專利名稱：一種黃姜疏水性甾體皂苷提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃姜疏水性留體皂苷提取物，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
腫瘤是危害人類健康和生命的主要疾病。全世界每年約有500萬人死于惡性腫 瘤。近年來，由于環(huán)境的惡化，以及現(xiàn)代人的工作壓力，疾病的傳播，惡性腫瘤的發(fā)病率呈上 升趨勢，并成為繼心血管疾病之后的第二大致死病因。因此，全球每年投入大量的人力物力 用于研究開發(fā)防治癌癥的新藥物。近年來，藥物學(xué)專家除了研究西藥以外，也對中藥進(jìn)行了 很多研究，對惡性腫瘤形成的機(jī)理也進(jìn)行探討，組合化學(xué)、基因工程等先進(jìn)技術(shù)的發(fā)明和應(yīng) 用加速了對惡性腫瘤藥物開發(fā)進(jìn)程；特別是目前以天然活性成分為先導(dǎo)化合物尋找新藥有 廣闊的發(fā)展前景，迄今為止已評估了 4萬余種高等植物的抗腫瘤活性。據(jù)國外資料介紹，全 世界已經(jīng)開發(fā)了幾百種抗癌新藥，其中有很多屬于天然植物提取物，近年來，研究人員從傳 統(tǒng)中藥進(jìn)行的廣泛的篩選，發(fā)現(xiàn)了大量的抗腫瘤植物，如紅豆杉、銀杏、喜樹、靈芝等，在上 述植物中，人們對紅豆杉、喜樹的研究較多，很多植物由于生長緩慢，資源貧乏，很難滿足市 場需求。我國薯蕷屬植物有80余種，其中屬于根狀莖的有17種、1亞種及1個變種，薯 蕷屬植物中含有皂苷元，是提取皂苷的主要藥源，皂苷元是合成留體激素藥及避孕藥的主 要原料之一，水溶性皂苷制劑對治療冠心病有效，可減少心絞痛，調(diào)節(jié)新陳代謝，國內(nèi)以不 同種的薯蕷屬植物為原料，提取其總留體皂苷作為臨床上的降血脂藥已有數(shù)家工廠生產(chǎn)， 其中用盾葉薯蕷(D. zingibernsis)為原料研制成功的新藥“盾葉冠心寧”，臨床治療冠心 病、心絞痛有一定療效；已上市的“地奧心血康”也是一種降血脂的藥物，該藥是以黃山藥 (Dioscorea panthaiapraia et Burkill)的根莖為原料提取的薯蕷皂苷的混合物，其中包 括單糖苷、二糖苷等，用于治療冠心病、心絞痛、氣短、心悸、胸悶、胸痛等癥狀，總有效率達(dá) 90%以上。盾葉薯蕷Dioscoreazingiberensis C. H. feigh，又名黃姜，為薯蕷屬植物，俗名 “火頭根”，別名稱老虎姜、猴節(jié)蓮等，是多年生草質(zhì)纏繞藤本植物，其根狀莖形似生姜，斷面 內(nèi)質(zhì)呈橘黃色，故稱黃姜，是我國特有的薯蕷類型，其活性物質(zhì)薯蕷皂苷元(俗稱皂素)以 皂苷的形式存在于根莖中，具有治療冠心病、調(diào)節(jié)新陳代謝、抗高血脂、抗癌等效果，是合成 激素類藥物的重要原料。黃姜是醫(yī)藥工業(yè)上提取皂素的最好的藥用植物之一，現(xiàn)代皂素只 能從黃姜、川地龍、黃山藥等少數(shù)植物中提取，其中從黃姜中提取的皂素占總量的70%以 上，而皂素是“激素之母”，提取薯蕷皂素的方法有直接酸水解法、發(fā)酵-酸水解法、酶解-酸 水解法、預(yù)分離纖維素淀粉法、超臨界萃取法等。目前生產(chǎn)中大部分企業(yè)采用直接酸水解 法，該方法的缺點是酸和萃取劑用量大，產(chǎn)生的廢水廢渣多，副產(chǎn)品淀粉和纖維素?zé)o法回收 等。黃姜所含的薯蕷皂苷不僅是合成留體激素藥物的重要中間體，而且還具有抑菌、殺蟲、 消炎等生物活性，是目前國內(nèi)生物制藥廠家急需的原料。目前針對黃姜疏水性留體皂苷的報道較少，沒有黃姜疏水性留體皂苷提取物用于治療癌癥的相關(guān)文獻(xiàn)報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種黃姜疏水性留體皂苷提取物，本發(fā)明的另一技術(shù) 方案是提供了該黃姜疏水性留體皂苷提取物的用途。本發(fā)明提供了一種黃姜疏水性留體皂苷提取物，每g提取物中含有延齡草皂苷 0-1. 021mg、薯蕷皂苷元纖維二糖苷8-30. !M^iig、三角葉皂苷16. 461-93. 947mg、纖細(xì)皂苷 0-8. 456mg。進(jìn)一步優(yōu)選地，每g提取物中含有延齡草皂苷0. 891mg、薯蕷皂苷元纖維二糖苷 28. 178mg、三角葉皂苷83. 974mg、纖細(xì)皂苷1. 450mg。它是由如下步驟制備而成a、將藥用植物黃姜Dioscorea zingiberensis C. H. feigh塊莖烘干，粉碎，加入 70-100% ν/ν乙醇浸提10-24小時，固液分離；b、過濾分離的固相加入70-100% ν/ν乙醇回流2-5小時，3_5次，趁熱過濾；c、將a步驟浸提的液相與b步驟熱回流提取的液相合并后，減壓蒸餾回收乙醇至 基本無乙醇味，得褐色浸膏；d、將褐色浸膏加水溶解，在4000-6000r/min離心15-20分鐘，分離水相與固相；e、將d得到的固相冷凍干燥，即得黃姜疏水性甾體皂苷提取物。