專利名稱：含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)修飾劑，特別涉及一類聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑、制備方法以及其用途。
背景技術(shù)：
蛋白質(zhì)藥物主要分為多肽和基因工程藥物、基因工程抗體、單克隆抗體和重組疫苗等。同傳統(tǒng)的有機(jī)小分子藥物相比，蛋白質(zhì)藥物具有高活性、低毒性、特異性強(qiáng)、生物功能明確、有利于臨床應(yīng)用等特點(diǎn)。由于其成本低、成功率高、安全可靠，已成為醫(yī)藥產(chǎn)品中的重要組成部分。自從1982年美國(guó)Lilly公司將世界上第一個(gè)重組蛋白質(zhì)藥物一重組胰島素投放市場(chǎng)，生物醫(yī)藥尤其是蛋白質(zhì)藥物的技術(shù)革新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展突飛猛進(jìn)。全球生物技術(shù)公司總數(shù)已近7000家，上市公司有800余家，銷售總額近5000億美元，其中蛋白質(zhì)藥物占總 銷售額的60%。蛋白質(zhì)藥物在使用過程中會(huì)產(chǎn)生幾個(gè)主要問題，如穩(wěn)定性差、容易被生物體內(nèi)酶降解；會(huì)被腎小球過濾清除；會(huì)造成抗原-抗體反應(yīng)；分子量過大、溶解度差導(dǎo)致沉淀等。因此，目前市面上絕大多數(shù)蛋白質(zhì)藥物都必須通過化學(xué)修飾來(lái)延長(zhǎng)藥物的循環(huán)半衰期。常見的蛋白質(zhì)藥物修飾劑有右旋糖苷、肝素、聚乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、多聚唾液酸和聚乙二醇(PEG)等物質(zhì)，其中，聚乙二醇類修飾劑是當(dāng)前最重要也是最主流的蛋白質(zhì)藥物修飾劑。與其他修飾劑相比，聚乙二醇毒性小、無(wú)抗原性、具有良好的溶解性，且該聚合物具有得到FDA認(rèn)證的生物相容性。同時(shí)，聚乙二醇還可將自身優(yōu)良的物理化學(xué)性質(zhì)傳遞到修飾后的蛋白質(zhì)和多肽等生物分子上，以改變其生物分配行為和溶解行為。目前，聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑普遍采用的合成原料是單甲氧基聚乙二醇(mPEG) =CH3O- (CH2-CH2O) -H。mPEG的末端羥基通過化學(xué)反應(yīng)活化修飾上各種官能基團(tuán)，從而可以在溫和的條件下同蛋白質(zhì)藥物表面的裸露氨基、巰基或羧基偶聯(lián)，起到修飾、穩(wěn)定、保護(hù)蛋白質(zhì)藥物的作用。例如，CN1405150A報(bào)道了一類含有四個(gè)羧基的聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑，其特征制備方法在于將L-谷氨酸或L-天冬氨酸的二乙酯鹽酸鹽同酰氯反應(yīng)，然后經(jīng)脫保護(hù)基、酸化處理獲得含有四個(gè)羧基的蛋白質(zhì)修飾劑。CN1461762A報(bào)道了一類含有琥珀酰亞胺基的分枝型聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑，是將L-賴氨酸同經(jīng)過氧化反應(yīng)后得到的羧甲基化聚乙二醇反應(yīng)，然后同氮-羥基琥珀酰亞胺偶聯(lián)，制備含有兩個(gè)單甲氧基聚乙二醇長(zhǎng)鏈的蛋白質(zhì)修飾劑。CN1519266A報(bào)道了一類含有兩個(gè)琥珀酰亞胺基的單鏈聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑，是將L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽同經(jīng)過氧化反應(yīng)后得到的羧甲基化聚乙二醇反應(yīng)，然后同氮-羥基琥珀酰亞胺偶聯(lián)，制備含有一個(gè)單甲氧基聚乙二醇長(zhǎng)鏈的蛋白質(zhì)修飾劑。CN101376708A報(bào)道了一類以丙醛基為端基的聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑，是將單甲氧基聚乙二醇同I-氯-3，3-二乙氧基縮丙醛，然后經(jīng)酸化水解處理獲得含有末端丙醛基的聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑。已公開的聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑的制備方法存在一個(gè)顯著的問題，即各類不同聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑的合成工藝差別過大，無(wú)形中大大增加了企業(yè)的生產(chǎn)成本。例如，CN1405150A涉及了酰化、皂化水解、酯化反應(yīng)；CN1461762涉及了氧化、皂化水解、酯化反應(yīng)；CN1519266A涉及了氧化、酯化反應(yīng)；CN101376708A涉及了鹵代烴取代、酸化水解反應(yīng)。因此，如何設(shè)計(jì)一種統(tǒng)一的合成工藝，只需通過控制和改變不同的初始有機(jī)小分子反應(yīng)物，即可以得到具有多樣化、多官能團(tuán)的各種聚乙二醇類蛋白質(zhì)藥物修飾劑，可以有效降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品的競(jìng)爭(zhēng)性。
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于克服傳統(tǒng)聚乙二醇類蛋白質(zhì)修飾劑的制備方法過于繁瑣、相互間差別較大，不利于企業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)的缺點(diǎn)，提供一種含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案為一種含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑，化學(xué)通式為
權(quán)利要求
1.一種含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑，其特征在于，化學(xué)通式為
2.如權(quán)利要求I所述的含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑，其特征在于，所述的mPEG的重均分子量為750 10000。
3.一種制備權(quán)利要求I或2所述的含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑的方法，其特征在于，按下式反應(yīng)得到
4.如權(quán)利要求3所述的制備含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑的方法，其特征在于，所述的催化劑為4- 二甲基氨基吡啶。
5.如權(quán)利要求3所述的制備含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑的方法，其特征在于，所述的mPEG先溶于二氯甲烷中再反應(yīng)。
6.如權(quán)利要求3所述的制備含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑的方法，其特征在于，所述的
7.如權(quán)利要求3所述的制備含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑的方法，其特征在于， 所述的
8.如權(quán)利要求3所述的含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑的制法，其特征在于所述的
9.一種權(quán)利要求I或2所述的含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑在修飾血紅蛋白中的應(yīng)用。
10.一種權(quán)利要求I或2所述的含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑在人體使用的人血紅蛋白修飾 中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑及其制備方法和應(yīng)用，化學(xué)通式為其中，A是碳原子數(shù)為0～20的直鏈烷基。該修飾劑由含疊氮基的單甲氧基聚乙二醇與含末端炔鍵和琥珀酰亞胺的烷烴衍生物通過銅催化點(diǎn)擊化學(xué)的方法制備。本發(fā)明涉及的含三氮唑的聚乙二醇蛋白質(zhì)修飾劑可用于修飾血紅蛋白，尤其是用于修飾牛血紅蛋白和修飾作為人體使用的人血紅蛋白?？梢酝ㄟ^銅催化點(diǎn)擊化學(xué)的方法高效地修飾上各種官能基團(tuán)，工藝簡(jiǎn)單，成本低廉，便于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C08G65/48GK102675626SQ20121013244
公開日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月28日
發(fā)明者吳仁榮, 姚丹, 張飛, 徐順奇, 楊洪, 林保平, 沈德淵, 賈建國(guó), 陶平洋, 高正松 申請(qǐng)人:東南大學(xué), 南京威爾化工有限公司