一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，屬于液體復(fù)配酶制備【技術(shù)領(lǐng)域】，以啤酒釀造用液體酶制劑為主要原料，科學(xué)復(fù)配糖、多元醇、氨基酸、增稠劑、白蛋白、金屬離子等穩(wěn)定劑和促進(jìn)酶制劑更加穩(wěn)定的酒花提取物、中草藥提取液、抗菌肽等具有防腐作用的物質(zhì)，完全替代了防腐劑的添加，不僅有效的抑制了有害微生物的繁殖和生長(zhǎng)，而且能夠和其它組分協(xié)同穩(wěn)定液體復(fù)配酶的活性，從根本上提高了液體復(fù)配酶的生物穩(wěn)定性和酶活力穩(wěn)定性，有效延長(zhǎng)了液體酶制劑的保質(zhì)期。制備的液體復(fù)配酶在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月菌落總數(shù)為168-214CFU/mL；在40℃和0℃條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，酶活損失率分別為2-2.5％和1-1.7％。
【專利說(shuō)明】一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及液體復(fù)配酶的制備，具體涉及一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 液體酶制劑是一種使用方便，綠色環(huán)保，生物降解性良好的原料。專一的催化特性 及溫和的反應(yīng)條件，在工業(yè)界得到越來(lái)越多的使用和重視。在使用方面液體酶制劑具有以 下優(yōu)點(diǎn)：1)液體酶制劑以分子或微粒狀態(tài)分散在底物中，分散度大，吸收快，能較迅速地發(fā) 生酶解反應(yīng)，酶活性高；2)易于分劑量，容易復(fù)配和二次加工，使用方便；3)有利于提高酶 制劑的利用率，4)直接使用，無(wú)須溶解和活化；5)純度高、雜質(zhì)含量低；6)生產(chǎn)過(guò)程短、成本 低；7)生產(chǎn)加工和使用過(guò)程中不會(huì)造成粉塵污染，有利于保護(hù)環(huán)境；但是，液體酶制劑體積 較大，攜帶、運(yùn)輸、貯存都不方便，酶活性容易受到高溫、冷凍、光照、酸堿性、氧化、濕度等貯 存環(huán)境的影響而顯著降低，并且因?yàn)橐后w酶制劑的水分活度較高，很容易受到微生物的污 染而失活。因此，液體酶制劑的應(yīng)用受到限制，最主要的原因就是其穩(wěn)定性較差，包括生物 穩(wěn)定性和物理、化學(xué)穩(wěn)定性。
[0003] 為了解決上述問(wèn)題，現(xiàn)有的酶制劑生產(chǎn)廠家便將經(jīng)濃縮、分離后的液體酶制劑添 加穩(wěn)定劑、防腐劑、表面活性劑、金屬離子等，以提高液體酶制劑的生物穩(wěn)定性、非生物穩(wěn)定 性和使用效果，拓寬其在食品、紡織、造紙、洗滌、飼料等領(lǐng)域的應(yīng)用范圍，由此，液體復(fù)配酶 應(yīng)運(yùn)而生，總體來(lái)說(shuō)，液體復(fù)配酶分為兩種，一種是單一液體復(fù)配酶，即由一種液體酶制劑 和添加劑加工而成；另一種是多種液體復(fù)配酶，是由多種液體酶制劑和添加劑加工而成。因 為酶制劑作用底物的單一性和作用條件的多樣性、差異性，目前，市場(chǎng)上用于工業(yè)化的液體 酶制以單一液體復(fù)配酶為主，多種液體復(fù)配酶較少，幾乎沒(méi)有。
[0004] 液體復(fù)配酶復(fù)配的首要前提條件是應(yīng)用領(lǐng)域，要具體到加工成品的產(chǎn)品特性，如 果不考慮產(chǎn)品特性的因素而進(jìn)行盲目的為了提高穩(wěn)定性的復(fù)配，不但不會(huì)有效發(fā)揮酶制劑 的作用，反而會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，甚至?xí)劤芍卮笊a(chǎn)事故。因此液體復(fù)配酶的制備要綜 合考慮多方面的因素。
[0005] 目前，市場(chǎng)上的液體復(fù)配酶主要集中在造紙、洗滌、食品、飼料、酒精制備等技術(shù)領(lǐng) 域，且以單種液體復(fù)配酶為主，其中添加穩(wěn)定劑有甘油等多元醇和黃原膠、明膠，CMC等表面 活性劑、聚醇類表面活性劑、脂肪醇聚氧乙烯醚化合物、pvp等高分子化合物、氯化鈉等金屬 氯化物、陰陽(yáng)離子表面活性劑、苯甲酸鈉等防腐劑等，添加劑的種類還與酶的種類、同一酶 的作用底物和條件、添加劑的物理和化學(xué)性質(zhì)、酶作用效果等多種因素有關(guān)，并非能夠統(tǒng)一 添加、使用。
[0006] 與其它發(fā)酵工業(yè)不同的是，在轟轟烈烈的消泡戰(zhàn)役中，啤酒釀造自始至終在最大 限度的保持泡沫，啤酒泡持性是啤酒的重要理化和感官指標(biāo)之一。啤酒在外觀上不同于其 它飲料的一個(gè)重要特點(diǎn)：就是在倒入杯中時(shí)，會(huì)產(chǎn)生潔白細(xì)膩的泡沫，給人以潔凈、清爽 感，促進(jìn)人們的飲欲。因此啤酒的泡持性成為消費(fèi)者認(rèn)識(shí)啤酒品牌的重要特征。啤酒的泡 持性通常是指：啤酒的起泡性，持久性和附著性。液體復(fù)配酶某些穩(wěn)定劑和表面活性劑會(huì) 起到強(qiáng)力消泡劑的作用，氯化鈉的添加會(huì)是啤酒產(chǎn)生咸味，影響口感，防腐劑的添加會(huì)對(duì)人 體產(chǎn)生毒害……。
