專利名稱：一種檢測相思子毒素的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測相思子毒素的化學(xué)發(fā)光試劑 盒，本發(fā)明還提供了該試劑盒的制備方法。
背景技術(shù)：
相思子毒素(abrin)是存在于豆科植物相思子(Abrus Precatorius L.)的種子 中的一種毒蛋白，與蓖麻毒素(ricin)同為II型核糖體失活蛋白(RIP)家族成員，是迄今 為止所發(fā)現(xiàn)的毒性最強的植物毒素之一，毒性是普通化學(xué)武器的幾百倍。由于不同產(chǎn)地 或品種，同種植物所含毒素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)可能稍有不同，臺灣產(chǎn)的相思子中同時分出四種 相思子毒素異毒素abrin-a、abrin_b、abrin-c及abrin_d，相對分子質(zhì)量介于63kDa 67kDa之間，其中abrin-b和abrin-c由于其B鏈凝集活性低而只有較弱的細胞毒性作用， 而abrin-a、abrin-d則有極強的細胞毒性，成年人攝入的致死劑量為5. 0 7. 0 y g/Kg，只 需嚼爛后吞服一粒種子即可被毒死，而且出現(xiàn)癥狀時已經(jīng)造成機體嚴重的器質(zhì)損害，給中 毒的治療及預(yù)防帶來極大的困難，因此開展對相思子毒素檢測技術(shù)的研究具有十分重要的
眉、o國內(nèi)外有關(guān)相思子毒素的生物檢定法和物理化學(xué)檢定法報導(dǎo)較少，免疫學(xué)檢測主 要有放射性免疫法(RIA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。RIA技術(shù)主要是通過使用放射性 元素1251標記的抗體來定量檢測血液等樣品中的相思子毒素，檢測靈敏度高，血漿中相思子 毒素最小可測濃度達50 100pg/mL。其缺點是存在放射污染問題。HPLC法用于蛋白質(zhì)鑒 定及檢測特異性較好，但由于需要昂貴的設(shè)備及較多的專業(yè)技術(shù)，通常多用于實驗室確證 分析，不適合大批量樣品的現(xiàn)場篩檢。ELISA法檢測相思子毒素靈敏性和特異性較高，可定 量分析，曾廣泛用于大批量樣品的現(xiàn)場篩檢。本發(fā)明的檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒，通 過檢測發(fā)光底物產(chǎn)生的光信號代替?zhèn)鹘y(tǒng)ELISA中的顯色底物，可明顯提高檢測靈敏度，同 時具有特異，快速，可靠的特點。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種檢測相思子毒素的化學(xué)發(fā)光試劑盒，具有特異性強、靈敏度高、 操作簡單方便等特點。本發(fā)明還提供了上述化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法，適用工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于以特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體包被發(fā)光板，以辣根過氧化物 酶標記的羊抗兔IgG為酶標抗體，以魯米諾為化學(xué)發(fā)光底物液。以濃度為0、5、10、20、40、 80ng/mL相思子毒素蛋白標準品一起裝備成本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光試劑盒。本發(fā)明檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法如下采用凝膠層析法從相思子中制備相思子毒素，用甲醛減毒處理制備類毒素，分別 免疫家兔和Balb/C小鼠制備多克隆抗體和單克隆抗體。以特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體包被發(fā)光板，以辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG為酶標抗體，以魯米諾 為化學(xué)發(fā)光底物液。以濃度為0、5、10、20、40、80ng/mL相思子毒素蛋白標準品一起裝備成 本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光試劑盒。主要包括以下步驟(1)采用5%冷醋酸液抽提，并用35% 95%硫酸銨分級沉淀制備相思子毒素粗 毒；再經(jīng)S印harose 6B親和層析，DEAE-Sepharose FF離子交換層析以及Superdex 75凝 膠過濾三步層析，制備相思子毒素；
