專利名稱：一種硒化聚甘露糖醛酸制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于硒化多糖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種硒化聚甘露糖醛酸制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
褐藻膠是一種水溶性酸性多糖，主要從巨藻、馬尾藻、海帶等褐藻的細胞壁中提取得到，具有獨特的結(jié)構(gòu)和生物活性。其結(jié)構(gòu)上由a-1，4-L-古羅糖醒酸(a-1，4-L-guluronic acid,簡寫為G)和0 _1，4-D-甘露糖醒酸(3-1，4-D-mannuronicacid,簡寫為M)通過1_4糖苷鍵連接而成的直鏈陰離子多糖。整個分子由三種片段構(gòu)成聚甘露糖醒酸片段(Poly-mannuronate, PM)、聚古羅糖醒酸片段(Poly-guluronate, PG)和聚甘露糖醒酸-古羅糖醒酸雜合段(PMG block)。因此,通過已有的酸解方法可以分離出單一的聚甘露糖醛酸。聚甘露糖醛酸結(jié)構(gòu)特殊是C5上連有羧基的酸性化合，且結(jié)構(gòu)上不含硫，對其進行硒化存在一定的困難，因此采用先磺化再硒化的方法對其進行硒化。硒元素是生命活動的必須元素，其存在形式有無機硒和有機硒兩種，常見的無機硒有亞硒酸鈉和硒酸鈉，有機硒主要是硒蛋白和硒多糖。硒能構(gòu)成若干氧化酶的活性中心，可增強機體的抗氧化能力和對相關(guān)疾病的抵抗能力。這說明了硒與人體健康的直接關(guān)系。無機硒具有蓄積性毒性和致突變作用，使用時劑量難以控制，而有機硒毒性低，副作用小，不但能夠更好地發(fā)揮硒的作用，而且在激發(fā)免疫反應(yīng)上比無機硒顯著，因此，將無機硒與多糖有機結(jié)合使之轉(zhuǎn)化為有機硒化合物硒多糖，將會使硒和多糖的生理和藥理功能得到優(yōu)化。目前有多糖對阿爾茲海默癥(AD)的作用，但尚未見硒多糖對AD作用的報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，提供一種硒化聚甘露糖醛酸制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明提供一種硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其包括如下步驟制備磺化聚甘露糖醛酸將聚甘露糖醛酸懸浮于無水有機溶劑中，在攪拌條件下加入無水有機溶劑溶解的三氧化硫_吡啶復合物，在20 100°C恒溫度下反應(yīng)I 10小時，加入2 4倍體積的95%的乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物，再用95%的乙醇洗滌，加水溶解，用堿調(diào)節(jié)PH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；制備硒化聚甘露糖醛酸按質(zhì)量比為I :0. I 10將所述磺化聚甘露糖醛酸與亞硒酸鹽在酸性溶液中、Ba2+的催化下20 100°C恒溫度下反應(yīng)2 20小時，磺化聚甘露糖醛酸與氯化鋇摩爾比為I :1 100，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止，過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸。
以及，提供上述硒化聚甘露糖醛酸的制備方法所制備的硒化聚甘露糖醛酸在阿爾茨海默癥預防和治療的藥物以及保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，采用先磺化再硒化的制備方法，具有成本低，產(chǎn)率高的優(yōu)勢。而且通過透析法有效除去過量的亞硒酸根，同時也可以透析除去其他小分子無機化合物和低聚糖。同時，該制備方法所制備的硒化聚甘露糖醛酸具有預防和治療阿爾茨海默癥的作用。
圖I是本發(fā)明實施例的聚甘露糖醛酸(a)、磺化聚甘露糖醛酸(b)和硒化聚甘露糖醛酸(C)的紅外光譜圖；圖2是本發(fā)明Se-PM和Na2Se03、磺化聚甘露糖醛酸、PM、不同聚合度的寡糖混合物(MOM)對H2O2損傷的N2a-APP695-sw細胞保護后的細胞存活率關(guān)系圖； 圖3是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉膠和Na2SeO3對N2a_APP695_sw細胞中BACEl和APP蛋白表達的影響Western blot檢測結(jié)果原圖，I是對照，2是Se_PM，3是Se-Carr，4 是 Na2SeO3 ；圖4是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉膠和Na2SeO3對N2a_APP695_sw細胞中BACEl蛋白表達的影響Quantity one軟件對BACEl蛋白條帶進行光密度分析的結(jié)果，I是對照，