[0007] 因此，對(duì)于啤酒釀造工業(yè)來(lái)說(shuō)，制備一種安全、穩(wěn)定、作用效果顯著的液體復(fù)配酶 限制條件較多，尤其顯得困難，制備一種適合啤酒釀造的多種液體復(fù)配酶更加困難，目前， 還未見(jiàn)公開(kāi)的啤酒多種液體復(fù)配酶的報(bào)道。中國(guó)專利CN 101617740 B公開(kāi)了一種酶活保 有率高的飼用液體植酸酶制劑。本發(fā)明是在植酸酶原酶液中加入聚乙二醇6000、海藻糖、苯 甲酸鈉、純水，調(diào)節(jié)PH值為4. 5?5. 5 :其中聚乙二醇6000中的羥基與酶蛋白分子表面及 其活性中心的羧基、氨基等以共價(jià)鍵、氫鍵及范德華力等結(jié)合，從而使酶蛋白分子的活性中 心和整個(gè)酶蛋白分子得到保護(hù)；海藻糖（穩(wěn)定劑），提高酶溶液的滲透壓，使酶蛋白分子的 舒展度降低，分子相對(duì)處于脫水狀態(tài)而收縮，從而提高穩(wěn)定性；苯甲酸鈉（防腐劑）及優(yōu)選 pH范圍（4. 5?5. 5)，均起到提高液體酶的生物穩(wěn)定性的作用。中國(guó)專利CN 101717765 B 公開(kāi)一種環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶復(fù)配酶制劑，其特征在于該酶制劑是一種液體酶制劑；其 組成為：環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶、甘油、CaC12、PEG400以及明膠；所述環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移 酶為蛋白質(zhì)含量為3g/L-5g/L的發(fā)酵液，甘油濃度為10% -20% (體積分?jǐn)?shù)），CaC12濃度 為0. lg/L-0. 2g/L，PEG400濃度為5% -10% (體積分?jǐn)?shù)），明膠濃度為0. 5% -1% (質(zhì)量分 數(shù)）。具有極其優(yōu)異的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，在40°C保存60天，其酶活保留率仍高達(dá)95%以上，解決 了由于產(chǎn)品運(yùn)送或儲(chǔ)存時(shí)間較長(zhǎng)導(dǎo)致產(chǎn)品應(yīng)用性能下降的問(wèn)題。本發(fā)明提供的液體酶制劑 復(fù)配方法簡(jiǎn)單，原料來(lái)源豐富并且成本低，特別適合在工業(yè)上推廣。中國(guó)專利CN 103131557 B公開(kāi)了一種液體洗滌劑用酶制劑復(fù)合穩(wěn)定劑，涉及酶穩(wěn)定劑，解決現(xiàn)有液體洗滌劑中酶穩(wěn) 定性差，且傳統(tǒng)酶穩(wěn)定劑主要使用硼砂，對(duì)人體存在潛在危害的問(wèn)題。一種液體洗滌劑用酶 制劑復(fù)合穩(wěn)定劑，由以下重量份的各組分組成：環(huán)糊精〇. 05?20、氯化鈣0. 05?20、甘油 和丙二醇混合物1?10、非離子表面活性劑脂肪醇聚氧乙烯醚1?60、陰離子表面活性劑 烷基苯磺酸鈉1?60 ;其中所述的甘油與丙二醇混合物中甘油：丙二醇的重量比為2:6? 10。本發(fā)明可簡(jiǎn)化液體洗滌劑的生產(chǎn)及配方過(guò)程，顯著提高和延長(zhǎng)液體洗滌劑中酶制劑的 活性，原料安全無(wú)毒，對(duì)人體無(wú)害。上述公開(kāi)的液體酶制劑及穩(wěn)定劑均不適合啤酒釀造生 產(chǎn)。
[0008] 綜上，制備一種適合啤酒釀造的安全、穩(wěn)定、效果顯著的多種液體復(fù)配酶具有廣闊 的市場(chǎng)空間和良好的市場(chǎng)價(jià)值。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是將一種或多種經(jīng)濃縮、分離的液體酶制劑按照啤酒釀 造用途合理調(diào)配，并科學(xué)復(fù)配糖、多元醇、氨基酸、增稠劑、白蛋白、金屬離子等穩(wěn)定劑和促 進(jìn)酶制劑更加穩(wěn)定的酒花提取物、中草藥提取液、抗菌肽等具有防腐作用的物質(zhì)，有效地提 高了液體復(fù)配酶的酶活力穩(wěn)定性和生物穩(wěn)定性，在啤酒釀造中發(fā)揮了重要的催化劑作用， 同時(shí)還改善了啤酒的口感和泡沫性能等質(zhì)量指標(biāo)，無(wú)須添加防腐劑，制備出一種適合啤酒 釀造的安全、穩(wěn)定、效果顯著的液體復(fù)配酶。
[0010] 本發(fā)明的首要目的是提供一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法。
[0011] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0012] 一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，包括如下步驟，所述液體復(fù)配酶由以下重量份 數(shù)的原料制備：液體酶制劑40-60份，啤酒花提取液8-10份，糖5-10份，天然抗氧化劑8-10 份，中草藥提取液4_6份，抗菌肽3-5份，增稠劑3-5份，β -環(huán)糊精3-5份，多兀醇2-5份，谷 胱甘肽2-4份，金屬氯化物1-3份，硫酸銨1-2份，半胱氨酸0. 5-1份，牛血清白蛋白0. 1-0. 3 份；以重量份數(shù)計(jì)，按照上述配方首先準(zhǔn)確稱取增稠劑，加入其質(zhì)量4-6倍的無(wú)菌水，室溫 浸泡3-8h，邊升溫邊攪拌，80-90°C保溫20-30min，攪拌，充分溶解，繼續(xù)保溫，邊攪拌邊依 次加入β-環(huán)糊精、多元醇、糖、金屬氯化物，然后降溫至25-35°C，邊攪拌邊依次加入硫酸 銨、半胱氨酸、谷胱甘肽、抗菌肽、天然抗氧化劑、牛血清白蛋白、中草藥提取液、啤酒花提取 液、液體酶制劑充分溶解、混合，用乳酸調(diào)節(jié)液體復(fù)配酶pH值為2. 5-6,穩(wěn)定0. 5-2h，同時(shí)于 電場(chǎng)強(qiáng)度35-45kV/cm，脈沖時(shí)間400-600μ s，脈沖頻率300-400HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電 場(chǎng)（PEF)殺菌，除菌過(guò)濾、無(wú)菌灌裝即得液體復(fù)配酶。
[0013] 所述液體酶制劑的適宜溫度為35-115°C，適宜pH值為2. 5-6 ;