(2)將從步驟(1)中制備得到的相思子毒素用甲醛減毒處理制備類毒素，用于 免疫Balb/C小鼠制備單克隆抗體；(3)采用Westerblot方法從步驟(2)中制備得到的單克隆抗體中篩選出特異性結(jié) 合相思子毒素A鏈的單克隆抗體；(4)用步驟(3)得到的單克隆抗體包被發(fā)光板，10%的羊血清封閉制備發(fā)光板；(5)將步驟(2)中制備得到的相思子毒素類毒素免疫家兔制備兔源抗相思子毒素 多克隆抗體；(6)配制化學(xué)發(fā)光底物液、酶標抗體、稀釋液、10倍濃縮洗滌液；(7)將特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體包被發(fā)光板；(8)以辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG為酶標抗體；(9)利用步驟(8)中包被好的化學(xué)發(fā)光板及步驟(9)中制備得到的酶標抗體，以魯 米諾為化學(xué)發(fā)光底物液，以濃度為0、5、10、20、40、80ng/mL相思子毒素蛋白標準品一起裝 備成本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光試劑盒。本發(fā)明涉及的上述相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒，其中相思子毒素的制備方法相思子去殼處理，去種仁200g，浸于1L 5%冷醋酸中，4°C過夜，高速勻漿處 理，10000g/min離心20min，上清用35 % 95 %硫酸銨分級沉淀，沉淀溶解于5mmol/L PB (pH8. 0)溶液中，用Sepharose 4B親和層析純化，純化產(chǎn)物過DEAE-Sepharose FF離子 交換柱，收集第一個洗脫峰即為相思子毒素，經(jīng)脫鹽處理后加入終濃度為0.01%硫柳汞鈉 鹽，-20°C保存。本發(fā)明涉及的上述相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒，其中兔源抗相思子毒素的多克隆 抗體制備方法相思子毒素經(jīng)甲醛減毒處理，分三次免疫家兔，首次免疫劑量為500 yg/只，加強 免疫于首次免疫2周后進行，劑量為300 u g/只，加強免疫每間隔2周進行一次，8周后用不 含佐劑的類毒素溶液經(jīng)耳靜脈注射作超強免疫免疫，劑量為800 yg/只，一周后心臟穿刺 采血，分離血清，血清經(jīng)50%硫酸銨鹽析沉淀法處理，5000g/min離心20min，棄上清，沉淀 用PBS(0. 02mol/L pH7. 0)重懸，即為粗提的多克隆抗體，粗提物用Hitrap rProteinA FF 或Hitrap rProtein G FF預(yù)裝柱制備高純度的抗體。本發(fā)明涉及的上述相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒，其中特異性結(jié)合相思子毒素A 鏈的鼠源單克隆抗體制備方法相思子毒素用甲醛減毒處理，對6 8周齡的Balb/ C小鼠免疫，通過細胞融合，ELISA篩選，克隆，并采用Westerblot法鑒定其特異性，取經(jīng) Westerblot鑒定為能分泌特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體的細胞株，采用體 外誘導(dǎo)法，將單克隆抗體細胞株擴大培養(yǎng)后注入6 8周齡Balb/C小鼠腹腔內(nèi)制備腹水，制備的腹水經(jīng)硫酸銨鹽析法粗提后，用Hitrap rProtein A FF凝膠親和層析柱進一步純 化，即得到高純度的單克隆抗體。