一種甜葉懸鉤子水溶性多糖用于保護肝臟及激活乙醛脫氫酶的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] -種從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖用于保護肝臟及激活 乙醛脫氫酶的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 乙酸脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH) (EC1. 2. 1. 10) (CAS[9028-91-5])，作為醛脫氫酶的一種，負(fù)責(zé)催化乙醛氧化為乙酸的反應(yīng)。在酒精代謝 中起主要作用，廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。哺乳動物乙醛脫氫酶根據(jù)其亞 細(xì)胞定位、結(jié)構(gòu)及動力學(xué)特性和原始序列的相似性可以分為三類：第一類存在于細(xì)胞質(zhì)中 (ALDH1)，第二類存在于線粒體中（ALDH2)，第三類則是可誘導(dǎo)性的細(xì)胞質(zhì)的乙醛脫氫酶和 可誘導(dǎo)性的微粒體的乙醛脫氫酶（如ALDH3)。乙醛脫氫酶2(ALDH2)是存在于線粒體內(nèi)的 廣泛參與體內(nèi)醛類物質(zhì)氧化的一種醛類氧化酶，ALDH2基因位于第12號染色體，它的主要 多態(tài)性位于外顯子12的G1510A，正常的等位基因記為ALDH2*1，單堿基突變的等位基因記 為ALDH2*2。突變基因表達的酶中，殘基487的谷氨酸變?yōu)橘嚢彼?，造成酶的催化活性基?喪失。有ALDH2*2突變表達出的酶無法正常代謝乙醇的氧化產(chǎn)物乙醛，血液乙醛濃度增高， 造成一系列飲酒后的不良反應(yīng)，如臉紅、頭暈、心跳加快等。而純合子的ALDH22*2活性近 乎為零。由于ALDH2*2攜帶者對乙醛代謝較差，有認(rèn)為乙醛對肝臟的損傷是酒精肝在亞洲 人群中常見的原因。有研究表明，ALDH2突變型患者阿爾茨海默病的發(fā)病率更高，ALDH2的 失活導(dǎo)致乙醛的蓄積與乙醇性多發(fā)性神經(jīng)病變有關(guān)，ALDH2可減輕神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損 傷，對神經(jīng)保護具有重要的意義，激活A(yù)LDH2將為神經(jīng)退行性變疾病的治療提供靶點。同時 又研究提出，ALDH2基因參與了冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。–HD)的發(fā)生發(fā)展過程，在缺氧 心肌中ALDH2基因下調(diào)，ALDH2對氧化刺激導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞損傷有明顯的拮抗作 用，而ALDH2基因G487A多態(tài)性有可能成為老年CHD發(fā)生的獨立危險因素。
[0003] 酒精性肝病是由于長期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病。初期通常表現(xiàn)為脂肪肝，進而 可發(fā)展成酒精性肝炎、肝纖維化和肝硬化。其主要臨床特征是惡心、嘔吐、黃疸、可有肝臟腫 大和壓痛。并可并發(fā)肝功能衰竭和上消化道出血等。嚴(yán)重酗酒時可誘發(fā)廣泛肝細(xì)胞壞死， 甚至肝功能衰竭。酒精性肝病是我國常見的肝臟疾病之一，嚴(yán)重危害人民健康。
[0004] 酒精性肝病主要是乙醇及其代謝產(chǎn)物乙醛直接或間接誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，氧化應(yīng) 激、腸源性內(nèi)毒素、炎性介質(zhì)和營養(yǎng)失衡（尤其是蛋白質(zhì)-熱量營養(yǎng)不良）等多種因素相互 作用的結(jié)果。另外，"二次打擊"學(xué)說認(rèn)為，酒精因素作為初次打擊，通過氧化應(yīng)激促使反應(yīng) 性氧化物增加，而誘發(fā)肝臟脂肪聚集。在氧化應(yīng)激相關(guān)的脂質(zhì)過氧化及炎性細(xì)胞因子的作 用下，使脂肪變的肝細(xì)胞發(fā)生第二次打擊，造成炎癥、壞死和纖維化。乙醛是肝細(xì)胞內(nèi)乙醇 代謝的主要產(chǎn)物，其藥理毒性比乙醇更為劇烈。乙醛可通過多種途徑作用于肝組織，首先， 乙醛可直接作用于肝組織，對肝臟產(chǎn)生毒性作用。其次，乙醛還可損傷大多數(shù)肝細(xì)胞的線粒 體和微管，進而引起脂肪酸氧化和肝細(xì)胞分泌功能障礙，導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)脂肪酸蓄積和分泌 性蛋白貯留。大量研究已經(jīng)顯示乙醛在活體生理狀態(tài)下能與多種蛋白發(fā)生共價結(jié)合，形成 穩(wěn)定的和不穩(wěn)定的乙醛蛋白加和物（APA)。其形成不但改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，而且造成了 蛋白質(zhì)功能異常，如蛋白酶失活、DNA修復(fù)蛋白功能障礙、谷胱甘肽耗竭、線粒體損傷、氧利 用障礙和膠原蛋白合成增加。而且可作為抗原誘生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)抗體，引起肝細(xì)胞炎 癥、壞死及纖維組織增生。