[0014] 進(jìn)一步地，所述液體酶制劑為葡聚糖酶、木聚糖酶、中溫淀粉酶、α-淀粉酶、耐高 溫α-淀粉酶、真菌α-淀粉酶、糖化酶、β-淀粉酶、普魯蘭酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶中 的任一種或幾種；
[0015] 優(yōu)選地，所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比 3-4:1-1. 5:0. 5-1 均勻混合；
[0016] 進(jìn)一步地，所述啤酒花提取液的制備方法為：將啤酒花置超聲波清洗機(jī)中于 200W、40KHz清洗10-15min，浙干，于-18--22°C冷凍l_2h后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度 3- 5cm，粉碎粒度0. 5-3mm，加入粉碎啤酒花重量1-3倍的乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇 混合的質(zhì)量比為2-4:1-3,用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3. 0-3. 5,在功率150-300W、頻率2000Hz、溫 度20-35°C條件下進(jìn)行微波提取20-30min，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn) 行超聲波輔助提?。槐豯_3h，然后，在功率200-400W、頻率2000Hz條件下進(jìn)行微波提取 15-20min，同時(shí)在功率300-500W，頻率40-50KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取，最后自然降 溫至室溫，過(guò)濾，濾液于電場(chǎng)強(qiáng)度35-45kV/cm，脈沖時(shí)間400-600 μ s，脈沖頻率200-300HZ 條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)（PEF)殺菌20-30min即得啤酒花提取液；
[0017] 所述啤酒花為新鮮成熟啤酒花、壓縮片花或壓縮顆粒酒花，優(yōu)選新鮮成熟啤酒花； 在采用顆粒酒花時(shí)，無(wú)須清洗；
[0018] 優(yōu)選地，所述超聲波清洗采用質(zhì)量百分比濃度為0. 2-0. 8%的碳酸氫鈉溶液為清 洗劑；
[0019] 優(yōu)選地，所述乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為3:2 ;
[0020] 優(yōu)選地，所述微波提取采用間歇式提取，即微波輻照20s，停止10s，如此循環(huán)；
[0021] 所述乙醇濃度彡75%。
[0022] 進(jìn)一步地，所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖中一種或多種；
[0023] 優(yōu)選地，所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質(zhì)量比5-8:1-3:2-4均勻混合。
[0024] 進(jìn)一步地，所述天然抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物中 的任 種或幾種組合；
[0025] 優(yōu)選地，所述葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物混合的質(zhì)量比為 4- 6:2-4:1-3 ；
[0026] 進(jìn)一步地，所述中草藥提取液的制備方法為：按重量份數(shù)計(jì)，準(zhǔn)確稱取黃芪60-70 份，當(dāng)歸55-65份，黨參40-45份，甘草40-45份，魚(yú)腥草35-45份，神曲35-45份，金銀花 25-35份，茯苓20-30份，遠(yuǎn)志15-25份，炒茴香15-25份，白術(shù)10-20份，厚樸10-20份；分別 將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控 制溫度70°C _90°C保持2-4h，然后降溫至45-60°C，加入混合物料總重量5-10%的混合酶制 劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5. 5-6. 8,酶解2-4h，最后添加混合物料0. 5-3倍重量乙醇 和丙醇的混合物，控制溫度至60°C -78°C保持3-4h，過(guò)濾，得第一濾液；添加濾渣1-3倍重 量的水，控制溫度85°C -95°C保持l_3h，然后降溫至25-35°C，過(guò)濾，得第二濾液；將第一濾 液和第二濾液按照質(zhì)量比2-3:1-2合并，于電場(chǎng)強(qiáng)度35-45kV/cm，脈沖時(shí)間400-600 μ s， 脈沖頻率300-400ΗΖ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)（PEF)殺菌20-30min即得中草藥提取液；
[0027] 優(yōu)選地，所述第一濾液和第二濾液合并的質(zhì)量比為2. 5:1. 5 ;
[0028] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為：內(nèi)β -葡聚糖酶10-20份，外β -葡聚糖酶10-20 份，β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份， β-淀粉酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，果膠酶10-15份，甘露糖酶10-15份，葡萄糖氧 化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份，脂肪酶5-8份；
[0029] 所述乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為1:1-2,所述乙醇濃度彡75%。
