專利名稱：一種鳶尾的組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種路易斯安娜鳶尾的組培方法。
背景技術(shù)：
路易斯安娜鳶尾系鳶尾科鳶尾屬的水生花卉植物，原產(chǎn)美國(guó)路易斯安娜州。該植物在北美和歐洲一些國(guó)家早已被廣泛應(yīng)用，花期4-5月，花色豐富，不僅具有花大、色艷、 葉花并觀等優(yōu)良觀賞性狀，而且還有較強(qiáng)的適應(yīng)性，抗寒、耐旱性強(qiáng)、耐管理粗放等特征， 同時(shí)，在我國(guó)長(zhǎng)江以南地區(qū)更具有常綠等優(yōu)勢(shì)特性。目前市場(chǎng)形勢(shì)看好，但優(yōu)質(zhì)苗木供不應(yīng)求。該系列花卉以往主要以分株、種子進(jìn)行繁殖，不僅繁殖速度慢，費(fèi)工費(fèi)時(shí)，滿足不了市場(chǎng)的需求；同時(shí)，該類植物種子發(fā)芽率低，且其種子繁殖后代分離嚴(yán)重，很多品種不能再現(xiàn)原有優(yōu)良品種的特性，且其分株繁殖又受季節(jié)的限制。雖然在現(xiàn)有的組培技術(shù)中已有關(guān)于路易斯安娜鳶尾組培方法的報(bào)導(dǎo)，例如，朱旭東，水生常綠雜種鳶尾組培育苗，中國(guó)花卉園藝，2007，10 :23-25 ；路易斯安娜鳶尾組培和苗期生長(zhǎng)規(guī)律初步研究，福建林業(yè)科技， 2009,36(3) :175-179)；吳月燕，路易斯安娜鳶尾組織培養(yǎng)過(guò)程中愈傷組織誘導(dǎo)和芽的分化，浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，1 :86-89 ；賈明良，路易斯安娜鳶尾快繁體系的建立，科技通報(bào)， 201026(4) =518-522 ；但上述技術(shù)中主要還存在著以下問(wèn)題因滅菌技術(shù)不當(dāng)造成污染率較高，導(dǎo)致外植體接種成活率較低——基本上都在60-70% ；因激素濃度不當(dāng)導(dǎo)致芽誘導(dǎo)率較低——70-80% ；因此，生產(chǎn)上急需尋找一種能解決以上的技術(shù)不足，速度快、繁殖系數(shù)高的鳶尾組培快繁的方法，來(lái)解決路易斯安娜鳶尾生產(chǎn)實(shí)踐中種苗供不應(yīng)求的難題，以加快路易斯安娜鳶尾的推廣應(yīng)用工作。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是，針對(duì)已有鳶尾組培技術(shù)所存在的外植體污染率高和芽誘導(dǎo)率低的缺陷，提供一種操作簡(jiǎn)單、污染率低、植株再生成功率高，種苗品質(zhì)優(yōu)的鳶尾組培快繁方法。一種鳶尾的組培快繁方法，該方法按如下步驟進(jìn)行(1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基采用LS基本培養(yǎng)基，其中，白糖15_30g/L，瓊脂5_8g/L， ρΗ5· 6-5. 8 ；2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:LS+ 山農(nóng)一號(hào) 5-10ml/L+6-BA 0. 3-1. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基:LS+6-BA 0. 5-1. 5mg/L+NAA 0. 2-0. 5mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA 0. 3-0. 5mg/L 和 NAA 0. 5-0. 8mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA0. 5-1. 5mg/L+GA0. 3-0. 5mg/L ；(2)鳶尾脫毒組培苗的培養(yǎng)1)外植體的選擇與滅菌取健壯鳶尾植株的幼嫩地下芽，剪除基部以上葉片及根系，用10%洗潔精液浸泡8-lOmin，流水沖洗1- ；于超凈工作臺(tái)上用無(wú)菌水沖洗，用70%酒精消毒30-60s，0. 升汞水溶液浸泡8-15min滅菌后用無(wú)菌水沖洗5_6次；將其莖尖組織塊撥出，切成0. 3-0. 5cm3的小塊作為外植體，備用；2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將莖尖外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在25 士 2°C，光強(qiáng) 1500-2500LX，光照Uh/d條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)15-20天至形成叢生芽；3)芽增殖培養(yǎng)將叢生芽轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基上，在25 士 2°C，光強(qiáng) 1500-2500LX，光照Uh/d條件下培養(yǎng)15-25天至形成繼代叢生芽；根據(jù)對(duì)叢生芽數(shù)量的需求，每隔10-20天按同樣方法進(jìn)行一次再增殖；4)壯苗培養(yǎng)將繼代叢生芽轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強(qiáng)1500-2500LX， 光照iai/d條件下培養(yǎng)20-30天至苗高6-8cm ；5)生根培養(yǎng)將上述壯苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，在25士2°C，光強(qiáng)1500-2500LX，光照Uh/d條件下培養(yǎng)15-30天，至基部長(zhǎng)出1-5根根系即成鳶尾脫毒組培苗；(3)組培苗的煉苗與移栽1)煉苗將長(zhǎng)高至10-15cm、長(zhǎng)根> 5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內(nèi)，放置1_3 天后打開(kāi)瓶蓋，在25-28°C，濕度70-80%，光強(qiáng)7000-80001X條件下煉苗3_5天；2)移栽與培養(yǎng)將煉苗后的組培苗洗凈根部培養(yǎng)基，用0. 