專利名稱：一種紅景天提取物的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物檢測方法，特別涉及紅景天提取物的檢測方法。
背景技術(shù)：
紅景天提取物是紅景天塊根及根莖經(jīng)過加工提取得到的名貴藥材。其主治功能 腦缺氧、抗疲勞、活血止血、清肺止咳、化淤消腫、解熱退燒、滋補(bǔ)元氣等功效外用治跌打損 傷和燒燙傷。紅景天提取物為現(xiàn)有技術(shù)，其制備，檢測和應(yīng)用見中國藥典等文獻(xiàn)?，F(xiàn)有紅景天提取物存在質(zhì)量控制方法簡單，產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點，從而將影 響產(chǎn)品的生產(chǎn)和保證質(zhì)量。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，我們建立了本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，該方法采用液相色譜 技術(shù)，同時采用中紅外廣譜測定。利用紅外指紋譜圖可以對中藥提取物各生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制首先，利用不同 提取物FTHR譜圖的特征性進(jìn)行快速鑒別；其次，將提取物與相應(yīng)的原藥材比較，可以看到 經(jīng)過炮制、加熱、水提后，提取物譜圖與原藥材之間的差異性；再則，對于使用不同炮制方法 處理的提取物，該方法可以檢測它們之間的差異，并可以大致判斷所使用輔料；并且，對于 不同廠家的提取物產(chǎn)品，以及同一廠家不同生產(chǎn)批號的濃縮顆粒產(chǎn)品，都可進(jìn)行快速有效 的鑒別。這為產(chǎn)品的真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制提供了一種先進(jìn)、快速的分析手段。因此本發(fā)明的質(zhì)量控制方法精密度、靈敏度、穩(wěn)定性均好，確保產(chǎn)品質(zhì)量的“安全、 均一、穩(wěn)定、有效、可控”。使該藥物生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化，達(dá)到療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝先進(jìn)合理的 目的。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的是針對紅景天提取物的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法包 括以下內(nèi)容對含有的成分紅景天苷和酪醇的含量進(jìn)行含量測定，對紅景天提取物的中紅 外一維光譜圖和標(biāo)準(zhǔn)品中紅外一維光譜圖進(jìn)行圖譜對照。因此，本發(fā)明的質(zhì)量控制方法其主要的內(nèi)容是對紅景天提取物的成分進(jìn)行檢測。 該方法可以更加準(zhǔn)確的把握有關(guān)藥品的質(zhì)量，降低用藥風(fēng)險，提高產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明的檢測方法，其中各種數(shù)據(jù)均為實驗獲得，在實際操作過程中會有誤差， 該誤差在士20%以內(nèi)均可，因此本發(fā)明的方法中的數(shù)值為在本發(fā)明記載的數(shù)值基礎(chǔ)上 士20%以內(nèi)。任何人在士20%以內(nèi)使用本發(fā)明的數(shù)值均落在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明提供一種紅景天提取物的檢測方法，本發(fā)明的檢測方法，包括對紅景天提 取物中藥物成分紅景天苷和酪醇的含量測定方法，含量測定方法采用高效液相色譜技術(shù)。具體步驟如下采用高效液相色譜法測定，
