一種從厚樸中提取、分離純化和厚樸酚及厚樸酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及和厚樸酚及厚樸酚提取技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種從厚樸中提取、分離純 化和厚樸酚及厚樸酚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 厚樸為木蘭科木蘭屬植物厚樸Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的干皮、根 皮或枝皮，性溫，味苦、辛，有燥濕消痰、下氣除滿的功效，用于治療濕滯傷中、脫痞吐瀉、腹 脹便秘、痰飲喘咳等癥。藥理研究表明厚樸具有抗真菌、抗病毒、抗過(guò)敏、抗?jié)儭⒖棺儜B(tài)、抗 癌、抑制血小板凝集、降壓、保肝、影響胃腸活動(dòng)等作用，其主要活性成分為木質(zhì)素類成分， 其中，和厚樸酚及其異構(gòu)體厚樸酚占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，二者也是厚樸及相關(guān)制劑質(zhì)量控制的主要 指標(biāo)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，分離純化厚樸木質(zhì)素的方法主要有反復(fù)硅膠柱層析法及高速逆流色譜 法，硅膠柱層析法的操作過(guò)程繁瑣，回收率較低，經(jīng)常使用氯仿、苯等毒性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑； 在高速逆流色譜法中溶劑系統(tǒng)的選擇比較困難，缺乏理論指導(dǎo)。因此，建立一種高效快速的 提取、分離純化厚樸木質(zhì)素的方法對(duì)于深化厚樸的藥理作用研究及完善質(zhì)量控制體系均具 有重要的意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種從厚樸中提取、分離純化和厚樸 酚及厚樸酚的方法，高效、快速、簡(jiǎn)便的從厚樸中提取、分離純化和厚樸酚及厚樸酚。
[0004] 本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種從厚樸中提取、分離純化和厚樸酚及厚樸 酚的方法，其特征在于：包括如下步驟：
[0005] (1)厚樸木質(zhì)素的提?。簩⒑駱闼幉姆鬯?，用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，過(guò)濾，提取液經(jīng) 減壓濃縮得粗提物，有機(jī)溶劑的用量為補(bǔ)骨脂藥材的6-12倍；
[0006] (2)厚樸木質(zhì)素的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對(duì)步驟（1)中的粗提物的 組成進(jìn)行分離分析，流動(dòng)相為甲醇-水，流速為1.0 mL/min ;
[0007] (3)厚樸木質(zhì)素的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對(duì)粗提物中的成分進(jìn)行 分離純化，流動(dòng)相為甲醇與水，流速為20-30mL/min，然后根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集目標(biāo)組分餾 分，減壓濃縮除去溶劑；
[0008] (4)化合物的純度檢測(cè)及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個(gè)目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶 解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，分析結(jié)果表明2種化合物的純度都達(dá)到了 98%以 上經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是和厚樸酚及厚樸酚。
[0009] 進(jìn)一步是：步驟⑵中的分析型高效液相色譜儀中的色譜柱采用參數(shù)為 250 X 4. 6mm I. D.，5 μ m的C18柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為室溫。
[0010] 步驟（3)中的半制備型高效液相色譜儀中的色譜柱采用參數(shù)為250X4. 6mm I. D.，10 μ m的C18柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為室溫。
[0011] 步驟（1)中有機(jī)溶劑為甲醇或乙醇或石油醚或乙酸乙酯；提取方法為冷浸或超聲 或加熱回流，提取次數(shù)為2-5次，提取時(shí)間為15-60分鐘。
[0012] 更進(jìn)一步是：步驟（1)中有機(jī)溶劑為乙醇，提取方法為超聲。
[0013] 乙醇的濃度為50 %~95%。
[0014] 乙醇的濃度為80%。
[0015] 有機(jī)溶劑的用量為補(bǔ)骨脂藥材的10倍，提取次數(shù)為3次，提取時(shí)間為45分鐘。
[0016] 步驟（2)分離分析用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式有76%甲醇-水等度洗 脫或73%甲醇-水等度洗脫或70%甲醇-水等度洗脫。
[0017] 步驟（3)分離純化用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫或 80 %甲醇-水等度洗脫或75 %甲醇-水等度洗脫或70 %甲醇-水等度洗脫。