多菌靈溶液浸泡根部30-60秒后，移栽至沙壤土 泥炭黃壤土按體積6 3 1的混合基質(zhì)中，用塑料薄膜覆蓋并蓋上遮陰網(wǎng)，在，濕度80-95%，光強(qiáng)宜先弱后強(qiáng)，在< ΙΟΟΟΟΙχ條件下培育 1周，后逐漸打開(kāi)薄膜；2周后進(jìn)入常規(guī)管理，其組培苗移栽成活率達(dá)95%以上；培養(yǎng)1-2個(gè)月后，即成鳶尾種苗。所述培養(yǎng)基的配方，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基LS培養(yǎng)基，其中，白糖20g/L，瓊脂5. 5g/L，pH5. 8 ；2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:LS+ 山農(nóng)一號(hào) 7ml/L+6-BA 0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基LS+6-BA 1. Omg/L+NAA 0. 3mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA1. 0mg/L+GA0. 3mg/L。本發(fā)明的有益效果是1)本發(fā)明選擇冬末初春時(shí)機(jī)取剛萌發(fā)的地下嫩芽，獲得相對(duì)潔凈的外植體，結(jié)合恰當(dāng)?shù)臏缇夹g(shù)，并在初代培養(yǎng)基里加入合適劑量(5-10ml/L)的廣譜性生物殺菌劑山農(nóng)一號(hào)，使外植體接種成活率由常規(guī)的60-70%提高到90%以上，在短期內(nèi)獲得了大量的無(wú)菌材料；2)本發(fā)明通過(guò)合適的6-BA濃度(0. 3-1. 0mg/L)加速了外植體的誘導(dǎo)分化，使芽誘導(dǎo)率達(dá)到了 99%的效果，較文獻(xiàn)資料中普遍報(bào)道的70-80%有了明顯的提高；通過(guò)恰當(dāng)?shù)?-BA(0. 3-1. 5mg/L)和NAA濃度(0. 2-0. 5mg/L)組合還提高了叢生芽的增殖系數(shù)及壯苗率，以及篩選最佳生根劑等綜合技術(shù)的應(yīng)用，使鳶尾組培苗的繁殖量每年達(dá)到了 20萬(wàn)株以上，實(shí)現(xiàn)了鳶尾種苗的規(guī)?；a(chǎn)。
具體實(shí)施例方式通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。其中，6-BA :6-芐氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine)，Sigma進(jìn)口國(guó)內(nèi)分裝，分析純，純度 99. 9%。NAA: α-萘乙酸(1-Naphthylacetic acid)，Sigma 進(jìn)口國(guó)內(nèi)分裝，分析純，純度 99. 5%。GA3 赤霉素(Gibberellin A3)，sigma進(jìn)口國(guó)內(nèi)分裝，分析純，純度90%。山農(nóng)一號(hào)廣譜性生物殺菌劑，普朗特生物技術(shù)有限公司提供。洗潔精立白洗潔精，普通清洗劑，廣州立白企業(yè)集團(tuán)有限公司。實(shí)施例1 ( 一種鳶尾的組培方法1)按以下步驟進(jìn)行(1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為1)基本培養(yǎng)基LS培養(yǎng)基，其中，白糖20g/L，瓊脂5. 5g/L，pH5. 8 ；2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:LS+ 山農(nóng)一號(hào) 7ml/L+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 2mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基LS+6-BAl. 0mg/L+NAA0. 3mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 3mg/L 和 NAAO. 5mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA1. 0mg/L+GA0. 3mg/L ；其中LS基本培養(yǎng)基的配方為；
權(quán)利要求