[0030] 進(jìn)一步地，所述多元醇為聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇、疏基乙醇中的一 種或幾種；
[0031] 優(yōu)選地，所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質(zhì)量比 8-10:4-6:2-4:1-3 均勻混合。
[0032] 進(jìn)一步地，所述增稠劑為卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、海藻膠、CMC、瓊脂、蜂 膠、紫膠、果膠、瓜爾豆膠、皂莢糖膠、亞麻子膠、魔芋膠中一種或者多種；
[0033] 優(yōu)選地，所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質(zhì)量比 3-5:2-4:1-3:1-2:0. 5-1 均勻混合。
[0034] 進(jìn)一步地，所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵中的一種或 多種；
[0035] 優(yōu)選地，所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質(zhì)量比 3-5:2-3:1-3:1-2:0· 1-0. 3 均勻混合。
[0036] 使用方法：
[0037] 糖化階段將本發(fā)明啤酒液體復(fù)配酶加入糖化鍋
[0038] 添加量：根據(jù)麥芽質(zhì)量的不同和釀造輔料的比例高低，每t干麥芽添加 500-1000ml ；
[0039] 作用條件：最適PH值4. 5-5. 5 ;最適溫度35-68°C ;最佳料水質(zhì)量比1:4. 5-5. 5。
[0040] 有益效果：
[0041] 1.本發(fā)明制備的啤酒花提取液、中草藥提取液采用低溫提取技術(shù)，最大限度地將 酒花和中草藥中的有效成分保留，并與抗菌肽科學(xué)復(fù)配，完全替代了防腐劑的添加，不僅有 效的抑制了有害微生物的繁殖和生長(zhǎng)，而且能夠和其它組分協(xié)同穩(wěn)定液體復(fù)配酶的活性， 從根本上提高了液體復(fù)配酶的生物穩(wěn)定性和酶活力穩(wěn)定性，有效延長(zhǎng)了液體酶制劑的保質(zhì) 期。制備的液體復(fù)配酶在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月菌落總數(shù)為168-214CFU/mL ;在40°C和0°C條件 下儲(chǔ)存12個(gè)月，酶活損失率分別為2-2. 5%和1-1. 7%。
[0042] 2.本發(fā)明在長(zhǎng)時(shí)間的試驗(yàn)基礎(chǔ)上，科學(xué)復(fù)配了具有消泡劑作用的多元醇，多元醇 是一類效果較好的酶制劑穩(wěn)定劑，與其它組分如啤酒花提取液、糖、增稠劑、β -環(huán)糊精、中 草藥提取液等一起，不僅沒(méi)有對(duì)糖化麥汁、發(fā)酵液、成品的泡沫性能和口感產(chǎn)生影響，反而 有所提升，取得了意想不到的效果。與市售液體糖化酶相比，麥芽香味與酒花香味明顯、柔 和協(xié)調(diào)，泡沫性能優(yōu)良，泡持性時(shí)間長(zhǎng)；濁度較低，雙乙酰含量較低，發(fā)酵良好，酒精度較高， 成品啤酒無(wú)論是感官指標(biāo)還是理化指標(biāo)都遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)先于普通啤酒復(fù)配酶，達(dá)到或超過(guò)了國(guó)家 現(xiàn)行啤酒優(yōu)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。
[0043] 3.本發(fā)明將天然抗氧化劑與谷胱甘肽科學(xué)復(fù)配于液體酶制劑中，不僅起到了較強(qiáng) 的抗氧化作用，避免了液體酶制劑中的溶解氧對(duì)酶分子蛋白和其它組分的氧化，更重要的 是天然抗氧化劑中的原花青素有效抑制了酶制劑蛋白的硝基化反應(yīng)和非酶糖基化反應(yīng)，顯 著提高了液體酶制劑蛋白的活力穩(wěn)定性。
[0044] 4.本發(fā)明中的牛血清白蛋白是牛血清中的一種球蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基， 可有效防止酶的分解和非特異性吸附，對(duì)有些內(nèi)切酶效果更加顯著，與其它組分如：谷胱甘 肽、金屬氯化物、多元醇、硫酸銨等科學(xué)復(fù)配，大大提高了液體復(fù)配酶的酶活穩(wěn)定性。
[0045] 5.本發(fā)明的液體復(fù)配酶的制備方法工藝簡(jiǎn)單、操作方便、可規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)，采用 高壓脈沖電場(chǎng)低溫殺菌技術(shù)（PEF)，既保證了液體酶制劑蛋白的生化活性，又有效殺滅和抑 制了微生物的繁殖和生長(zhǎng)，顯著提高了液體酶制劑的酶活穩(wěn)定性和生物穩(wěn)定性，有效延長(zhǎng) 了液體酶制劑的保質(zhì)期。
【具體實(shí)施方式】
[0046] 下面通過(guò)具體的實(shí)施方案敘述本發(fā)明。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說(shuō)明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書(shū)所限定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也 屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0047] 以下主要原料來(lái)源：
[0048] 1.經(jīng)分離、濃縮的液體中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、糖化酶均由湖南鴻鷹生 物科技股份有限公司生產(chǎn)，其中：