本發(fā)明用特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體包被化學(xué)發(fā)光板，用兔源 抗相思子毒素多克隆抗體作為酶標抗體，以魯米諾為化學(xué)發(fā)光底物液，采用雙抗體夾心法 原理組裝化學(xué)發(fā)光試劑盒，用于檢測相思子毒素，既增強了其檢測靈敏度，也保留了其特異 性強的特點。本發(fā)明檢測相思子毒素的化學(xué)發(fā)光試劑盒的積極效果在于檢測特異性高、靈敏 度高、穩(wěn)定性好、方便、快捷，結(jié)合化學(xué)發(fā)光測量儀就能快速定量檢測相思子毒。具有操作簡 單、檢測快速、結(jié)果易于判斷和方便保存，適合于臨床和突發(fā)事件的檢測。尤其適合于臨床 和突發(fā)事件的現(xiàn)場檢測，適合流行病學(xué)調(diào)查大規(guī)模應(yīng)用。
圖1為相思子毒素單克隆抗體Westerblot鑒定結(jié)果圖。其中第1泳道為低分子量Marker ；第2、3泳道為完整的相思子毒素Westerblot檢 測顯色結(jié)果；第4、5泳道為相思子毒素經(jīng)巰基乙醇處理后，相思子毒素A鏈Westerblot 檢測顯色結(jié)果。
具體實施例方式下列實施例旨在進一步舉例說明，而不是限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解 到，在不背離本發(fā)明的精神和原則的前提下，對本發(fā)明的任何平行改變和改動都將落入本 發(fā)明的待批權(quán)利要求范圍內(nèi)。實施例1相思子毒素抗體制備及鑒定1、相思子毒素的制備采用5%醋酸抽提粗毒，經(jīng)高速離心(10，000g，20min)后棄沉淀物，上清液用 35% 95%飽和硫酸銨分級沉淀，將沉淀物用PBS充分透析72h，所得毒素粗提物采用 S印harose6B或S印harose 4B瓊脂糖親和層析柱、DEAE-S印harose FF陰離子交換柱及 Hiload26/60Superdex75凝膠過濾層析預(yù)裝柱進一步分離，結(jié)果采用SDS-PAGE電泳法分析 分子量，凝膠薄層掃描測定純度，N末端氨基酸序列測定及質(zhì)譜肽指紋圖譜分析鑒定，結(jié)果 表明制備得到高純的相思子毒素。2、特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體的制備相思子毒素經(jīng)1 %甲醛磷酸鹽緩沖液減毒處理24h后，免疫Balb/C小鼠制備單 克隆抗體。免疫免疫程序為首次免疫每只取100 iiL抗原(50iig)與100iiL完全費氏 佐劑混勻，皮下多點注射。加強免疫于首免后2周進行，每只取100 yL抗原(30i!g)與 等量不完全費氏佐劑混勻后，腹腔注射。此后每2周免疫一次，共免四次，最后一次免疫后 7天斷尾采血分離血清，以2i!g/mL原毒(未經(jīng)醛化減毒處理)包被酶標板，用間接ELISA 法檢測抗相思子毒素血清抗體效價。若效價高于1X10—4即可用于細胞融合。超強免疫 于細胞融合前3 4d尾靜脈各注射無佐劑抗原50 u g，200 u L/只。采用小鼠雜交瘤細胞 技術(shù)制備抗相思子毒素的單克隆抗體雜交瘤細胞株，采用體內(nèi)誘導(dǎo)法，分別將雜交瘤細胞接種于Balb/c小鼠制備了腹水；用小鼠mAb亞類鑒定試劑盒檢測mAb的亞類，腹水經(jīng)硫酸銨鹽析法粗提后，采用Hitrap rProtein A FF親和層析柱或Hitrap rProtein GFF親 和層析柱純化，SDS-PAGE凝膠電泳鑒定純度，BCA法測定其濃度；間接ELISA法檢測腹水 效價為1 3. 2X105，且與相思子凝集素、蓖麻毒素及蓖麻凝集素三種類似物均無交叉反 應(yīng)；采用Westerblot法鑒定其特異性，結(jié)果表明所制備得到的單克隆抗體可特異性結(jié)合相 思子毒素A鏈，與相思子凝集素、蓖麻毒素和蓖麻凝集素等均無交叉反應(yīng)，表明該單克隆抗 體特異性高。見圖1 圖中，第1泳道，低分子量Marker ；第2、3泳道，完整的相思子毒素 Westerblot檢測顯色結(jié)果；第4、5泳道，相思子毒素經(jīng)β -巰基乙醇處理后，相思子毒素A 鏈Westerblot檢測顯色結(jié)果。3、兔源抗相思子毒素多克隆抗體的制備相思子毒素經(jīng)甲醛減毒處理，制備得相思子毒素類毒素。