卵子與胚胎處理液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種卵子與胚胎處理液及其制備方法，卵子與胚胎處理液，包含對(duì)卵子和受精卵進(jìn)行處理培養(yǎng)的組合物、殺菌劑，可以選擇性加入指示劑。本發(fā)明的卵子與胚胎處理液各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到體外培養(yǎng)液的標(biāo)準(zhǔn)使用安全且易于判斷培養(yǎng)液是否變質(zhì)，為輔助生殖技術(shù)提供有力保證。
【專利說(shuō)明】卵子與胚胎處理液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及人工輔助生殖技術(shù)，尤其涉及一種卵子與胚胎處理液及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 卵子與胚胎處理液對(duì)囊胚的發(fā)育培養(yǎng)已廣泛應(yīng)用于試管嬰兒技術(shù)中。卵子與胚胎 處理液的目的是：一是提供卵子存活的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；二是為胚胎的生存提供必要的環(huán)境。卵 子與胚胎處理液的用途：用來(lái)在培養(yǎng)箱外處理和操作卵子和胚胎的液體。
[0003] 目前，我國(guó)輔助生殖技術(shù)中的卵子與胚胎處理液依賴進(jìn)口成品，成本高且溶液的 有效性的好壞不能很好的表現(xiàn)，如果在培養(yǎng)液變質(zhì)后仍繼續(xù)使用將對(duì)實(shí)驗(yàn)或臨床操作造成 不可逆轉(zhuǎn)的結(jié)果。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到體外培養(yǎng)液的標(biāo)準(zhǔn)使用安全，易于判斷 培養(yǎng)液是否變質(zhì)的卵子與胚胎處理液，為輔助生殖技術(shù)提供有力保證。
[0005] 本發(fā)明的卵子與胚胎處理液，包含對(duì)受精卵進(jìn)行處理培養(yǎng)的組合物、殺菌劑。
[0006] 所述殺菌劑為慶大霉素，濃度9. 5-10. 5mg/L。
[0007] 所述組合物中包含氯化鈉 92. 815-102. 585mmol/L,氯化鉀 4. 465-4. 935mmol/ L，硫酸鎂 0· 19-0. 21mmol/L，氯化鈣 1. 9-2. 1 mmol/L，碳酸氫鈉 3. 8-4. 2mmol/L，4-羥 乙基脈嚷乙橫酸HEPES 19. 95-22. 05mmol/L,葡萄糖2. 66-2. 94mmol/L,丙麗酸納 0· 314-0. 347mmol/L，乳酸鈉 2. 274-2. 514g/L，丙氨酰谷氨酰胺 0· 95-1. 05mmol/L，?；撬?0· 095-0. 105mmol/L，磷酸二氫鉀 0· 352-0. 389mmol/L，慶大霉素 9. 5-10. 5 mg/L。
[0008] 卵子與胚胎處理液的溶劑采用超純水。
[0009] 所述處理液中還可以選擇性加入指示劑酚紅，濃度9. 5-10. 5mg/L。
[0010] 本發(fā)明的卵子與胚胎處理液的ρΗ=7· 20-7. 40,滲透壓260-290m0sm/Kg。
[0011] 本發(fā)明卵子與胚胎處理液的制備方法，包括下面步驟： (1) 卵子與胚胎處理液原液的配制 a、 先按照比例稱量各組分，并分開(kāi)放置； b、 先將稱量好的組分（除殺菌劑、選擇性添加指示劑和碳酸氫鈉）溶于超純水中，溶解 過(guò)程中遵循先固體后液體，NaHC03最后加入的原則； c、 向步驟b所得溶液中加入稱量好的殺菌劑、選擇性添加指示劑和NaHC03 ; d、 檢測(cè)溶液滲透壓和pH值，如果pH值不在范圍內(nèi)則用配制好的鹽酸和氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié)pH值，并記錄最終滲透壓和pH值； (2) 卵子與胚胎處理液原液的處理 a、 將卵子與胚胎處理液的原液在超凈工作臺(tái)下利用0. 2 μ m的濾膜過(guò)濾除菌； b、 在無(wú)菌環(huán)境下對(duì)過(guò)濾后的卵子與胚胎處理液原液進(jìn)行分裝封口，得到卵子與胚胎處 理液，將其放置冰箱或冷庫(kù)內(nèi)保存。
[0012] (3)卵子與胚胎處理液的檢測(cè) 對(duì)卵子與胚胎處理液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目是pH值、滲透壓、細(xì)胞毒性、皮內(nèi)刺激、致敏、 無(wú)菌、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、體外鼠胚試驗(yàn)來(lái)判斷卵子與胚胎處理液是否合格。