[0049] 中溫淀粉酶的活力為500-2000U/mL，最適反應(yīng)溫度為60-70°C，最適pH值為5-6 ;
[0050] 葡聚糖酶的活力為5000-12000U/mL，最適反應(yīng)溫度為40-65°C，最適pH值為 4-5. 5 ；
[0051] 木聚糖酶的活力為5000-20000U/mL，最適反應(yīng)溫度為50-65°C，最適pH值為 3. 5-6 ；
[0052] 糖化酶的活力為150000-200000U/mL，最適反應(yīng)溫度為60-70°C，最適pH值為5-6。
[0053] 2.新鮮成熟啤酒花采自新疆啤酒花股份有限公司種植基地。
[0054] 3.糖、增稠劑、β_環(huán)糊精、半胱氨酸均購(gòu)自上海權(quán)旺生物科技有限公司。
[0055] 4.葡萄籽原花青素購(gòu)買(mǎi)于河南安陽(yáng)晶森生物科技有限公司，有效成分：0PC/ Polyphenol, Assay 0PC95% /polyphenol90% ；
[0056] 銀杏葉提取物購(gòu)買(mǎi)于徐州恒凱銀杏制品有限公司，中國(guó)藥典2010版銀杏葉提取 物，總黃酮醇苷彡24%，產(chǎn)品注冊(cè)商標(biāo)：公孫堂Ginkgo Town ;
[0057] 迷迭香提取物購(gòu)買(mǎi)于河南森源本草天然產(chǎn)物股份有限公司，主要成分：迷迭香酸、 迷迭香酚等，含量85 %，注冊(cè)商標(biāo)森源本草；
[0058] 上述產(chǎn)品均為固體粉末。
[0059] 5.抗菌肽購(gòu)自廣東天浩生物工程股份有限公司，為食品用抗菌肽K-100,型號(hào) K-100。
[0060] 6.谷胱甘肽購(gòu)自西安融升生物科技有限公司，為食品用谷胱甘肽，谷胱甘肽含量 99%，產(chǎn)品編號(hào)：P0200375。
[0061] 7.牛血清白蛋白購(gòu)自上海如吉生物科技發(fā)展有限公司，lg國(guó)產(chǎn)cas:9048-46-8。
[0062] 實(shí)施例1啤酒花提取液的制備
[0063] 所述啤酒花提取液的制備方法為：將新鮮成熟啤酒花置超聲波清洗機(jī)中于200W、 40KHz清洗12min，浙干，于-20°C冷凍1. 5h后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度4cm，粉碎粒度 2mm,加入粉碎啤酒花重量2倍的乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為3:2， 用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3. 2,在功率200W、頻率2000Hz、溫度30°C條件下進(jìn)行微波間歇式提取 25min，同時(shí)在功率300W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取；保溫2h，然后，在功率 300W、頻率2000Hz條件下進(jìn)行微波提取18min，同時(shí)在功率400W，頻率45KHz條件下進(jìn)行超 聲波輔助提取，最后自然降溫至室溫，過(guò)濾，濾液于電場(chǎng)強(qiáng)度40kV/cm，脈沖時(shí)間500 μ s，脈 沖頻率250Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)（PEF)殺菌25min即得啤酒花提取液；
[0064] 所述超聲波清洗采用質(zhì)量百分比濃度為0. 2-0. 8%的碳酸氫鈉溶液為清洗劑；
[0065] 所述間歇式提取為微波輻照20s，停止10s，如此循環(huán)；
[0066] 所述乙醇濃度為80%。
[0067] 實(shí)施例2中草藥提取液的制備
[0068] 所述中草藥提取液的制備方法為：按重量份數(shù)計(jì)，準(zhǔn)確稱取黃芪65份，當(dāng)歸60份， 黨參42份，甘草42份，魚(yú)腥草40份，神曲40份，金銀花30份，茯苓25份，遠(yuǎn)志20份，炒茴 香20份，白術(shù)15份，厚樸15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器 中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫至50°C，加入混合物料總 重量8 %的混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6. 2,酶解3h，最后添加混合物料1. 8 倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為1:2,控制溫度至70°C保持4h，過(guò) 濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90°C保持2h，然后降溫至30°C，過(guò)濾，得 第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2. 5:1. 5合并，于電場(chǎng)強(qiáng)度40kV/cm，脈沖時(shí) 間500 μ s，脈沖頻率350Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)（PEF)殺菌25min即得中草藥提取 液；
[0069] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為：內(nèi)葡聚糖酶20份，外β-葡聚糖酶18份， β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普魯蘭酶25份，β -淀粉酶12份， 酸性蛋白酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化酶6份，酸性磷酸酶8份，脂肪 酶6份；
[0070] 所述乙醇濃度為75%。