其中，本發(fā)明疏水性留體皂苷提取物的HPLC指紋圖譜如圖1所示；色譜條件 島津色譜儀 LC-20 ；色譜柱Shim-pack VP-ODS C18 (250 X 4. 6mmi. d. 5um)，預(yù)柱(5 μ m， 10X4. 6mm i. d.) ；二元流動相梯度洗脫，水(A)和乙腈(B)，0_5min，20 % -30 % B ； 5-35min,30 % -40 % B ；35-40min,30 % -40 % B ；40-60min,60 % -85 % B ；60-75min, 85% -100% B ；75-80min, 100% B ；流速:lml/min ；柱溫:30°C;檢測波長λ = 204nm ；進(jìn)樣 量20μ 1。本發(fā)明提供了一種制備所述的黃姜疏水性留體皂苷提取物的方法，它包括如下步 驟a、將藥用植物黃姜Dioscorea zingiberensis C. H. feigh塊莖烘干，粉碎，加入 70-100% ν/ν乙醇浸提10-24小時，固液分離；b、過濾分離的固相加入70-100% ν/ν乙醇回流2-5小時，3_5次，趁熱過濾；c、將a步驟浸提的液相與b步驟熱回流提取的液相合并后，減壓蒸餾回收乙醇至 基本無乙醇味，得褐色浸膏；d、將褐色浸膏加水溶解，在4000-6000r/min離心15-20分鐘，分離水相與固相；e、將d得到的固相冷凍干燥，即得黃姜疏水性甾體皂苷提取物。本發(fā)明提供了所述的黃姜疏水性留體皂苷提取物在制備抗癌藥物中的用途。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的藥物是治療結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、喉癌的 藥物。本發(fā)明還提供了一種抗癌藥物組合物，它是由有效量的黃姜疏水性留體皂苷提取 物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑是口服制劑或注射制劑。
本發(fā)明藥物用于治療各種癌癥，如結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、喉癌，藥 效穩(wěn)定，具有高效抗癌活性，且從黃姜中直接提取疏水性留體皂苷，方法簡便，成本低，質(zhì)量 穩(wěn)定、可控性強，適于工業(yè)化大生產(chǎn)，為臨床提供了一種新的用藥選擇。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
圖1本發(fā)明制備的疏水性皂苷的HPLC指紋圖譜圖2黃姜疏水性留體皂苷對腫瘤細(xì)胞生長增殖影響(注上圖中黃姜留體皂苷藥 物濃度均為10mg/L，1、控制組，即陰性對照組；2、黃姜疏水性甾體皂苷)圖3黃姜疏水性留體皂苷與薯蕷皂苷元抗人卵巢癌細(xì)胞(SK0V;3)藥效比較圖。圖4本發(fā)明黃姜疏水性留體皂苷提取物體內(nèi)抗結(jié)腸癌的藥效圖5本發(fā)明黃姜疏水性留體皂苷提取物體內(nèi)抗肺癌的藥效圖6本發(fā)明黃姜疏水性留體皂苷提取物體內(nèi)抗肝癌的藥效圖7本發(fā)明黃姜疏水性留體皂苷提取物體內(nèi)抗宮頸癌的藥效圖8本發(fā)明黃姜疏水性留體皂苷提取物生存期存活率比較實驗
具體實施例方式實施例1本發(fā)明藥物的制備新鮮盾葉薯蕷塊莖清洗干凈后，切成塊狀，50°C烘干，粉碎。稱取約600g黃姜粉末 于5000ml燒杯中，加入約2000ml乙醇浸泡過夜，抽濾，分離固相與液相，固相轉(zhuǎn)入5L回流 瓶中，加入1200ml-2000ml乙醇，78°C回流》i-5h，趁熱過濾，重復(fù)回流提取3次。將濾液與 浸泡液合并，減壓蒸餾至基本無乙醇味，回收乙醇，再按浸膏重量的6-10倍加水約2000ml 水超聲波溶解可溶性皂苷，懸濁液離心(4000-6000r/min，10-20min)，分離水溶液與沉淀， 再將沉淀_65°C低溫冷凍干燥36h，即得疏水性留體總皂苷40g。盾葉薯蕷疏水性留體總皂苷16g，首先采用正相硅膠柱色譜分離，洗脫劑為混合溶 劑氯仿-甲醇(V/V)，梯度洗脫，梯度為 100 10 (600ml)-90 10 (IOOOml)-80 20 (800ml)-70 30(500ml)，TLC跟蹤檢測，10%硫酸乙醇顯色，合并Rf值相同組分，收集4個不同組分， 再過凝膠色譜^^-如讓擬。，洗脫劑氯仿-甲醇(8 1)(體積比)，再反復(fù)重結(jié)晶后得單 體甾體皂苷，經(jīng)HPLC檢測純度均大于98%，經(jīng)高分辨率質(zhì)譜HR-ESI-MS，紅外光譜IR，核磁 共振譜，包括 1H-NMR、13C-WR、135DEPT, 1H-1HC0SY、HMBC, HMQC, N0EC0SY 等光譜方法，鑒定 其結(jié)構(gòu)分別為延齡草皂苷(12mg)，薯蕷皂苷元纖維二糖苷(68mg)，三角葉皂苷(USmg)， 纖細(xì)皂苷(50mg)；