色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基鍵合硅膠為填充物，以甲醇和水的混合 物為流動相，檢測波長為260-270nm，流速lml/min，柱溫30°C。理論塔板數(shù)按紅景天苷峰計 算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備取紅景天苷5-20mg和酪醇5_20mg，置IOOml的棕色容量瓶 中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取紅景天提取物0. 5_2g，加甲醇50ml，超聲提取，過濾，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法測定，即得。供試品峰面積X對照品濃度χ 50紅景天苷含量(％) =----------------------------------------------------------X100%對照品峰面積X樣品重量X1000供試品峰面積X對照品濃度X 50酪醇含量(％) =----------------------------------------------------------χ 100%對照品峰面積X樣品重量X1000本品含紅景天苷不得少于1. 5%，酪醇含量不得少于0. 3%。本發(fā)明還提供一種紅景天提取物的中紅外圖譜測定檢測方法，所述方法包括對紅 景天提取物和紅景天提取物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行中紅外圖譜測定，比較兩者中紅外一維光譜圖的相 似性，具體步驟如下1)空白掃描壓片將溴化鉀制成的溴化鉀空白片，掃描將壓好的空白片放入掃 描室中，掃描開始，錄制光譜圖，2)樣品掃描樣品處理取紅景天提取物過篩備用，取紅景天提取物，溴化鉀制成 的樣品片，將壓好的樣品片放入掃描室中；掃描開始，錄制樣品圖譜，將圖譜進(jìn)行A轉(zhuǎn)化 和歸一化，得到樣品一維譜圖，3)標(biāo)準(zhǔn)對照品的掃描取紅景天提取物標(biāo)準(zhǔn)對照品，依照樣品相同的方法進(jìn)行處 理，壓片，掃描，A轉(zhuǎn)化和歸一化，4)圖譜的比較相似度判定標(biāo)準(zhǔn)樣品的圖譜和相似度應(yīng)大于0. 98。優(yōu)選的步驟如下空白掃描，壓片精密稱取干燥的溴化鉀細(xì)粉200mg ；置于瑪瑙研缽中充分研磨混 勻，將溴化鉀細(xì)粉移置于直徑13mm的壓膜中，鋪布均勻，加壓至0. 8-1. OGpa，保持lmin，制 成的溴化鉀空白片，目視檢查應(yīng)均勻透明，無明顯顆粒，掃描將壓好的空白片放入掃描室 中，掃描開始。錄制光譜圖。樣品掃描，樣品處理取紅景天提取物100g，粉碎，過80目篩備用。壓片精密稱 取紅景天提取物3mg ；精密稱取干燥的溴化鉀細(xì)粉200mg ；置于瑪瑙研缽中充分研磨混勻， 將細(xì)粉移置于直徑13mm的壓膜中，鋪布均勻，加壓至0. 8-1. OGpa，保持lmin，制成的樣品 片，目視檢查應(yīng)均勻，無明顯顆粒，掃描將壓好的樣品片放入掃描室中；掃描開始，樣品圖 譜自動保存。A轉(zhuǎn)化和歸一化在原圖譜基礎(chǔ)上，用A轉(zhuǎn)化圖譜，再歸一化得到新生 成的一維譜圖。
標(biāo)準(zhǔn)對照品的掃描，取紅景天提取物對照品，依照樣品相同的方法進(jìn)行處理，壓 片，掃描，T % A轉(zhuǎn)化和歸一化。圖譜的比較一維光譜圖，在4000-450波數(shù)范圍內(nèi)，峰形與對照品的一維光譜圖 一致。相似度判定標(biāo)準(zhǔn)紅景天提取物相似度應(yīng)大于0. 98。本發(fā)明的測定方法，準(zhǔn)確度高，靈敏度高，精確度高，對保證產(chǎn)品質(zhì)量維護(hù)用藥安 全具有重要意義。
圖1為對照品一維譜圖。
具體實施例方式通過以下實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為本發(fā)明的限制。實施例1 高效液相色譜法測定紅景天提取物中藥物成分紅景天苷和酪醇含量照高效液相色譜法(附錄VID)測定3含量測定3. 1色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基鍵合硅膠為填充物；流動相甲醇 水(100 430)；檢測波長為276nm，流速lml/min，柱溫30°C。理論塔板數(shù)按紅景天苷峰計 算應(yīng)不低于2000。3. 2對照品溶液的制備精密稱取紅景天苷IOmg和酪醇10mg，置IOOml的棕色容量 瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每Iml中含紅景天苷和酪醇各100 μ m)。3. 3供試品溶液的制備取本品粉末(過三號篩)lg，加甲醇50ml，超聲提取30分 鐘，離心(2500轉(zhuǎn)/分鐘)15分鐘，用0. 