[0005] 甜葉懸鉤子是薔薇科懸鉤子屬的一個變種，屬于多年生有刺灌木，主要生長于我 國廣西省的山區(qū)，由于其葉味道甘甜，口感獨特，故又稱廣西甜茶，是廣西特有的無毒、低熱 量、高甜度的野外珍稀天然植物。在民間有悠久的應(yīng)用歷史，長期以來當(dāng)?shù)匕傩找恢币云淙~ 當(dāng)茶飲用，也用來代糖加工食品。根據(jù)廣西中藥藥物標(biāo)準(zhǔn)記載，甜葉懸鉤子具有清熱降火、 潤肺生津、止咳祛痰的功效。其食用性以及藥用性早已為當(dāng)?shù)孛耖g醫(yī)藥所證實。但是直至 上世紀(jì)80年代的全國藥物調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，雖然懸鉤子植物在我國各地均有分布，但都不具備 廣西甜葉懸鉤子這種甜味，因此該植物被植物學(xué)家李樹剛確定為懸鉤子的變種，與其它懸 鉤子區(qū)分來。自上世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)該物種以來，我國逐步展開了對甜葉懸鉤子的研究，在 其食用和藥用等方面獲得了一定的進展。研究表明，甜葉懸鉤子葉片中含有豐富的必需氨 基酸、黃酮苷、甜葉懸鉤子苷、多酚、維生素以及人體所必需的多種微量元素；甜葉懸鉤子粗 提物具有降糖、降脂、抗炎、抗過敏、改善皮膚瘙癢等多種藥理活性。
[0006] 多糖是一類具有廣泛生物活性的天然大分子化合物，廣泛分布于自然界高等植 物、藻類、微生物（細(xì)菌和真菌）及動物體內(nèi)。多糖類物質(zhì)是除蛋白質(zhì)和核酸之外的又一類 重要的生物大分子，是很多植物藥發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，植物多糖具有復(fù)雜的、多方面的生 物活性和功能，如免疫調(diào)節(jié)功能、抗感染、抗輻射、抗凝血、降血糖、降血脂、促進核酸與蛋白 質(zhì)的生物合成以及抗衰老等作用。如甘草多糖具有明顯的抗病毒和抗腫瘤作用；黑木耳多 糖、銀杏外種皮多糖和蘆薈多糖可抗腫瘤和增強人體免疫功能；柴胡多糖具有抗輻射、增強 免疫功能等生物學(xué)作用；麥冬多糖具有降血糖及免疫增強作用；爬山虎多糖具有抗病毒和 抗衰老作用；石斛多糖、牡蠣多糖、玉郎傘多糖等植物多糖具有保護急性酒精性肝損傷的作 用，且石斛多糖、玉郎傘多糖可增加肝組織ALDH活性，加速乙醛代謝。目前已有部分天然多 糖類化合物用于臨床，顯示出良好的療效，已然成為天然藥物及保健品研發(fā)中的重要部分。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多 糖用于保護肝臟及激活乙醛脫氫酶。
[0008] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0009] 1.從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖
[0010] 將甜葉懸鉤子干葉粉碎后，用體積百分?jǐn)?shù)為80% -85%的乙醇水溶液在60-80°C 浸泡80-100min，抽濾，棄濾液，茶渣用去離子水在50-70°C保溫浸取兩次，每次90-150min， 冷卻后抽濾，合并兩次濾液，加入相當(dāng)于濃縮物三倍體積的無水乙醇，4°C靜置過夜沉淀，離 心分離，得到沉淀物a，稱重，用丙酮、乙醚、乙醇交替洗滌3次，加去離子水溶解，加入相當(dāng) 于沉淀物a質(zhì)量的2% -3%的三氯乙酸，于4°C靜置90-150min，離心分離，取上清濾液置于 蒸餾水中透析20-30h，每隔8h換一次透析液，透析后的溶液冷凍干燥，即得到甜葉懸鉤子 水溶性多糖。
[0011] 2.從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖的結(jié)構(gòu)特征的檢測
[0012] (1)總糖含量、糖醛酸含量、蛋白質(zhì)含量
[0013] 采用苯酚-硫酸法測定薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、草酸鹽 溶果膠類多糖、堿溶性多糖的總糖含量，采用間羥基聯(lián)苯比色法測定其糖醛酸含量，采用考 馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)含量，其結(jié)果見實施例表1。
[0014] (2)單糖組成
[0015] 采用氣相色譜測定薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、 草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖單糖組成，結(jié)果顯示，甜葉懸鉤子提取水溶性 多糖主要由核糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖5種單糖組成，其摩爾比為 0.146 : 0.403 : 17.745 : 1.436 : 0.382。
[0016] (3)紅外光譜
[0017] 甜葉懸鉤子提取水溶性多糖中較