2是 Se-PM，3 是 Se-Carr, 4 是 Na2SeO3 ；圖5是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉膠和Na2SeO3對N2a_APP695_sw細胞中APP蛋白表達的影響Quantity one軟件對APP蛋白條帶進行光密度分析的結(jié)果，I是對照，2是Se-PM, 3 是 Se-Carr，4 是 Na2SeO3。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。本發(fā)明實施例提供一種硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其包括如下步驟SOl :制備磺化聚甘露糖醛酸將聚甘露糖醛酸(PM)懸浮于無水有機溶劑中，在攪拌條件下加入無水有機溶劑溶解的三氧化硫_吡啶復合物，在20 100°C恒溫度下反應(yīng)I 10小時，加入2 4倍體積的95%的乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物,再用95%的乙醇洗滌，力口水溶解，用堿調(diào)節(jié)PH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸(S-PM)；S02 :制備硒化聚甘露糖醛酸按質(zhì)量比為I :0. I 10將所述磺化聚甘露糖醛酸與亞硒酸鹽在酸性溶液中、Ba2+的催化下20 100°C恒溫度下反應(yīng)2 20小時，磺化聚甘露糖醛酸與氯化鋇摩爾比為I :1 100，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)PH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止，過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸(Se-PM)。步驟SOl中，聚甘露糖醛酸懸浮于無水有機溶劑中，優(yōu)選地，所述有機溶劑為二甲基甲酰胺(DMF)，所述三氧化硫-吡啶復合物與PM的摩爾比為100 I :1。所述反應(yīng)優(yōu)選在50 70°C恒溫度下反應(yīng)3 5小時，加入2 4倍體積的95%的醇，其目的為終止反應(yīng)并醇沉多糖。離心分離，用醇洗滌沉淀后，將沉淀溶于水中，用堿調(diào)節(jié)PH值至7。其中，所述堿可以為NaOH、KOH等強堿。透析，濾過，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸。步驟S02優(yōu)選為，按質(zhì)量比為I :1 3將所述磺化聚甘露糖醛酸與亞硒酸鹽在加入到非強還原酸中，如稀硝酸溶液，更優(yōu)選地，硝酸的質(zhì)量濃度為0. 5 %，其中，磺化聚甘露糖醛酸在酸溶液中的質(zhì)量濃度為0. I 0. 3%，優(yōu)選為0. 2%。在Ba2+的催化下、40 60°C恒溫度下反應(yīng)7 10小時，磺化聚甘露糖醛酸與氯化鋇摩爾比為I :1 100，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止，過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸。其中，所述冷凍干燥具體是在_80°C下冷凍8 24小時，再用真空冷凍干燥凍干。所制備的硒化聚甘露糖醛酸包含吡喃型糖單元，即P -I, 4-D-甘露糖醛酸，其C2、C4和C5位上至少一個羥基氫被亞硒酸酯基或其鹽所取代。所述聚甘露糖醛酸、磺化聚甘露糖醛酸和硒化聚甘露糖醛酸的紅外光圖譜如圖I所示。從圖I (a)中可以看出，在939. 99、 1037. 21和1082. 53CHT1為吡喃糖環(huán)骨架振動的特征吸收峰，820. 40cm^為D-聚甘露糖醛酸的特征吸收峰，證明該樣品分子中存在D-聚甘露糖醛酸糖環(huán)骨架結(jié)構(gòu)?；腔鄹事短侨┧岬募t外光圖譜(圖Ib)中，856. 27和1255. SOcnT1分別為C-O-S和S=O的伸縮振動峰，證明該樣品分子中存在硫酸酯基；1418. 67和1629. 79cm^分別為COO-的對稱和非對稱伸縮振動峰，證明該樣品結(jié)構(gòu)中存在羧基；3442. 25CHT1為羥基吸收峰，證明該樣品結(jié)構(gòu)中存在-0H。