45um的微孔濾膜過濾，即得。3. 4測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法測定，即得。供試品峰面積X對照品濃度X 50紅景天苷含量(％) =----------------------------------------------------------X 100%對照品峰面積X樣品重量X 1000供試品峰面積χ對照品濃度χ 50 酪醇含量(％) =----------------------------------------------------------X100%對照品峰面積X樣品重量X1000本品含紅景天苷不得少于1. 5%，酪醇含量不得少于0. 3%。實施例2 紅景天提取物和紅景天提取物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行中紅外圖譜測定，比較一維光譜的相似 性，具體步驟如下2樣品處理取紅景天提取物100g，粉碎，過80目篩備用。
3.儀器準(zhǔn)備3. 1儀器開機(jī)將主機(jī)右后側(cè)電源開關(guān)按鈕調(diào)整到“ON”狀態(tài)，等待15秒左右，待 儀器面板上左側(cè)一排四個指示燈全部變綠。3. 2程序啟動雙擊桌面上標(biāo)有“Spectrum v5. 3. 1”的圖標(biāo)，進(jìn)入“Login”狀態(tài); 聯(lián)機(jī)狀態(tài)時instrument”選項處于“1. Spectrum One”狀態(tài)；未聯(lián)機(jī)時“ Instrument”選項 處于“Work Offline”狀態(tài)。(其它項如初始化顯示勿動，以下均同)3. 3程序自檢進(jìn)入程序后陸續(xù)自動彈出三個自檢對話框，依次點擊確定即可。3. 4能量檢測點擊“Instrument”選項中“Monitor”選項，彈出“Dispaly”選項 卡，能量自動顯示；“Energy”實際值應(yīng)大于等于額定值，不得低于3800。4. Blackground 掃描4. 1壓片精密稱取干燥的溴化鉀細(xì)粉200mg ；置于瑪瑙研缽中充分研磨混勻，將 溴化鉀細(xì)粉移置于直徑13mm的壓膜中，鋪布均勻，加壓至0. 8 1. OGpa，保持lmin，制成的 溴化鉀空白片，目視檢查應(yīng)均勻透明，無明顯顆粒。4. 2 掃描4. 2. 1將壓好的空白片放入掃描室中；點擊“Instrument”選項中“kan”選項，彈 出“Spectrum One Scan and Instrument Setup”選項卡，選取“Scan”選項頁；“Opitions” 選項將"Scan Type” 選中 “Blackground” ；“Duration” 選項將"Scan Number” 設(shè)為 “ 16”。4. 2. 2選取“Sample”選項頁；其中“Name”選項中填寫“bk” ；點擊選項卡右側(cè) "Scan"按鈕，出現(xiàn)“Apply”按鈕，繼續(xù)點擊，掃描開始。4. 2. 3用溴化鉀制成的空白片，錄制光譜圖，除去3340cm—1與1630cm—1附近因殘留 或附著水而呈現(xiàn)一定的吸收峰外，其它區(qū)域不應(yīng)出現(xiàn)大于基線3%透過率的吸收譜帶。視窗 圖中Blackground譜圖左起點高于縱坐標(biāo)所示值35，即為有效譜圖。5 Samp Ie 掃描5. 1壓片精密稱取紅景天提取物3mg ；精密稱取干燥的溴化鉀細(xì)粉200mg ；置 于瑪瑙研缽中充分研磨混勻，將細(xì)粉移置于直徑I3mm的壓膜中，鋪布均勻，加壓至0. 8 l.OGpa，保持lmin，制成的樣品片，目視檢查應(yīng)均勻，無明顯顆粒。5. 2 掃描5. 2. 1將壓好的樣品片放入掃描室中；點擊“Instrument”選項中“kan”選項，彈 出“Spectrum One Scan and Instrument Setup”選項卡，選取“Scan”選項頁；“Opitions” 選項將 Mean Type” 選中 “Sample” ；“Duration” 選項將 “Scan Number” 設(shè)為 “ 16” ；5. 2. 2選取“Sample”選項頁；其中“Name”選項中填寫樣品名稱，命名為名稱拼音 加批號，小于10個字節(jié)；點擊選項卡右側(cè)Mean”按鈕，出現(xiàn)“Apply”按鈕，繼續(xù)點擊，掃描 開始，樣品圖譜自動保存。5. 2. 3樣品所制成的供試品片最高峰值控制在20%透過以上；基線一般控制在 70%透過以上。6光譜特征6. 1 一維譜參數(shù)設(shè)置:“Setup”項下“Options”頁中“Peak”條目“Find，，選中 "Peak", "% Τ"設(shè)為“2. 00”其它設(shè)置如初始化狀態(tài)不變。6. 2T% A轉(zhuǎn)化在視窗中打開一張原譜，點擊“Process”選項中“Absorbance”。7
