血液吸附用細(xì)菌纖維素的制備方法與流程

本發(fā)明屬于醫(yī)用材料，主要用于尿毒癥血液凈化的血液吸附材料，具體涉及一種血液吸附材料的細(xì)菌纖維素的制備方法。

背景技術(shù)：

尿毒癥嚴(yán)重威脅著人們的生命健康，目前，治療末期尿毒癥主要采取腎移植和血液凈化方法。由于全球腎源不足或患者自身原因，腎移植只能在特殊情況下得以應(yīng)用，全球每年100萬(wàn)以上患者將依賴血液透析、血液吸附等血液凈化來維持生命。血液透析是尿毒癥最常用的替代治療方法，對(duì)清除小分子水溶性毒素十分有效，而對(duì)中分子毒素清除效果不佳。因此研制高效的中分子物質(zhì)吸附劑，通過血液灌流方式將尿毒癥患者體內(nèi)滯留的中分子毒物清除，可有效地控制和治療尿毒癥。提高患者生存質(zhì)量，無疑具有重要的意義。

多糖類吸附材料近年來顯示了較快的發(fā)展勢(shì)頭。由醋酸桿菌屬細(xì)菌合成的纖維素可產(chǎn)生大量的膜表面，纖維單元之間的氫鍵賦予它很大的機(jī)械強(qiáng)度，純度高，細(xì)菌纖維素表面具多孔性。培養(yǎng)基采用不同的單糖或多糖作為碳源，通過調(diào)節(jié)木醋桿菌的糖代謝途徑，達(dá)到產(chǎn)物孔徑、結(jié)構(gòu)的控制合成，一方面滿足中分子毒素吸附材料的孔徑要求（4-10nm）和增強(qiáng)了吸附作用，同時(shí)又改善了細(xì)菌纖維素的血液相容性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在尋求一種血液吸附用細(xì)菌纖維素可控生物合成的技術(shù)方法。為尿毒癥血液凈化提供新型的吸附材料，緩解尿毒癥患者的痛苦，延長(zhǎng)生命，提高生存質(zhì)量。

本發(fā)明提供相容性良好，制作工藝簡(jiǎn)單，成本低廉的一種血液吸附用細(xì)菌纖維素的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案：血液吸附用細(xì)菌纖維素的制備方法，其特征在于：將振蕩培養(yǎng)24h的木醋桿菌種子液按質(zhì)量百分比是6%的比例接種于改良的SH的培養(yǎng)基中，在30℃下靜置培養(yǎng)7天，得到細(xì)菌纖維素濕膜；將細(xì)菌纖維素濕膜經(jīng)流水沖洗過后使用蒸餾水漂洗，然后采用1%氫氧化鈉溶液煮沸4小時(shí)，再用流水沖洗后于室溫下在0.5%乙酸中浸泡半小時(shí)，用蒸餾水沖洗干凈，烘干。

所述改良的SH培養(yǎng)基的制備方法是：將蒸餾水1L，糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氫二鈉7.5~10 g，檸檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0混合均勻成為改良的SH培養(yǎng)基。

所述木醋桿菌種子液的制備方法是：將木醋桿菌單菌落接種于改良的SH培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)24h成為木醋桿菌種子液。

所述細(xì)菌纖維素是通過調(diào)節(jié)木醋桿菌培養(yǎng)體系中糖的劑量和比例來控制細(xì)菌纖維素孔徑及理化性質(zhì)。

所述糖為葡萄糖或單糖或多糖或幾種不同的碳源物質(zhì)按比例合成的物質(zhì)。

所述單糖包括葡萄糖。

所述多糖包括氨基葡萄糖。

上述細(xì)菌纖維素膜，其作為醫(yī)用血液凈化材料清除血液里的毒素應(yīng)用。

本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單易行，成本低廉；本發(fā)明制備的血液吸附用細(xì)菌纖維素血液相容性好。本發(fā)明制備的血液吸附用細(xì)菌纖維素應(yīng)用前景廣闊，既能達(dá)到治療目的，又能減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

附圖說明

圖1為以葡萄糖為碳源生物合成的細(xì)菌纖維素紅外光譜圖；

圖2為以葡萄糖和氨基葡萄糖為碳源生物合成的細(xì)菌纖維素紅外光譜圖；圖3為以氨基葡萄糖為碳源生物合成的細(xì)菌纖維素紅外光譜圖（與具體實(shí)施例相對(duì)應(yīng)）；