對照PM的IR譜圖發(fā)現(xiàn)，在磺化聚甘露糖醛酸中增加了硫酸酯基的吸收峰，表明硫酸酯基成功地引入至PM的分子結(jié)構(gòu)中(圖lc)。已有報道亞硒酸鈉的紅外圖譜在788. 63CHT1和742. 29CHT1有兩個特征吸收峰，而PM在此范圍內(nèi)無吸收峰。Se-PM的紅外光圖譜(圖Ic)中，3457. 35cm-l為羥基吸收峰，證明該樣品結(jié)構(gòu)中存在-OH ； 1415. 33和1614. 22cm-1分別為COO-的對稱和非對稱伸縮振動峰，證明該樣品結(jié)構(gòu)中存在羧基C00H。各特征吸收峰的位置不變化，多糖的基本構(gòu)型保持不變，其特征吸收峰828. 76cm-1強度變化不大，透析后硒多糖中無游離的亞硒酸根，證實多糖與亞硒酸根結(jié)合后形成化學鍵，而不是吸附。以及，本發(fā)明實施例提供上述硒化聚甘露糖醛酸的制備方法所制備的硒化聚甘露糖醛酸在阿爾茨海默癥預防和治療的藥物以及保健品中的應(yīng)用。阿爾茲海默癥是一組病因未明的原發(fā)性退行性腦變性疾病。多起病于老年期，潛隱起病，病程緩慢且不可逆，臨床上以智能損害為主。病理改變主要為皮質(zhì)彌漫性萎縮，溝回增寬，腦室擴大，神經(jīng)元大量減少，并可見老年斑(SP)，神經(jīng)原纖維結(jié)(NFT)等病變，膽堿乙?；讣耙阴Ｄ憠A含量顯著減少。將所述硒化聚甘露糖醛酸作用于AD細胞模型，研究硒化聚甘露糖醛酸對AD病理指標的改變以及作用機理。氧化應(yīng)激參與阿爾茨海默病的發(fā)生和發(fā)展，所述硒化聚甘露糖醛酸(Se-PM)具有良好的抗氧化效果。將AD細胞模型為N2a-APP695-sw細胞按5 X IO3/孔接種于96孔細胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后洗細胞三次，分別加入100 u L多種硒化合物與多糖的無血清DMEM培養(yǎng)基，使所含硒的最終濃度為2. 5iimol/L、多糖與對應(yīng)的硒多糖質(zhì)量相同，培養(yǎng)24h后再加入10 ii L含H2O2的無血清DMEM培養(yǎng)基，使H2O2的終濃度為60 u mo I/L (n=6)，繼續(xù)培養(yǎng)24h，加CCK-8試劑，檢測細胞存活率。圖2是硒濃度為2. 5 u mo I/L的Se-PM和Na2SeO3,以及500 u g/mL的磺化聚甘露糖醛酸、PM和不同聚合度的寡糖混合物(MOM)對N2a-APP695_sw細胞免受H2O2氧化損傷的保護作用結(jié)果(#*p〈0. 001VS對照，###p〈0. 001VS H2O2模型組)。從圖2中可以看出，Se-PM、磺化聚甘露糖醛酸、聚甘露糖醛酸和Na2SeO3可以使H2O2處理的N2a-APP695-sw細胞的存活率顯著提高，而在MOM的作用下，細胞存活率沒有顯著變化。因此，Se-PM、磺化聚甘露糖醛酸、PM和Na2SeO3能夠保護N2a-APP695_sw細胞免受H2O2的氧化損傷。而且本實驗AD模型細胞在Se-PM作用后線粒體膜電位顯著增高、細胞色素C的釋放減少、ROS水平明顯降低、Bcl-2蛋白的表達明顯增加。因此，Se-PM能夠通過保護線粒體完整性和生物功能、抑制細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生，從而提高Bcl-2蛋白的表達，促進細胞生長與增殖，阻止或延緩細胞的凋亡。對硒化聚甘露糖醛酸處理AD細胞進行研究。采用的AD細胞模型為N2a-APP695-sw細胞，是穩(wěn)轉(zhuǎn)了 APP695 Swedish突變基因的Neuro_2a細胞。取對數(shù)生長期N2a_APP_sw細胞消化成單細胞懸液，調(diào)節(jié)細胞濃度，將其接種于培養(yǎng)皿上，37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。棄去舊的培養(yǎng)液，用無血清培養(yǎng)基重復洗3次，再分別加入待研究硒化合物與多糖的無血清DMEM培養(yǎng)基，使硒的終濃度為2. 5 u mol/L (多糖與對應(yīng)的硒多糖質(zhì)量相同)，繼續(xù)培養(yǎng)24h。收集細胞，加入細胞裂解液(RIPA)，冰浴裂解細胞，4°C于14000rpm離心lh。收集上清， 于-80°C冰箱中保存?zhèn)溆谩２捎肂CA法測定蛋白質(zhì)濃度。通過Western blot方法檢測與AD重要相關(guān)蛋白的變化，用兔源BACEl抗體、鼠源APP抗體分別檢測所對應(yīng)的蛋白。通過研究與AD重要相關(guān)的蛋白BACEl個APP來研究硒化聚甘露糖醛酸對AD的作用效果。BACEl即