6. 3 歸一化選中 A 轉(zhuǎn)化圖譜，點擊“Process，，選項中“Baseline Correction" 選項，選取“Automatic Correction”選項；保存新生成的譜圖。6. 4對照譜圖6. 4標(biāo)準(zhǔn)對照品的掃描，取紅景天提取物對照品，依照樣品相同的 方法進(jìn)行處理，壓片，掃描，A轉(zhuǎn)化和歸一化。6. 5判定標(biāo)準(zhǔn)6. 5. 1峰形掃描得到的紅景天提取物原譜，經(jīng)A轉(zhuǎn)化處理得到的一維光譜圖， 在4000-450波數(shù)范圍內(nèi)，峰形與6. 4對照一維光譜圖一致。6. 5. 2峰位置紅景天提取物一維光譜圖，應(yīng)在3000-2800波數(shù)范圍內(nèi)有一個亞 甲基特征峰，為^SSiZcnT1 ；在1800-1000波數(shù)范圍內(nèi)有五個特征峰，分別為IeHiZcnT1 ； 1449 士 2CHT1 ； 1374 士 2CHT1 ； 1236 士 2CHT1 ； IOSAiZcnr1 ；6. 5. 3峰強(qiáng)度紅景天提取物一維光譜圖，1034士 2CHT1處峰吸收強(qiáng)度高。7相似度7. 1操作方法7. 1. 1設(shè)置對照譜圖點擊“ Setup ”選項中“ Compare ”選項，彈出“ Compare Setup"選項卡，選取“Type”選項頁，點擊“Browse”選擇丹參對照藥材一維歸一譜圖；選取 “Regions” 選項頁，“Sart” 設(shè)置 4000. OOcnT1，“End” 設(shè)置 650. OOcm"1,點擊 “0K，，。7. 1.2相似度比較點擊“Open”選項，打開丹參樣品一維歸一譜圖，然后點擊 “I^rocess”選項中“Compare”，生成相似度對話框，記錄數(shù)值，即可。7. 1. 3判定標(biāo)準(zhǔn)紅景天提取物相似度應(yīng)大于0. 98。
權(quán)利要求
1.一種紅景天提取物的檢測方法，其特征在于，包括對含有的藥物成分紅景天苷和酪 醇的含量進(jìn)行含量測定，對紅景天提取物的中紅外一維光譜圖和標(biāo)準(zhǔn)品中紅外一維光譜圖 進(jìn)行圖譜對照。
2.權(quán)利要求1的檢測方法，其中藥物成分紅景天苷和酪醇的含量測定方法，步驟如下 采用高效液相色譜法測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基鍵合硅膠為填充物；流動相以甲醇和水的 混合物為流動相，檢測波長為260-270nm，流速lml/min，柱溫30°C。理論塔板數(shù)按紅景天苷 峰計算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備取紅景天苷5-20mg和酪醇5-20mg，置IOOml的棕色容量瓶中，加 甲醇至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取紅景天提取物0. 5-2g，加甲醇50ml，超聲提取，過濾，即得。測定 法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法測定，即得。計算紅景天苷和酪醇的含量，以干燥品計算，樣品中含紅景天苷不得少于1.5%，酪醇 含量不得少于0.3%。