圖4為以葡萄糖為碳源生物合成的細(xì)菌纖維素掃描電鏡圖；

圖5為以葡萄糖和氨基葡萄糖為碳源生物合成的細(xì)菌纖維素掃描電鏡圖；

圖6為以氨基葡萄糖為碳源生物合成的細(xì)菌纖維素掃描電鏡圖，它與具體實(shí)施例相對(duì)應(yīng)；

圖7 是不同碳源生物合成的細(xì)菌纖維素的溶血率統(tǒng)計(jì)。

所述細(xì)菌纖維素是通過調(diào)節(jié)木醋桿菌培養(yǎng)體系中糖的劑量和比例來控制細(xì)菌纖維素孔徑及理化性質(zhì)。

葡萄糖合成的細(xì)菌纖維素的溶血率為0.38%；葡萄糖和氨基葡萄糖合成的細(xì)菌纖維素的溶血率為0.65%；氨基葡萄糖合成的細(xì)菌纖維素的溶血率0.1%。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1、培養(yǎng)基原料：1000mL蒸餾水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氫二鈉7.5~10 g，檸檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0；

2、將上述原料經(jīng)過121℃高壓滅菌15min，冷卻至室溫；

3、將木醋桿菌菌種接入，30℃下振蕩培養(yǎng)24h成為木醋桿菌種子液；

4、再次配料：1000mL蒸餾水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氫二鈉7.5~10 g，檸檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高壓滅菌15min，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，將木醋桿菌種子液按質(zhì)量百分比是6%的比例接入，30℃下靜置培養(yǎng)7天得到細(xì)菌纖維素濕膜；

5、將細(xì)菌纖維素濕膜經(jīng)過流水沖洗后使用蒸餾水漂洗；

6、采用1%的氫氧化鈉溶液煮沸4小時(shí)；

7、用蒸餾水沖洗后于室溫下在濃度是0. 5%乙酸中浸泡0.5小時(shí)；

8、用蒸餾水沖洗干凈，置于烘箱內(nèi)60℃下干燥得到細(xì)菌纖維素干膜。

實(shí)施例2

1000mL蒸餾水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氫二鈉7.5~10 g，檸檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高壓滅菌15min，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，將木醋桿菌菌種接入，30℃下振蕩培養(yǎng)24h成為木醋桿菌種子液；

1000mL蒸餾水、氨基葡萄糖5~7.5g，葡萄糖15~25 g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氫二鈉7.5~10 g，檸檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高壓滅菌15min，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，將木醋桿菌種子液按質(zhì)量百分比6%的比例接入，30℃下靜置培養(yǎng)7天得到細(xì)菌纖維素濕膜；

將細(xì)菌纖維素濕膜流水沖洗后使用蒸餾水漂洗，然后采用1%氫氧化鈉溶液煮沸4小時(shí)，再用蒸餾水沖洗后于室溫下在0. 5%乙酸中浸泡0.5小時(shí)，用蒸餾水沖洗干凈；置于烘箱60℃下干燥得到細(xì)菌纖維素干膜。

實(shí)施例3

1000mL蒸餾水、葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氫二鈉7.5~10 g，檸檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高壓滅菌15min，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，將木醋桿菌菌種接入，30℃下振蕩培養(yǎng)24h成為木醋桿菌種子液；

1000mL蒸餾水、氨基葡萄糖20~30g，蛋白胨7.5~10 g，酵母粉7.5~10 g，磷酸氫二鈉7.5~10 g，檸檬酸0.5~1.5 g且pH5.0~6.0，121℃高壓滅菌15min，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，將木醋桿菌種子液按質(zhì)量百分比是6%的量接入，30℃下靜置培養(yǎng)7天得到細(xì)菌纖維素濕膜；

將細(xì)菌纖維素濕膜流水沖洗后使用蒸餾水漂洗，然后采用1%氫氧化鈉溶液煮沸4小時(shí)，再用蒸餾水沖洗后于室溫下在0. 5%乙酸中浸泡0.5小時(shí)，用蒸餾水沖洗干凈；置于烘箱60℃下干燥得到細(xì)菌纖維素干膜。