權(quán)利要求
1.一種黃姜疏水性留體皂苷提取物，其特征在于每g提取物中含有延齡草皂苷 0-1. 021mg、薯蕷皂苷元纖維二糖苷8-30. !M^iig、三角葉皂苷16. 461-93. 947mg、纖細(xì)皂苷 0-8. 456mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃姜疏水性留體皂苷提取物，其特征在于每g提取物中含 有延齡草皂苷0. 891mg、薯蕷皂苷元纖維二糖苷28. 178mg、三角葉皂苷83. 97%ig、纖細(xì)皂苷 1. 450mgo
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃姜疏水性留體皂苷提取物，其特征在于它是由如下 步驟制備而成a、將藥用植物黃姜Dioscoreazingiberensis C. H. feigh塊莖烘干，粉碎，加入 70-100% ν/ν乙醇浸提10-24小時，固液分離；b、過濾分離的固相加入70-100%ν/ν乙醇回流2-5小時，3_5次，過濾；c、將a步驟浸提的液相與b步驟回流提取的液相合并后，減壓蒸餾回收乙醇至基本無 乙醇味，得褐色浸膏；d、將褐色浸膏加水溶解，在4000-6000r/min離心15-20分鐘，分離水相與固相；e、將d得到的固相冷凍干燥，即得黃姜疏水性留體皂苷提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的黃姜疏水性留體皂苷提取物，其特征在于該 提取物的HPLC指紋圖譜如圖1所示；色譜條件島津色譜儀LC-20 ；色譜柱Shim-paCk VP-ODS C18(250X4. 6mm i. d. 5um)，預(yù)柱(5 μ m，10X4. 6mm i. d.) ；二元流動相梯度洗脫， 水(A)和乙腈(B) ,0-5min,20% -30% B ；5-35min,30% -40% B ；35-40min, 30% -40% B ； 40-60min,60% -85% B ；60-75min, 85 % -100% B ；75-80min, 100 % B ；流速:lml/min ；柱 溫30°C ；檢測波長λ = 204nm ；進(jìn)樣量20 μ 1。
5.一種制備權(quán)利要求1-4任意一項所述的黃姜疏水性留體皂苷提取物的方法，其特征 在于它包括如下步驟a、將藥用植物黃姜Dioscoreazingiberensis C. H. feigh塊莖烘干，粉碎，加入 70-100% ν/ν乙醇浸提10-24小時，固液分離；b、過濾分離的固相加入70-100%ν/ν乙醇回流2-5小時，3_5次，趁熱過濾；c、將a步驟浸提的液相與b步驟回流提取的液相合并后，減壓蒸餾回收乙醇至基本無 乙醇味，得褐色浸膏；d、將褐色浸膏加水溶解，在4000-6000r/min離心15-20分鐘，分離水相與固相；e、將d得到的固相冷凍干燥，即得黃姜疏水性留體皂苷提取物。
6.權(quán)利要求1-4任意一項所述的黃姜疏水性留體皂苷提取物在制備抗癌藥物中的用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述的藥物是治療結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、 宮頸癌、卵巢癌或喉癌的藥物。
8.一種抗癌藥物組合物，其特征在于它是由有效量的權(quán)利要求1-4任意一項所述的 黃姜疏水性留體皂苷提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成 的藥劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是口服制劑或注射制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種黃姜疏水性甾體皂苷提取物。本發(fā)明還提供了該提取物的制備方法及用途。通過體外抗癌藥物實驗研究表明，本發(fā)明黃姜疏水性甾體皂苷提取物對結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌，喉癌等細(xì)胞系具有強生長抑制活性。本發(fā)明黃姜提取物資源來源廣闊，皂苷提取分離過程簡單，用于治療癌癥具有廣闊的前景，開發(fā)了黃姜疏水性薯蕷皂苷成分的抗癌新用途。
文檔編號A61K36/8945GK102068584SQ201010602130
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月15日
發(fā)明者何楊, 卿勇, 吳曉華, 李鷹, 邢志華, 黃文 申請人:四川大學(xué)華西醫(yī)院