3.權(quán)利要求2的檢測方法，其中藥物成分紅景天苷和酪醇的含量測定方法，步驟如下 照2005版中國藥典附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基鍵合硅膠為填充物；流動相甲醇水 (100 430)；檢測波長為276nm，流速lml/min，柱溫30°C。理論塔板數(shù)按紅景天苷峰計算 應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取紅景天苷IOmg和酪醇10mg，置IOOml的棕色容量瓶中，加 甲醇至刻度，搖勻，即得(每Iml中含紅景天苷和酪醇各ΙΟΟμπι)。供試品溶液的制備取本品粉末(過三號篩)lg，加甲醇50ml，超聲提取30分鐘，離心 (2500轉(zhuǎn)/分鐘)15分鐘，用0. 45um的微孔濾膜過濾，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法測定， 即得。供試品峰面積X對照品濃度X 5 0 紅景天苷含量(％)=----------------------------------------------------------X 100%對照品峰面積X樣品重量X 1000 供試品峰面積X對照品濃度χ 50酪醇含量(％)=----------------------------------------------------------X 100%對照品峰面積χ樣品重量χ 1000本品含紅景天苷不得少于1. 5 %，酪醇含量不得少于0. 3%。
4.權(quán)利要求1的測定方法，其中對紅景天提取物的中紅外一維光譜圖和標(biāo)準(zhǔn)對照品中 紅外一維光譜圖進(jìn)行圖譜對照，步驟如下1)空白掃描壓片將溴化鉀制成的溴化鉀空白片，掃描將壓好的空白片放入掃描室中，掃描開始，錄制光譜圖，2)樣品掃描樣品處理取紅景天提取物過篩備用，取紅景天提取物，溴化鉀制成的樣 品片，將壓好的樣品片放入掃描室中；掃描開始，錄制樣品圖譜，將圖譜進(jìn)行A轉(zhuǎn)化和歸 一化，得到樣品一維譜圖，3)標(biāo)準(zhǔn)對照品的掃描取紅景天提取物標(biāo)準(zhǔn)對照品，依照樣品相同的方法進(jìn)行處理， 壓片，掃描，A轉(zhuǎn)化和歸一化，4)圖譜的比較相似度判定標(biāo)準(zhǔn)樣品的圖譜和相似度應(yīng)大于0.98。
5.權(quán)利要求4的測定方法，步驟如下空白掃描，壓片精密稱取干燥的溴化鉀細(xì)粉200mg;置于瑪瑙研缽中充分研磨混勻， 將溴化鉀細(xì)粉移置于直徑13mm的壓膜中，鋪布均勻，加壓至0. 8-1. OGpa，保持lmin，制成的 溴化鉀空白片，目視檢查應(yīng)均勻透明，無明顯顆粒，掃描將壓好的空白片放入掃描室中，掃 描開始，錄制光譜圖，樣品掃描，樣品處理取紅景天提取物100g，粉碎，過80目篩備用，壓片精密稱取紅景 天提取物3mg ；精密稱取干燥的溴化鉀細(xì)粉200mg ；置于瑪瑙研缽中充分研磨混勻，將細(xì)粉 移置于直徑13mm的壓膜中，鋪布均勻，加壓至0. 8-1. OGpa，保持lmin，制成的樣品片，目視 檢查應(yīng)均勻，無明顯顆粒，掃描將壓好的樣品片放入掃描室中；掃描開始，樣品圖譜自動 保存，A轉(zhuǎn)化和歸一化在原圖譜基礎(chǔ)上，用A轉(zhuǎn)化圖譜，再歸一化得到新生成的一 維譜圖，標(biāo)準(zhǔn)對照品的掃描，取紅景天提取物對照品，依照樣品相同的方法進(jìn)行處理，壓片，掃 描，A轉(zhuǎn)化和歸一化，圖譜的比較峰形掃描得到的紅景天提取物原譜，經(jīng)A轉(zhuǎn)化處理得到的一維光譜 圖，在4000-450波數(shù)范圍內(nèi)，峰形與對照一維光譜圖一致。峰位置紅景天提取物一維光譜圖，應(yīng)在3000-2800波數(shù)范圍內(nèi)有一個亞甲基特征峰， 為2933士2CHT1 ；在1800-1000波數(shù)范圍內(nèi)有五個特征峰，分別為1614士2(^1 ；1449士2(^1 ； 1374 士 2CHT1 ； UseiZcnT1 ； IOSAiZcnr1 ；峰強(qiáng)度紅景天提取物一維光譜圖，1034士2CHT1處峰吸收強(qiáng)度高。相似度判定標(biāo)準(zhǔn)紅景天提取物相似度應(yīng)大于0. 98。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物檢測方法，特別涉及紅景天提取物的檢測方法。所述檢測方法可以更加準(zhǔn)確的把握有關(guān)藥品的質(zhì)量，降低用藥風(fēng)險，提高產(chǎn)品質(zhì)量。
文檔編號A61P29/00GK102048796SQ20091007116
公開日2011年5月11日 申請日期2009年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月5日
發(fā)明者劉巖, 徐波, 牛濤, 王俊全, 陳慶闖 申請人:天津天士力現(xiàn)代中藥資源有限公司