[0013] 本發(fā)明的有益效果是，1、本發(fā)明卵子與胚胎處理液的原料均是已經(jīng)證明其安全 性的物質(zhì)，在制備過(guò)程中其溶劑采用超純水，超純水的總有機(jī)碳（T0C)超低，避免了因雜質(zhì) 過(guò)多影響測(cè)定的結(jié)果。2使用抗生素來(lái)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，如慶大霉素是一種廣譜、熱穩(wěn)定性 好的抗生素，在卵子與胚胎處理液中添加慶大霉素可以有效抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。3、、國(guó)內(nèi)還沒(méi) 有成型的用于試管嬰兒技術(shù)的培養(yǎng)液，此配方和制備方法為國(guó)內(nèi)的試管嬰兒技術(shù)提供了有 力的保證，避免了國(guó)外產(chǎn)品因長(zhǎng)途運(yùn)輸帶來(lái)的不明因素，同時(shí)配制工藝操作簡(jiǎn)單合理，檢測(cè) 嚴(yán)密，能夠提供新鮮的培養(yǎng)液供生殖中心或科研院所使用。4、卵子與胚胎處理液中選擇性 添加指示劑酚紅，酚紅在pH變化時(shí)顏色變化明顯，pH在7. 20-7. 40范圍內(nèi)酚紅溶液為粉紅 色到橙紅色，當(dāng)pH值小于6. 8時(shí)為黃色，當(dāng)pH值大于8. 4時(shí)為紅色，變色比較明顯，卵子與 胚胎處理液的pH 7. 20-7. 40在此范圍內(nèi)溶液為粉紅色到橙紅色，當(dāng)卵子與胚胎處理液顏 色與此不符時(shí)，說(shuō)明該卵子與胚胎處理液變質(zhì)，不能用于實(shí)驗(yàn)或臨床，從而避免了使用變質(zhì) 卵子與胚胎處理液而產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)。卵子與胚胎處理液中如不含酚紅，則溶液呈透明、清澈， 在有效期內(nèi)能保證無(wú)菌且正常使用，如變渾濁則不能使用。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0015] 一、卵子與胚胎處理液配方及制備方法 表1卵子與胚胎處理液的配方
【權(quán)利要求】
1. 卵子與胚胎處理液，其特征在于：包含對(duì)受精卵進(jìn)行處理培養(yǎng)的組合物、殺菌劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述卵子與胚胎處理液，其特征在于：殺菌劑為慶大霉素，濃度 9. 5-10. 5mg/L〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述卵子與胚胎處理液，其特征在于：所述組合物中包含氯 化鈉 92. 815-102. 585mmol/L,氯化鉀 4. 465-4. 935mmol/L，硫酸鎂 0· 19-0. 21mmol/ L，氯化鈣1. 9-2. 1 mmol/L，碳酸氫鈉3. 8-4. 2mmol/L，4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES 19. 95-22. 05mmol/L，葡萄糖 2. 66-2. 94mmol/L，丙酮酸鈉 （λ 314-0. 347mmol/L，乳酸鈉 2. 274-2. 514g/L，丙氨酰谷氨酰胺 0· 95-1. 05mmol/L，?；撬?0· 095-0. 105mmol/L，磷酸二 氫鉀 0· 352-0. 389mmol/L，慶大霉素 9. 5-10. 5 mg/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述卵子與胚胎處理液，其特征在于：卵子與胚胎處理液的溶劑采 用超純水。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述卵子與胚胎處理液，其特征在于：所述處理液中選擇 性加入指示劑酚紅，濃度9. 5-10. 5mg/L。
6. 制備權(quán)利要求1-5項(xiàng)所述的卵子與胚胎處理液的制備方法，包括下面步驟： (1) 卵子與胚胎處理液原液的配制 a、 先按照比例稱量各組分，并分開(kāi)放置； b、 先將稱量好的除殺菌劑、選擇性添加指示劑和碳酸氫鈉之外的組分溶于超純水中； c、 向步驟b所得溶液中加入稱量好的殺菌劑、選擇性添加指示劑和NaHC03 ; d、 檢測(cè)溶液滲透壓和pH值，如果pH值不在范圍內(nèi)則用配制好的鹽酸和氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié)pH值，并記錄最終滲透壓和pH值； (2) 卵子與胚胎處理液原液的處理 a、 將卵子與胚胎處理液的原液在超凈工作臺(tái)下利用0. 2 μ m的濾膜過(guò)濾除菌； b、 在無(wú)菌環(huán)境下對(duì)過(guò)濾后的卵子與胚胎處理液原液進(jìn)行分裝封口，得到卵子與胚胎處 理液，將其放置冰箱或冷庫(kù)內(nèi)保存； (3) 卵子與胚胎處理液的檢測(cè) 對(duì)卵子與胚胎處理液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目是pH值、滲透壓、細(xì)胞毒性、皮內(nèi)刺激、致敏、 無(wú)菌、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、體外鼠胚試驗(yàn)來(lái)判斷卵子與胚胎處理液是否合格。
【文檔編號(hào)】C12N5/073GK104140948SQ201410388958
【公開(kāi)日】2014年11月12日 申請(qǐng)日期:2014年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月8日
【發(fā)明者】王維華, 呂汝舉, 劉美靜, 莊巍, 王英超 申請(qǐng)人:山東威高新生醫(yī)療器械有限公司