專利名稱：：用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物再生的方法，具體是用檀香樹種子胚離體培養(yǎng)快速苗育的方法。
背景技術(shù)：
：檀香樹(53/^W，《3乃，L.)是檀香科常綠喬木，原產(chǎn)于印度、印度尼西亞及馬來西亞，有很高的藥用價值和經(jīng)濟(jì)價值。其樹干心材含有豐富的揮發(fā)油，是名貴的中藥材，主要有溫中和胃、止痛止血的功效，心材所含的揮發(fā)油在醫(yī)藥工業(yè)上用途非常廣泛。此外，檀香還是日用化妝品生產(chǎn)中的貴重原料。檀香是常綠植物，也作為亞熱帶地區(qū)的綠化樹種，因此，大力推廣檀香種植對于解決國內(nèi)檀香資源緊缺具有重大意義。推廣種植檀香樹需要解決的是種苗的來源，目前檀香樹苗主要靠種子繁殖，由于檀香種子成熟后有一定的休眠期，播種前需要半年至一年的沙藏，從播種到萌發(fā)成苗，一般需23個月，且種子發(fā)芽率低，出苗不整齊，是檀香種苗繁育的一大障礙。文獻(xiàn)"檀香體細(xì)胞胚胎的發(fā)生及植株再生的研究"(食品與藥品，200S,10(1):35-37)報道了應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)研究開發(fā)檀香樹種苗的生產(chǎn)，其方法是用檀香樹的葉片在附加1.1pmol/LTDZ(thidiazuron,N-苯基-N'-l,2，3-噻二唑-5-脲)的MS培養(yǎng)基(Murashige和Skoog，1962)上誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎的發(fā)生，再將生成的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)移到附加1.4pmol/L的赤霉素的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使之發(fā)育成苗。該方法培養(yǎng)的周期長，從體細(xì)胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)開始到無菌苗生成需要34個月的時間；生成的無菌苗沒有根，所得的檀香苗成不了種苗，不能推廣應(yīng)用。CN101213936A公開了一種檀香的組織培養(yǎng)快繁種苗的方法，但它是需要用十年以上的檀香樹的嫩芽進(jìn)行體外培養(yǎng)，其方法需四個步驟一是誘導(dǎo)長出不定芽的培養(yǎng)；二是叢芽繁殖培養(yǎng)；三是生根培養(yǎng)；四是移栽。步驟繁瑣，成苗時間長，成本高而且在實際應(yīng)用中，成功率很低，僅處在理論研究階段，方法上有待進(jìn)一步改進(jìn)。因此，尋求一種實用技術(shù)快速培養(yǎng)檀香樹苗對于檀香種植業(yè)具有重要的實際意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供了一種能實際應(yīng)用于批量生產(chǎn)的，檀香樹種苗快速繁育的方法。為達(dá)到本發(fā)明的目的，所采用的技術(shù)方案是用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，它是取檀香種胚置于人工培養(yǎng)基上，在25士2'C，無菌黑暗培養(yǎng)IO天，第11天增加光照16小時，黑暗8小時，光照強(qiáng)度為2000lx，培養(yǎng)10天，再將萌發(fā)的苗移栽至沙土，在溫度26士2'C、相對濕度75±5%、光照強(qiáng)度為150020001x、光照12小時條件下培養(yǎng)30天以上即成種苗，種苗可長成1520公分高，根系發(fā)達(dá)的樹苗，即可移栽至大田。所說的人工培養(yǎng)基為1L的MS培養(yǎng)基中添加26mg的赤霉素或1L的MS培養(yǎng)基中添加1.0~2.0mg6-芐基氨基嘌呤。為了提高種胚的發(fā)芽率和成活率，將用作離體培養(yǎng)的檀香樹的成熟果實去除肉質(zhì)的果皮，洗凈后，用重量百分濃度為0.1%的HgCl2溶液浸泡815分鐘，或510°/。的次氯酸鈉水溶液浸泡1520分鐘，或用0.51.0%高錳酸鉀溶液浸泡2060分鐘，浸泡后取出種子用無菌水沖洗，去除水分后備用。本發(fā)明的有益效果1.縮短了育苗時間從用種胚開始培養(yǎng)至長成1520公分高，可移栽大田的苗，僅需5060天；2.成苗率高，成苗率可達(dá)到87%;3.種苗發(fā)芽整齊，便于大規(guī)模生產(chǎn)操作；4.成本比組織培養(yǎng)低。下面通過實施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案具體實施例方式實施例1檀香樹種子胚離體育苗1.材料與方法l.l種子采集在10月12月間，采集樹齡約為IO年的檀香樹成熟(紫黑色)果實，去除外層紫黑色肉質(zhì)果皮后，用清水洗凈，晾干備用。人工培養(yǎng)基的酉己制按文獻(xiàn)NarayanaswamiS,NorstogK.Plantembryoculture.BotRev[J]，1964,30:587-628配制MS培養(yǎng)基，高壓滅菌(O.lMPa，121°C,15分鐘)后冷卻至5(TC，按，每lL的MS培養(yǎng)基添加4.8mg赤霉素。1.2種胚離體培養(yǎng)將上述檀香種子剝除紅色骨質(zhì)中果皮，取出種子，用重量百分濃度為10%的次氯酸鈉水溶液浸泡15分鐘后，用無菌水沖洗5次，吸干表面過多水分，在無菌條件下接種于人工培養(yǎng)基上(每瓶接種3個胚)，在25土rc，黑暗培養(yǎng)。