3-分泌酶1，^ -actin是P -肌動蛋白,APP是AP的前體蛋白，a -tublin是a -微管蛋白。上述硒化聚甘露糖醛酸的制備方法所制備的Se-PM處理AD模型細胞N2a-APP695-sw24小時后提蛋白，BCA定量后進行Western blot分析，結(jié)果如圖3 圖5所示，Se-PM能夠非常顯著的降低BACEl蛋白的表達(#*P〈0. 001)，也能夠顯著降低APP的表達(*P〈0. 05)。其作用效果顯著強于硒化卡拉膠(Se-Carr)和亞硒酸鈉(Na2SeO3)tj這說明Se-PM有可能防止AD重要病理特征￠-淀粉樣斑塊的形成，因此具有抗AD的作用。以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的具體實現(xiàn)進行詳細描述。實施例I :將IOOmg經(jīng)干燥后聚甘露糖醛酸(PM)懸浮于DFM中，在攪拌條件下加入5mL無水DMF溶解的600mg三氧化硫-吡啶復合物，在60°C恒溫度下反應(yīng)4小時，加入3倍體積的95%的乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物,用95%的乙醇洗滌，加水溶解，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸，其中硫含量為12. 5%, DS=L 29，平均產(chǎn)率為78% ；制備硒化甘露糖醛酸將所述IOOmg磺化聚甘露糖醛酸與200mg亞硒酸鹽加入到50mL0. 5%的HNO3溶液里，25mg BaCl2的催化下60°C反應(yīng)8h，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)PH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止，過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸(Se-PM)，測得樣品中含硒量為437. 25 u g/g，硒化過程平均產(chǎn)率為70%。實施例2:將IOOmg經(jīng)干燥后聚甘露糖醛酸(PM)懸浮于DFM中，在攪拌條件下加入5mL無水DMF溶解的600mg三氧化硫-吡啶復合物，在20°C恒溫度下反應(yīng)10小時，加入2倍體積的95%的乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物,用95%的乙醇洗滌，加水溶解，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；制備硒化甘露糖醛酸將所述IOOmg磺化聚甘露糖醛酸與IOmg亞硒酸鹽加入到50mL0. 5%的順03溶液里，25mg Ba(NO3)2的催化下20°C反應(yīng)20h，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)PH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止。過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸(Se-PM)。實施例3 將IOOmg經(jīng)干燥后聚甘露糖醛酸(PM)懸浮于DFM中，在攪拌條件下加入5mL無水DMF溶解的600mg三氧化硫-吡啶復合物，在100°C恒溫度下反應(yīng)I小時，加入4倍體積的95%的乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物,用95%的乙醇洗滌，加水溶解，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；制備硒化甘露糖醛酸將所述IOOmg磺化聚甘露糖醛酸與IOOOmg亞硒酸加入到50mL0. 5%的HNO3溶液里，IOOOmg BaCl2的催化下100°C反應(yīng)2h，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)PH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止。過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸(Se-PM)。 