用此類毒素經(jīng)皮下及肌 肉注射免疫家兔，首次免疫劑量為500 μ g/只，取等體積完全弗氏佐劑與類毒素溶液混合 并完全乳化后經(jīng)皮下注射免疫，強化免疫于首次注射2周后進行，免疫間隔時間為兩周，劑 量為300μ g/只，取等體積不完全弗氏佐劑與類毒素溶液混合并充分乳化后經(jīng)皮下或肌肉 注射免疫，免疫8周后，用不含佐劑的類毒素溶液經(jīng)耳靜脈注射作超強免疫，最后一次免疫 1周后經(jīng)心臟采血制備抗血清。血清經(jīng)50%硫酸銨沉淀法處理，5000g/min離心20min，棄上 清，沉淀用PBS (0. 02mol/LpH7. 0)重懸，即為粗提的多克隆抗體，粗提物用Hitrap rProtein A FF或Hitrap rProtein G FF凝膠親和層析制備高純度的抗體。兔源抗相思子毒素多克 隆抗體采用瓊脂免疫擴散試驗及ELISA法進行鑒定，結(jié)果表明與相思子凝集素、蓖麻毒素 和蓖麻凝集素均無交叉反應(yīng)。實施例2化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備1、利用單克隆抗體及兔抗相思子毒素多克隆抗體濃度梯度試驗，最終確定單克隆 抗體最佳工作濃度為4 μ g/mL，兔抗相思子毒素抗體最佳工作濃度為2. 15μ g/mL。2、發(fā)光板制備，將純化的單克隆抗體用包被液液稀釋到4 μ g/mL包被發(fā)光板，并 用10%羊血清封閉。3、標準品的制備，分別將相思子毒素稀釋到O、5、10、20、40、80ng/mL。4、兔抗相思子毒素抗體的制備，取純化兔抗相思子毒素抗體(20mg/mL)用稀釋液 (0. 5% BSA-PBST)稀釋到 2. 15 μ g/mL。5、酶標抗體為辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG購自Sigma公司，臨用前用去離 子水1 3000稀釋。6、化學(xué)發(fā)光底物液、酶標抗體、稀釋液、10倍濃縮洗滌液的制備(1)稀釋液pH7· 4PBSKH2PO40. 2gNa2HPO4. 12H20 2. 9gNaCl8. OgKCl0. 2gBSA(牛血清白蛋白)0· 5g(2) 10倍濃縮洗滌液
KH2PO40. 2gNa2HPO4. 12H20 2. 9gNaCl8. OgKCl0. 2g去離子水溶解并定容值lOOmL，調(diào)節(jié)pH為7. 4，加入ImLTween-20(3)化學(xué)發(fā)光底物A液魯米諾8. 858g對碘苯酚 0. 66gTris12. 114g去離子水定容至1L，用濃鹽酸調(diào)pH至8. 5化學(xué)發(fā)光底物B液30 %的H2O2購自Sigma公司，使用時A液與B液按體積比 100 1混合。實施例3檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒的測試1、樣品處理檢測液體乳樣制品視樣品濃度及粘稠度用稀釋液適當稀釋，所得溶液即可作為 檢測液。檢測血液樣品1體積血液樣品加入1體積的稀釋液，混勻靜止10分鐘，離心處理 后取上清即可作為檢測液。檢測食物樣品將食物做粉碎處理后加入適當量的稀釋液混勻，室溫下靜止 30min,離心處理后取上清即可作為檢測液。2、樣品檢測本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光試劑盒檢測相思子毒素的方法取單克隆抗體包被的發(fā)光板， 反應(yīng)孔中分別加入各濃度的標準品0、5、10、20、40、80ng/mL和待測樣品每孔50μ L，37°C保 溫45min，洗滌3次，4min/次，在吸水紙上拍干。反應(yīng)孔中加入純化的兔抗相思子毒素抗體 100 μ L/孔，37°C保溫45min，洗滌3次，4min/次，在吸水紙上拍干。將酶標抗體用稀釋液稀 釋5000倍，加入反應(yīng)孔內(nèi)，100 μ L/孔，37°C保溫45min，洗滌3次，4min/次，在吸水紙上拍 干。每孔加入發(fā)光底物液100yL，37°C避光反應(yīng)5-lOmin。在化學(xué)發(fā)光測量儀上依次測量 各孔的發(fā)光強度(RLU)，檢測時間1秒/孔。通過標準品的濃度和對應(yīng)的RLU值建立標準曲 線，通過曲線方程確定待測樣品中相思子毒素的濃度。