每5天觀察一次，記錄萌發(fā)情況；第ll天轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)(每天16小時光照，8小時黑暗，光照強(qiáng)度為2000k)，培養(yǎng)10天后大部分種胚都己萌發(fā)，或長成帶12對葉的小苗，即可取出移栽至沙土，在26士2'C溫度，相對濕度7080%，多少光照度光照12小時的條件下培養(yǎng)30天，檀香苗生長健壯，根系發(fā)達(dá)，苗高達(dá)1520公分，即可成為栽培生產(chǎn)用苗，同時統(tǒng)計成苗數(shù)量，計算成苗率。結(jié)果見表l。試驗結(jié)果表1檀香種胚體外培養(yǎng)成苗情況<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>萌發(fā)率計算萌發(fā)率=萌發(fā)的胚數(shù)量/接種的胚數(shù)量X100%成苗率計算成苗率二成苗的數(shù)量/接種的胚數(shù)量X100%實施例2檀香樹種子胚胎用不同激素濃度的培養(yǎng)基離體育苗l.材料與方法l.l種子采集同實施例l培養(yǎng)基的配制與實施例1相同方法配制MS培養(yǎng)基并滅菌后，按每1L的MS培養(yǎng)基添加2.0mg或6.0mg赤霉素配制，分別為試驗組1、2。1.2種胚離體培養(yǎng)方法同實施例l。剝?nèi)テさ姆N子用O.1%的升汞(HgCl2)溶液浸泡10分鐘。種子消毒后的處理方法同實施例1結(jié)果見表2表2檀香種胚體外培養(yǎng)成苗情況試驗組試驗批次檀香種胚總萌發(fā)數(shù)平均萌發(fā)總成苗數(shù)平均成苗率接種數(shù)量(粒)率(％)(顆)(%)(粒)1958387.48084.212998787.88585.93998989.98686.91907886.76572.222907583.37077.83908088.96875.5實施例3檀香樹種子胚胎用其它激素培養(yǎng)基離體育苗l.材料與方法l.l種子采集同實施例l培養(yǎng)基的配制與實施例1相同方法配制MS培養(yǎng)基，按2.0mg/L的用量添加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)后，再高壓滅菌(O.lMPa，121°C，15分鐘)。1.2種胚離體培養(yǎng)方法同實施例1。結(jié)果見表3表3檀香種胚在含6-BA的人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)的成苗情況試驗批次6-BA濃檀香種胚總萌發(fā)數(shù)平均萌發(fā)總成苗數(shù)平均成苗率度(mg/L)接種數(shù)量(粒)率a)(顆)(%)(粒)11.0995353.53131.321.5904145.52829.532.0954244.22425.2實施例4，種子用不同消毒方法的育苗試驗比較材料與方法l.l種子采集同實施例l培養(yǎng)基的配制方法同實施例l1.2種胚離體培養(yǎng)方法同實施例l。剝?nèi)ビ财さ姆N子胚的分別用下列不同的消毒劑進(jìn)行消毒A次氯酸鈉溶液；B升汞溶液；C高錳酸鉀溶液；種胚消毒后的處理方法及培養(yǎng)條件同實施例l。試驗結(jié)果見表4<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1.一種用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，其特征在于取檀香種胚置于人工培養(yǎng)基上，在25±2℃，無菌黑暗培養(yǎng)10天，第11天增加光照16小時，黑暗8小時，光照強(qiáng)度為2000lx，培養(yǎng)10天，再將萌發(fā)的苗移栽至沙土，在溫度26±2℃、相對濕度75±5％、光照強(qiáng)度為1500～2000lx、光照12小時條件下培養(yǎng)30天以上即成種苗，所說的人工培養(yǎng)基為1L的MS培養(yǎng)基中添加赤霉素2～6mg或6-芐基氨基嘌呤1.0～2.0mg。2.根據(jù)權(quán)利要求1所說的用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，其特征在于在取檀香樹的種子胚之前將檀香樹的種子用重量百分濃度為0.1%的HgCl2水溶液浸泡515分鐘，或用重量百分濃度為515%的次氯酸鈉水溶液浸泡520分鐘，或用重量百分濃度為0.51.0%高錳酸鉀溶液浸泡2060分鐘，浸泡后取出種子用無菌水沖洗，去除水分后備用。全文摘要用檀香樹種子胚離體快速育苗的方法，涉及植物再生的方法，具體是用檀香樹種子胚離體培養(yǎng)快速育苗的方法。它是取檀香種胚置于人工培養(yǎng)基上，在25±2℃，無菌黑暗培養(yǎng)10天，第11天增加光照16小時，黑暗8小時，光照強(qiáng)度為2000lx，培養(yǎng)10天，再將萌發(fā)的苗移栽至沙土，在溫度26±2℃、相對濕度75±5％、光照強(qiáng)度為1500～2000lx、光照12小時條件下培養(yǎng)30天以上即成種苗，所說的人工培養(yǎng)基為1L的MS培養(yǎng)基中添加2～6mg的赤霉素或1L的MS培養(yǎng)基中添加2.0mg6-芐基氨基嘌呤。本發(fā)明的有益效果縮短了育苗時間；成苗率高，成苗率可達(dá)87％；種苗發(fā)芽整齊，便于大規(guī)模生產(chǎn)操作；成本低。文檔編號A01C1/00GK101595824SQ200910040708公開日2009年12月9日申請日期2009年7月1日優(yōu)先權(quán)日2009年7月1日發(fā)明者振嚴(yán),曾慶錢,莫小路,蔡岳文,亮袁,邱蔚芬申請人:廣東省中藥研究所