[0071] 實(shí)施例3
[0072] -種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，包括如下步驟，所述液體復(fù)配酶由以下重量份 數(shù)的原料制備：液體酶制劑50份，啤酒花提取液9份，糖8份，天然抗氧化劑9份，中草藥提 取液5份，抗菌肽4份，增稠劑4份，β -環(huán)糊精4份，多元醇3份，谷胱甘肽3份，金屬氯化 物2份，硫酸銨2份，半胱氨酸0. 8份，牛血清白蛋白0. 2份。
[0073] 所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比3. 5:1. 2:0. 8均勻 混合；
[0074] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質(zhì)量比7:2:3均勻混合；
[0075] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比 5:3:2均勻混合；
[0076] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質(zhì)量比4:3:2:1.5:0. 8均勻 混合；
[0077] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質(zhì)量比9:5:3:2均勻混 合；
[0078] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質(zhì)量比 4:2. 5:2:1. 5:0. 2 均勻混合；
[0079] 所述啤酒花提取液由實(shí)施例1制備；
[0080] 所述中草藥提取液由實(shí)施例2制備；
[0081] 制備方法：以重量份數(shù)計(jì)，按照上述配方首先準(zhǔn)確稱取增稠劑，加入其質(zhì)量5倍的 無(wú)菌水，室溫浸泡6h，邊升溫邊攪拌，85°C保溫25min，攪拌，充分溶解，繼續(xù)保溫，邊攪拌 邊依次加入β-環(huán)糊精、多元醇、糖、金屬氯化物，然后降溫至30°C，邊攪拌邊依次加入硫酸 銨、半胱氨酸、谷胱甘肽、抗菌肽、天然抗氧化劑、牛血清白蛋白、中草藥提取液、啤酒花提取 液、液體酶制劑充分溶解、混合，用乳酸調(diào)節(jié)液體復(fù)配酶pH值為5. 2,穩(wěn)定1. 5h，同時(shí)于電場(chǎng) 強(qiáng)度40kV/cm，脈沖時(shí)間500 μ s，脈沖頻率350Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)（PEF)殺菌，除 菌過(guò)濾、無(wú)菌灌裝即得液體復(fù)配酶。
[0082] 經(jīng)上述方法制備的液體復(fù)配酶在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月菌落總數(shù)為168CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，酶活損失率分別為2%和1%。
[0083] 實(shí)施例4
[0084] 一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，包括如下步驟，所述液體復(fù)配酶由以下重量份 數(shù)的原料制備：液體酶制劑40份，啤酒花提取液8份，糖5份，天然抗氧化劑8份，中草藥提 取液4份，抗菌肽3份，增稠劑3份，β -環(huán)糊精3份，多元醇2份，谷胱甘肽2份，金屬氯化 物1份，硫酸銨1份，半胱氨酸〇. 5份，牛血清白蛋白0. 1份。
[0085] 所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比3:1:0. 5均勻混合；
[0086] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質(zhì)量比5:1:2均勻混合；
[0087] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比 4:2:1均勻混合；
[0088] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質(zhì)量比3:2:1:1:0. 5均勻混 合；
[0089] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質(zhì)量比8:4:2:1均勻混 合；
[0090] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質(zhì)量比3:2:1:1:0. 1 均勻混合；
[0091] 所述啤酒花提取液由實(shí)施例1制備；
[0092] 所述中草藥提取液由實(shí)施例2制備；
[0093] 制備方法同實(shí)施例3。
[0094] 經(jīng)上述方法制備的液體復(fù)配酶在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月菌落總數(shù)為208CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，酶活損失率分別為2. 2 %和1.3%。
[0095] 實(shí)施例5
[0096] -種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，包括如下步驟，所述液體復(fù)配酶由以下重量份 數(shù)的原料制備：液體酶制劑60份，啤酒花提取液10份，糖10份，天然抗氧化劑10份，中草 藥提取液6份，抗菌肽5份，增稠劑5份，β -環(huán)糊精5份，多元醇5份，谷胱甘肽4份，金屬 氯化物3份，硫酸銨2份，半胱氨酸1份，牛血清白蛋白0. 3份。
[0097] 所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比4:1. 5:1均勻混合；
[0098] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質(zhì)量比8:3:4均勻混合；