[0018] 本發(fā)明的有益效果是：高效、快速、簡(jiǎn)便的從厚樸中提取、分離純化和厚樸酚及厚 樸酚；該工藝過(guò)程綠色環(huán)保，對(duì)環(huán)境無(wú)嚴(yán)重危害，綜合成本低。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1是厚樸粗提物的分析型高效液相色譜圖；
[0020] 圖2是厚樸粗提物的半制備型高效液相色譜圖；
[0021] 圖3是和厚樸酚的高效液相色譜圖及紫外光譜圖；
[0022] 圖4是厚樸酚的高效液相色譜圖及紫外光譜圖；
[0023] 圖中：1為和厚樸酚；II為厚樸酚。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實(shí) 施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場(chǎng)獲得。所用試劑均購(gòu)自天津市化學(xué)試劑三廠，所用水為 去咼子水。
[0025] 實(shí)施例：從厚樸中提取、分離純化和厚樸酚及厚樸酚的方法，其步驟為：
[0026] (1)厚樸木質(zhì)素的提取：將厚樸藥材粉碎，用10倍量80%乙醇超聲提取3次，每次 45分鐘，過(guò)濾，將提取液合并，減壓濃縮得粗提物。
[0027] (2)厚樸木質(zhì)素的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對(duì)粗提物的組成進(jìn)行分離 分析，色譜柱為C18柱（250X4. 6mm I. D.，5 μπι)，流動(dòng)相為甲醇-水（73 :27, V/V);流速為 1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為室溫。
[0028] (3)厚樸木質(zhì)素的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對(duì)粗提物中的成分進(jìn)行 分離純化，色譜柱為C18柱（250X25. 4mm I. D.，10 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水（75 :25, V/V)， 流速為25. OmL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為室溫。根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集目標(biāo)組分餾分， 減壓濃縮除去溶劑。
[0029] (4)化合物的純度檢測(cè)及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個(gè)目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶 解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件見(jiàn)步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的 純度都達(dá)到了 98%以上。經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是和厚樸酚及厚樸酚。 [0030] 發(fā)明人通過(guò)使用不同濃度的甲醇作流動(dòng)相，采用不同的洗脫方式，控制甲醇-水 洗脫液的流速為20-30mL/min (優(yōu)選25mL/min)，優(yōu)選出了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有 關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
[0031] 表一厚樸粗提物的半制備型高效液相色譜分離條件
[0032]
[0033] 在實(shí)施例1中，洗脫液中甲醇的濃度較高，洗脫時(shí)間較短，厚樸酚與其附近雜質(zhì)之 間的分離效果不夠理想，所得厚樸酚的純度較低。實(shí)施例2中，洗脫液中甲醇的濃度適中， 厚樸酚與其附近雜質(zhì)之間分離效果良好，分離時(shí)間也較為適宜。實(shí)施例3中，洗脫液中甲醇 的濃度較低，厚樸酚與其附近雜質(zhì)之間的分離效果良好，但分離時(shí)間太長(zhǎng)。實(shí)施例4采用甲 醇-水梯度洗脫，也可以在合適的時(shí)間內(nèi)獲得良好的分離效果，但由于洗脫液的濃度不斷 發(fā)生變化導(dǎo)致難以實(shí)現(xiàn)回收再利用。
[0034] 圖2是當(dāng)選用實(shí)施例2體系時(shí)厚樸粗提物的半制備型高效液相色譜圖，由圖可見(jiàn)， 各成分分離良好，分離時(shí)間也較為適宜。根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集各峰組分，回收溶劑后，即可 得到相應(yīng)的高純度化合物。經(jīng)高效液相色譜峰面積歸一化法分析測(cè)試，純度高于98 %，這一 點(diǎn)可從圖3至圖4中看出。
[0035] 經(jīng)核磁共振波譜分析證實(shí)所提取純化得到的2個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0036]
[0037] 2個(gè)化合物的鑒定結(jié)果如下：
[0038] 和厚樸酚,H-NMRGOOMHz，CDCl3) : δ ppm:7. 2 ~7. 3(2H，m，2, 6-H)，7. 1(1H，dd，J =8.0,2.2Hz，4'-H)，7.0(lH，d，J = 2·2Ηζ，6'-Η)，6·9 ~7.0(2H，m，5,3'-H)，5.9 ~ 6. I (2H, m, 8, 8' -Η)，5· 2 ~5· 3 (2H, m, 9-H)，5· 0 ~5· 2 (2H, m,