%
[0052]3 結(jié)論
[0053]趕黃草提取物體外a -淀粉酶抑制活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:給藥后，趕黃草提取物能明顯抑制a -淀粉酶活性；其在139ug/ml、278ug/ml濃度下，a -淀粉酶抑制活性甚至超過(guò)陽(yáng)性藥(阿卡波糖)，表現(xiàn)出較強(qiáng)的降糖效果。 [0054]實(shí)施例6趕黃草提取物體內(nèi)小鼠淀粉耐量實(shí)驗(yàn)
[0055]I材料與方法
[0056]1.1實(shí)驗(yàn)材料
[0057]阿卡波糖(拜耳,50mg/片)，玉米淀粉(一招鮮，袋裝,458g),血糖測(cè)定試紙(Major II)
[0058]1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0059]ICR小鼠(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK (滬)2012-0002 ;體重:20g左右;性另Ij:雄性；每組10只)。
[0060]1.3趕黃草提取物
[0061]趕黃草提取物由實(shí)施例1制備，烘干(50~60°C環(huán)境下烘干至恒重)，然后分別精密稱取趕黃草提取物400mg、800mg、1200mg，加入IOml0.5%羧甲基纖維素鈉，分別配成濃度為40mg/ml、80mg/ml和120mg/ml的懸浮液與2.5g/kg淀粉等體積混合后，作為趕黃草提取物低、中、高劑量組，其趕黃草提取物的濃度分別為20mg/ml、40mg/ml和60mg/ml。
[0062]1.4給藥方法
[0063]給藥體積均為0.lml/10g體重，模型對(duì)照組給等體積的淀粉，全部采用灌胃法給藥。確定趕黃草提取物的給藥量分別為200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg。
[0064]1.5實(shí)驗(yàn)方法
[0065]將60只ICR小鼠隨機(jī)分成6組，在適應(yīng)性飼養(yǎng)2_3天后，稱取體重，按體重隨機(jī)分組(每組體重相等)，每組10只。撤除食物及墊料饑餓12h，分為空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(阿卡波糖，給藥劑量25mg/kg)，趕黃草提取物低、中、高劑量組，然后一起灌胃給藥?？瞻捉M按0.lml/10g體重給予0.5%羧甲基纖維素鈉。給糖前測(cè)定血糖,在給糖后30min,60min,120min時(shí)各測(cè)定血糖
[0066]一次,然后計(jì)算AUC (area under the curve),計(jì)算公式如下:
AUr fm.mol/fl ? h1- _0 + 關(guān)昶 y a c ,鶴m * BG60
W"W.3 I I I j| ? a _ IBSg # % ? Mss ?.............................................SL g Jl jk mu|im% M
r 2 2
[0067]‘
A c B<360+BuS20 ,
X 0.5+ ----x I
2
[0068]注:BG:bloodglucose 血糖[0069]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間多項(xiàng)數(shù)據(jù)比較采用單因素
[0070]方差分析，數(shù)據(jù)以(x±s )表示，P < 0.05作為顯著性差異。
[0071]2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0072]小鼠各組體重情況，見(jiàn)表3
[0073]表3給藥前小鼠的體重情況(數(shù)據(jù)以均數(shù)x表示，g，n=10)
【權(quán)利要求】
1.趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述趕黃草提取物通過(guò)下列方法制得:趕黃草全草粉碎后，用20%~80%的乙醇熱提80°C 3次，每次用量為趕黃草重量的10倍量W/L，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后50~60°C環(huán)境下進(jìn)一步干燥至恒重，得到趕黃草提取物。
3.如權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為由趕黃草提取物作為活性成分與藥用輔料組成的 藥物組合物。
【文檔編號(hào)】A61K36/185GK103638073SQ201310608323
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】孫連娜, 黃豆豆, 李君麗, 孫蕾, 黃光輝, 陳萬(wàn)生 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)