[0099] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比 6:4:3均勻混合；
[0100] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質(zhì)量比5:4:3:2:1均勻混 合；
[0101] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質(zhì)量比10:6:4:3均勻混 合；
[0102] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質(zhì)量比5:3:3:2:0. 3 均勻混合；
[0103] 所述啤酒花提取液由實(shí)施例1制備；
[0104] 所述中草藥提取液由實(shí)施例2制備；
[0105] 制備方法同實(shí)施例3。
[0106] 經(jīng)上述方法制備的液體復(fù)配酶在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月菌落總數(shù)為214CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，酶活損失率分別為2. 5 %和1.7%。
[0107] 實(shí)施例6
[0108] 一種啤酒液體糖化酶的制備方法，包括如下步驟，所述液體復(fù)配酶由以下重量份 數(shù)的原料制備：糖化酶50份，啤酒花提取液9份，糖8份，天然抗氧化劑9份，中草藥提取液 5份，抗菌肽4份，增稠劑4份，β -環(huán)糊精4份，多元醇3份，谷胱甘肽3份，金屬氯化物2 份，硫酸銨2份，半胱氨酸0. 8份，牛血清白蛋白0. 2份。
[0109] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質(zhì)量比7:2:3均勻混合；
[0110] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比 5:3:2均勻混合；
[0111] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質(zhì)量比4:3:2:1.5:0. 8均勻 混合；
[0112] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質(zhì)量比9:5:3:2均勻混 合；
[0113] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質(zhì)量比 4:2. 5:2:1. 5:0. 2 均勻混合；
[0114] 所述啤酒花提取液由實(shí)施例1制備；
[0115] 所述中草藥提取液由實(shí)施例2制備；
[0116] 制備方法同實(shí)施例3。
[0117] 經(jīng)上述方法制備的液體糖化酶在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月菌落總數(shù)為168CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲(chǔ)存12個(gè)月，酶活損失率分別為2 %和1%。
[0118] 實(shí)施例7啤酒液體復(fù)配酶的生物穩(wěn)定性
[0119] 以本發(fā)明實(shí)施例6制備的液體糖化酶與市售相同生產(chǎn)日期的同規(guī)格液體糖化酶 為試驗(yàn)對(duì)象，在相同儲(chǔ)藏條件（室溫、通風(fēng)、避光）下，采用《GB8726-2006食品添加劑糖化 酶制劑》中檢測(cè)方法檢測(cè)了 pH值、菌落總數(shù)、致病菌等衛(wèi)生指標(biāo)，結(jié)果如表1 :
[0120] 表1儲(chǔ)存12個(gè)月微生物指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果
[0121]
【權(quán)利要求】
1. 一種啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟，所述液體復(fù)配酶由以 下重量份數(shù)的原料制備：液體酶制劑40-60份，啤酒花提取液8-10份，糖5-10份，天然抗氧 化劑8-10份，中草藥提取液4-6份，抗菌肽3-5份，增稠劑3-5份，β -環(huán)糊精3-5份，多兀 醇2-5份，谷胱甘肽2-4份，金屬氯化物1-3份，硫酸銨1-2份，半胱氨酸0. 5-1份，牛血清 白蛋白0. 1-0. 3份；以重量份數(shù)計(jì)，按照上述配方首先準(zhǔn)確稱取增稠劑，加入其質(zhì)量4-6倍 的無(wú)菌水，室溫浸泡3-8h，邊升溫邊攪拌，80-90°C保溫20-30min，攪拌，充分溶解，繼續(xù)保 溫，邊攪拌邊依次加入β -環(huán)糊精、多元醇、糖、金屬氯化物，然后降溫至25-35°C，邊攪拌邊 依次加入硫酸銨、半胱氨酸、谷胱甘肽、抗菌肽、天然抗氧化劑、牛血清白蛋白、中草藥提取 液、啤酒花提取液、液體酶制劑充分溶解、混合，用乳酸調(diào)節(jié)液體復(fù)配酶pH值為2. 5-6,穩(wěn)定 0. 5-2h,同時(shí)于電場(chǎng)強(qiáng)度35-45kV/cm，脈沖時(shí)間400-600 μ s,脈沖頻率300-400HZ條件下 進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)殺菌，除菌過(guò)濾、無(wú)菌灌裝即得液體復(fù)配酶。
2. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述液體酶制劑由 中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比3-4:1-1. 5:0. 5-1均勻混合。
3. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述啤酒花提取液 的制備方法為：將啤酒花置超聲波清洗機(jī)中于200W、40KHz清洗10-15min，浙干，于-18- -22°C冷凍l_2h后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3-5cm，粉碎粒度0. 5-3mm，加入粉碎啤 酒花重量1-3倍的乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質(zhì)量比為2-4:1-3,用乳酸 調(diào)節(jié)pH值為3. 0-3. 5,在功率150-300W、頻率2000Hz、溫度20-35°C條件下進(jìn)行微波提取 20-30min，同時(shí)在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提??；保溫l-3h， 然后，在功率200-400W、頻率2000Hz條件下進(jìn)行微波提取15-20min，同時(shí)在功率300-500W， 頻率40-50KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取，最后自然降溫至室溫，過(guò)濾，濾液于電場(chǎng)強(qiáng)度 35-45kV/cm，脈沖時(shí)間400-600μ s，脈沖頻率200-300HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)殺菌 20-30min即得啤酒花提取液。
4. 如權(quán)利要求3所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述啤酒花為新鮮 成熟啤酒花、壓縮片花或壓縮顆粒酒花。
5. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述糖為海藻糖、靈 芝多糖、葡萄糖按質(zhì)量比5-8:1-3:2-4均勻混合。
6. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述天然抗氧化劑 為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質(zhì)量比為4-6:2-4:1-3均勻混合。
7. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述中草藥提取液 的制備方法為：按重量份數(shù)計(jì)，準(zhǔn)確稱取黃芪60-70份，當(dāng)歸55-65份，黨參40-45份，甘 草40-45份，魚(yú)腥草35-45份，神曲35-45份，金銀花25-35份，茯苓20-30份，遠(yuǎn)志15-25 份，炒茴香15-25份，白術(shù)10-20份，厚樸10-20份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫 米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C -90°C保持2-4h， 然后降溫至45-60°C，加入混合物料總重量5-10 %的混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH 值為5. 5-6. 8,酶解2-4h，最后添加混合物料0. 5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和 丙醇混合的質(zhì)量比為1:1-2,控制溫度至60°C -78°C保持3-4h，過(guò)濾，得第一濾液；添加濾 渣1-3倍重量的水，控制溫度85°C -95°C保持l_3h，然后降溫至25-35°C，過(guò)濾，得第二濾 液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量比2-3:1-2合并，于電場(chǎng)強(qiáng)度35-45kV/cm，脈沖時(shí)間 400-600μ s，脈沖頻率300-400HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場(chǎng)殺菌20-30min即得中草藥提取 液； 所述混合酶的重量份數(shù)組成為：內(nèi)β -葡聚糖酶10-20份，外β -葡聚糖酶10-20份， β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β -淀 粉酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，果膠酶10-15份，甘露糖酶10-15份，葡萄糖氧化酶 5-10份，酸性磷酸酶5-10份，脂肪酶5-8份； 所述乙醇濃度彡75%。
8. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述增稠劑由卡拉 膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質(zhì)量比3-5:2-4:1-3:1-2:0. 5-1均勻混合。
9. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述多元醇由聚乙 二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質(zhì)量比8-10:4-6:2-4:1-3均勻混合。
10. 如權(quán)利要求1所述的啤酒液體復(fù)配酶的制備方法，其特征在于，所述金屬氯化物為 氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質(zhì)量比3-5:2-3:1-3:1-2:0. 1-0. 3均勻混合。
【文檔編號(hào)】C12N9/26GK104099315SQ201410346198
【公開(kāi)日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
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