實施例4相思子毒素免疫層析試紙性能的測定及實踐1、檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒特異性的測定應(yīng)用制備的檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒檢測與相思子毒素分子結(jié)構(gòu)的性質(zhì) 較近的相思子凝集素、蓖麻毒素、蓖麻凝集素時，結(jié)果均為陰性，表明與它們之間沒有交叉 反應(yīng)，試紙條特異性良好。2、檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒敏感性用本發(fā)明檢測相思子毒素，最小檢出量為0. Ing/mL,相思子毒素濃度在 0. l-80ng/mL范圍內(nèi)濃度對數(shù)值與測量的發(fā)光強度(RLU)對數(shù)值成直線相關(guān)性。
3、檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒穩(wěn)定性(1)同一批次的化學(xué)發(fā)光試劑盒于37°C破壞試驗期間，每天都進行化學(xué)發(fā)光試劑盒的檢測，在第6天時試紙條顏色的強度有所降低。說明試紙條在37°C可保存6天。(2)化學(xué)發(fā)光試劑盒于4°C保存10個月期間，每周測定的結(jié)果標準品的發(fā)光強度 值穩(wěn)定；說明試劑盒在4°C可保存10個月，第11個月后靈敏度有所下降。(3)同一批次的化學(xué)發(fā)光試劑盒于-20°C保存13個月期間，分別每半個月一檢測， 在第11個月時顏色強度有所降低；說明化學(xué)發(fā)光試劑盒在-20°C可保存11個月，第11個 月后靈敏度有所下降。5、檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒人工模擬樣本檢測(1)對人工模擬香腸毒素樣品檢測結(jié)果顯示當毒素樣品濃度大于Ing/mL時，檢出 率為100%。(2)對人工模擬牛奶毒素樣品檢測用ELISA試驗和制備的化學(xué)發(fā)光試劑盒進行鑒 別試驗，結(jié)果顯示當毒素樣品濃度大于Ing/mL時，兩種檢測方法的符合率為100%。
權(quán)利要求
一種檢測相思子毒素的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于以特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體包被發(fā)光板，以辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG為酶標抗體，以魯米諾為化學(xué)發(fā)光底物液；以濃度為0、5、10、20、40、80ng/mL相思子毒素蛋白標準品一起裝備成試劑盒。
2.權(quán)利要求1所述檢測相思子毒素化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法，包括以下步驟采用凝膠層析法從相思子中制備相思子毒素，用甲醛減毒處理制備類毒素，分別免疫 家兔和Balb/C小鼠制備多克隆抗體和單克隆抗體；以特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單 克隆抗體包被發(fā)光板，以辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG為酶標抗體，以魯米諾為化學(xué) 發(fā)光底物液；以濃度為0、5、10、20、40、80ng/mL相思子毒素蛋白標準品一起裝備成試劑盒。
3.權(quán)利要求2所述的制備方法，主要包括以下步驟(1)采用5%冷醋酸液抽提，并用35% 95%硫酸銨分級沉淀制備相思子毒素粗毒；再 經(jīng)S印harose 6B親和層析，DEAE-S印harose FF離子交換層析以及Superdex 75凝膠過濾 三步層析，制備相思子毒素；(2)將從步驟(1)中制備得到的相思子毒素用甲醛減毒處理制備類毒素，用于免疫 Balb/C小鼠制備單克隆抗體；(3)采用Westerblot方法從步驟(2)中制備得到的單克隆抗體中篩選出特異性結(jié)合相 思子毒素A鏈的單克隆抗體；(4)用步驟(3)得到的單克隆抗體包被發(fā)光板，10%的羊血清封閉制備發(fā)光板；(5)將步驟(2)中制備得到的相思子毒素類毒素免疫家兔制備兔源抗相思子毒素多克 