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 制備磺化聚甘露糖醛酸將聚甘露糖醛酸懸浮于無水有機溶劑中，在攪拌條件下加入無水有機溶劑溶解的三氧化硫-吡啶復合物，在20 100°C恒溫度下反應(yīng)I 10小時，力口入2 4倍體積的95%的乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物，再用95%的乙醇洗滌，加水溶解，用堿調(diào)節(jié)PH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸； 制備硒化聚甘露糖醛酸按質(zhì)量比為I :0. I 10將所述磺化聚甘露糖醛酸與亞硒酸鹽在酸性溶液中、Ba2+的催化下20 100°C恒溫度下反應(yīng)2 20小時，所述磺化聚甘露糖醛酸與氯化鋇摩爾比為I :1 100，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止，過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸。
2.如權(quán)利要求I所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，所述三氧化硫_吡啶復合物與聚甘露糖醛酸的摩爾比為100 I :1。
3.如權(quán)利要求I所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，所述堿為強堿。
4.如權(quán)利要求I所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，所述制備磺化聚甘露糖醛酸為將聚甘露糖醛酸懸浮于二甲基甲酰胺中，在攪拌條件下加入二甲基甲酰胺溶解的三氧化硫_吡啶復合物，在50 70°C恒溫度下反應(yīng)3 5小時，加入2 4倍體積的95%的乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物，用95%的乙醇洗滌，加水溶解，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸。
5.如權(quán)利要求I所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，所述制備硒化聚甘露糖醛酸為按質(zhì)量比為I :1 3將所述磺化聚甘露糖醛酸與亞硒酸鹽在硝酸溶液中、Ba2+的催化下40 60°C恒溫度下反應(yīng)7 10小時，所述磺化聚甘露糖醛酸與氯化鋇摩爾比為I :1 100，加入硫酸鹽以去除Ba2+，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗壞血酸檢測透析袋內(nèi)液不變紅為止，過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸。
6.如權(quán)利要求I所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，所述冷凍干燥是在-80°C下冷凍8 24小時，再用真空冷凍干燥凍干。
7.如權(quán)利要求I所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，所述酸性溶液為非強還原性酸溶液。
8.如權(quán)利要求I所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其特征在于，所述磺化聚甘露糖醛酸在酸溶液中的質(zhì)量濃度為0. I 0. 3%。
9.如權(quán)利要求I 8所述的硒化聚甘露糖醛酸的制備方法所制備的硒化聚甘露糖醛酸在阿爾茨海默癥預防和治療的藥物以及保健品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及硒化多糖技術(shù)領(lǐng)域，提供一種硒化聚甘露糖醛酸的制備方法，其包括如下步驟將聚甘露糖醛酸懸浮于無水有機溶劑中，在攪拌條件下加入無水有機溶劑溶解的三氧化硫-吡啶復合物，在20～100℃恒溫度下反應(yīng)1～10小時，加入乙醇，離心分離反應(yīng)產(chǎn)物，再用乙醇洗滌，加水溶解，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；將所述磺化聚甘露糖醛酸與亞硒酸鹽在酸性溶液中、Ba2+的催化下進行反應(yīng)，加入硫酸鹽，離心取上清液，用堿調(diào)節(jié)pH至中性，透析，過濾，冷凍干燥，獲得所述硒化聚甘露糖醛酸。以及，提供上述硒化聚甘露糖醛酸的制備方法所制備的硒化聚甘露糖醛酸在阿爾茨海默癥預防和治療的藥物以及保健品中的應(yīng)用。
文檔編號C08B37/00GK102936291SQ20121045891
公開日2013年2月20日 申請日期2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月15日
發(fā)明者朱志杰, 劉瓊, 續(xù)旭, 倪嘉纘 申請人:深圳大學