1.一種鳶尾的組培快繁方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行(1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基采用LS基本培養(yǎng)基，其中，白糖15-30g/L，瓊脂5-8g/L，pH5.6-5. 8 ；2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:LS+山農(nóng)一號(hào) 5-10ml/L+6-BA 0. 3-1. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 5-1. 5mg/L+NAA 0. 2-0. 5mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0. 3-0. 5mg/L 和 NAA 0. 5-0. 8mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA0.5-1. 5mg/L+GA0. 3-0. 5mg/L ；(2)鳶尾脫毒組培苗的培養(yǎng)1)外植體的選擇與滅菌取健壯鳶尾植株的幼嫩地下芽，剪除基部以上葉片及根系， 用10%洗潔精液浸泡8-lOmin，流水沖洗1- ；于超凈工作臺(tái)上用無(wú)菌水沖洗，用70%酒精消毒30-60s，0. 升汞水溶液浸泡8-15min滅菌后用無(wú)菌水沖洗5_6次；將其莖尖組織塊撥出，切成0. 3-0. 5cm3的小塊作為外植體，備用；2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)將莖尖外植體接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強(qiáng)1500-2500LX， 光照iai/d條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)15-20天至形成叢生芽；3)芽增殖培養(yǎng)將叢生芽轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強(qiáng)1500-2500LX，光照Uh/d條件下培養(yǎng)15-25天至形成繼代叢生芽；根據(jù)對(duì)叢生芽數(shù)量的需求，每隔10-20天按同樣方法進(jìn)行一次再增殖；4)壯苗培養(yǎng)將繼代叢生芽轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基上，在25士2°C，光強(qiáng)1500-2500LX，光照 12h/d條件下培養(yǎng)20-30天至苗高6-8cm ；5)生根培養(yǎng)將上述壯苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，在25士 2°C，光強(qiáng)1500-2500LX，光照 Uh/d條件下培養(yǎng)15-30天，至基部長(zhǎng)出1-5根根系即成鳶尾脫毒組培苗；(3)組培苗的煉苗與移栽1)煉苗將長(zhǎng)高至10-15cm、長(zhǎng)根>5根的組培苗帶瓶移至普通大棚內(nèi)，放置1_3天后打開(kāi)瓶蓋，在25-28°C，濕度70-80%，光強(qiáng)7000-80001X條件下煉苗3_5天；2)移栽與培養(yǎng)將煉苗后的組培苗洗凈根部培養(yǎng)基，用0.多菌靈溶液浸泡根部 30-60秒后，移栽至沙壤土 泥炭黃壤土按體積6 3 1的混合基質(zhì)中，用塑料薄膜覆蓋并蓋上遮陰網(wǎng)，在^-30°C，濕度80-95%，光強(qiáng)宜先弱后強(qiáng)，在< ΙΟΟΟΟΙχ條件下培育1 周，后逐漸打開(kāi)薄膜；2周后進(jìn)入常規(guī)管理，其組培苗移栽成活率達(dá)95%以上；培養(yǎng)1-2個(gè)月后，即成鳶尾種苗。
2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基的配方，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的組分及其每升所含的重量與體積為1)基本培養(yǎng)基LS培養(yǎng)基，其中，白糖20g/L，瓊脂5.5g/L，pH5. 8 ；2)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:LS+山農(nóng)一號(hào) 7ml/L+6-BA 0. 5mg/L+NAA 0. 2mg/L ；3)繼代增殖培養(yǎng)基LS+6-BA1. 0mg/L+NAA 0. 3mg/L ；4)壯苗培養(yǎng)基:LS+6-BA0.3mg/L+NAA 0. 5mg/L ；5)生根培養(yǎng)基:LS+NAA1.0mg/L+GA0. 3mg/L。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種鳶尾的組培快繁方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。方法包括(1)培養(yǎng)基的配制；(2)鳶尾脫毒組培苗的培養(yǎng)；(3)組培苗的煉苗與移栽等步驟工藝。該方法通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基激素種類、含量的調(diào)整與添加抗生素等技術(shù)手段，顯著降低了鳶尾外植體的污染率，使接種成活率達(dá)到90％以上；也明顯提高了外植體的誘導(dǎo)分化率，由已有技術(shù)的70-80％上升到99％，且提高了鳶尾組培的壯苗率。本發(fā)明可在園林綠化與組培企業(yè)中推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102239805SQ201110177549
公開(kāi)日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2011年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月28日
發(fā)明者劉慧春, 周江華, 朱開(kāi)元, 鄒清成, 馬廣瑩 申請(qǐng)人:浙江省蕭山棉麻研究所