隆抗體；(6)配制化學(xué)發(fā)光底物液、酶標抗體、稀釋液、10倍濃縮洗滌液；(7)將特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體包被發(fā)光板；(8)以辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG為酶標抗體；(9)利用步驟⑶中包被好的化學(xué)發(fā)光板及步驟(9)中制備得到的酶標抗體，以魯米諾 為化學(xué)發(fā)光底物液，以濃度為0、5、10、20、40、80ng/mL相思子毒素蛋白標準品一起裝備成試齊U盒。
4.權(quán)利要求2或3所述的制備方法，其特征在于相思子毒素的制備步驟如下相思子去殼處理，去種仁200g，浸于115%冷醋酸中，4°C過夜，高速勻漿處理，10000g/ min離心20min，上清用35% 95%硫酸銨分級沉淀，沉淀溶解于5mmol/LPB (pH8. 0)溶液 中，用S印harose 4B親和層析純化，純化產(chǎn)物過DEAE-S印harose FF離子交換柱，收集第一 個洗脫峰即為相思子毒素，經(jīng)脫鹽處理后加入終濃度為0. 01%硫柳汞鈉鹽，-20°C保存。
5.權(quán)利要求2或3所述的制備方法，其特征在于兔源抗相思子毒素的多克隆抗體制備 方法相思子毒素經(jīng)甲醛減毒處理，分三次免疫家兔，首次免疫劑量為500 u g/只，加強免疫 于首次免疫2周后進行，劑量為300 y g/只，加強免疫每間隔2周進行一次，8周后用不含 佐劑的類毒素溶液經(jīng)耳靜脈注射作超強免疫免疫，劑量為800 u g/只，一周后心臟穿刺采 血，分離血清，血清經(jīng)50%硫酸銨鹽析沉淀法處理，5000g/min離心20min，棄上清，沉淀用 PBS(0. 02mol/L pH7. 0)重懸，即為粗提的多克隆抗體，粗提物用HitraprProtein A FF或 Hi trap rProtein G FF預(yù)裝柱制備高純度的抗體。
6.權(quán)利要求2或3所述的制備方法，其特征在于特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單 克隆抗體制備方法如下相思子毒素用甲醛減毒處理，對6 8周齡的Balb/C小鼠免疫，通過細胞融合， ELISA篩選，克隆，并采用Westerblot法鑒定其特異性，取經(jīng)Westerblot鑒定為能分泌特異 性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體的細胞株，采用體外誘導(dǎo)法，將單克隆抗體細胞 株擴大培養(yǎng)后注入6 8周齡Balb/C小鼠腹腔內(nèi)制備腹水，制備的腹水經(jīng)硫酸銨鹽析法粗 提后，用Hitrap rProtein A FF凝膠親和層析柱進一步純化，即得單克隆抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測相思子毒素的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法，以特異性結(jié)合相思子毒素A鏈的鼠源單克隆抗體包被發(fā)光板，以辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG為酶標抗體，以魯米諾為化學(xué)發(fā)光底物液，以濃度為0、5、10、20、40、80ng/mL相思子毒素蛋白標準品一起裝備成本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光試劑盒。本發(fā)明化學(xué)發(fā)光試劑盒適合于臨床和突發(fā)事件中大量樣品的定量檢測，適合流行病學(xué)調(diào)查，具有操作簡單，靈敏度高、穩(wěn)定性好、方便、快捷等特點，對相思子毒素中毒的鑒別診斷和及時救治具有重要意義和實際應(yīng)用價值。
文檔編號G01N33/543GK101819203SQ201010132580
公開日2010年9月1日 申請日期2010年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者劉國文, 劉磊, 唐佳佳, 孔濤, 孫佳, 張志剛, 張燚, 李小兵, 楊威, 王哲 申請人:吉林大學(xué)