專利名稱：異硫氰酸酯類化合物在促進(jìn)毛發(fā)生長中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)、生物和醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體而言涉及異硫氰酸酯類化合物在促進(jìn) 毛發(fā)生長中的應(yīng)用，尤其是其在治療和/或預(yù)防脫發(fā)中的應(yīng)用。相關(guān)申請(qǐng)本發(fā)明是基于如下專利申請(qǐng)或?qū)＠暮罄m(xù)研究一種天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物JC-5411在制備預(yù)防和治療前列腺 癌、肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、宮頸癌、黑色素瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤的藥物中的應(yīng)用，專利號(hào) ZL200510040865. 1，申請(qǐng)日2005年6月30日；授權(quán)公告日2009年1月7日；一種天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物JC-5411在制備轉(zhuǎn)錄因子SPl的抑制 劑中的應(yīng)用，申請(qǐng)?zhí)?200510095737. 7，申請(qǐng)日:2005年11月15日；一種適用于難溶性藥物的分散劑，申請(qǐng)?zhí)?200610038112. 1，申請(qǐng)日2006年1月 27日；—種適用于難溶性藥物的藥用乳劑及其制備方法(已授權(quán)但尚未公告)，申請(qǐng)?zhí)?200410052816. 5，申請(qǐng)日2004 年 7 月 14 日；異硫氰酸酯類化合物在前列腺疾病及皮膚癌中的應(yīng)用，申請(qǐng)?zhí)?00610126892. 5， 申請(qǐng)日2006年9月11日；PCT國際專利異硫氰酸酯類化合物在前列腺疾病及皮膚癌中的應(yīng)用，國際申請(qǐng) 號(hào)PCT/CN2006/003062，國際申請(qǐng)日2006 年 11 月 14 日。上述專利申請(qǐng)或?qū)＠膬?nèi)容以其全文納入本文作為參考。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代生活中，禿發(fā)和脫發(fā)已成為人類的常見病和多發(fā)病，它們雖然不會(huì)給患者帶 來直接的肉體痛苦，卻給患者的精神帶來諸多不良影響，并給患者的生活帶來不便。在人群 中可觀察到不同形式的禿發(fā)癥，如雄性激素性脫發(fā)(androgenetic alopecia, AGA)、斑禿、 假性斑禿、脂溢性脫發(fā)、生長期脫發(fā)以及休止期脫發(fā)等，其中較為普遍的是雄性激素性脫 發(fā)。男性和女性均可發(fā)生AGA，男性發(fā)生的概率普遍高于女性，對(duì)男性而言大多數(shù)脫發(fā)發(fā)生 在頭的前部和頂部，女性則是整個(gè)頭部的頭發(fā)變薄。2003年對(duì)近6000名男性調(diào)查的結(jié)果表明我國25_29歲男性中患有不同程度AGA 的人占該年齡段的12 %，30-34歲占17 %，35-39歲占20 %，40-44歲占24%，45-49歲的發(fā) 病率則可高達(dá)31 %。由于社會(huì)、環(huán)境等方面的因素，近幾年，AGA發(fā)病率不斷提高，且呈現(xiàn)低 齡化的趨勢。AGA的治療方法主要有藥物治療和手術(shù)治療(如毛發(fā)移植)兩類。毛發(fā)移植雖可 改善脫發(fā)的不良視覺，達(dá)到一定美容效果，但手術(shù)費(fèi)用高，且存在手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)；另外脫發(fā)面積 較大的患者往往需要多次移植，費(fèi)用更高，較難普及。AGA的臨床表現(xiàn)常常為頭頂部毛囊變小，生長期縮短，生長期/休止期毛囊比值下 降，毛發(fā)直徑變小、變少，毳毛代替終毛。目前認(rèn)為該病是在一定遺傳素質(zhì)的基礎(chǔ)上，與雄激素水平增高有關(guān)(尹興平等，5 α-還原酶在雄激素代謝中的作用及其抑制劑在皮膚科的應(yīng) 用，國外醫(yī)學(xué)皮膚性病學(xué)分冊(cè)，2004，30 (6) 375-377)。早在40年代，Hamilton等就認(rèn)識(shí)到 了遺傳和睪酮與 AGA 之間的關(guān)系(Hamilton JB. Male hormone is aprerequisite and an incitant in common bladness. Am J Anat 1942,71 :451_480)。近年來，隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，AGA的發(fā)病機(jī)理，特別是雄激素與AGA的關(guān) 系更趨明了。正常生理狀態(tài)下，雄激素在體內(nèi)對(duì)毛發(fā)的生長發(fā)育起一定的刺激促進(jìn)作用， 但能誘導(dǎo)某些特定部位毛發(fā)的脫失。AGA患者禿發(fā)區(qū)脫發(fā)的誘因，主要是由于雄激素在 皮膚局部組織的代謝異常，以及與雄激素代謝有關(guān)的酶和受體在禿發(fā)區(qū)的活性和數(shù)量增 力卩(Hibberts NA 等，Balding hair folliele dermal papilla cells contain higher levels of androgen receptors than those from non-balding scalp，Endocrinol，1998， 156(1) :59-65)，后者使容易禿發(fā)的頭皮對(duì)正?；蚱叩男奂に禺a(chǎn)生強(qiáng)大的放大效應(yīng)。例 如，通過5 α-還原酶、3 α-羥基類固醇脫氫酶等的作用，活性較低的睪酮(T)轉(zhuǎn)換成活性較 高的二氫睪酮(DHT)。睪酮或二氫睪酮都必須與集中于毛囊單位內(nèi)的雄激素受體結(jié)合，進(jìn)入 細(xì)胞核產(chǎn)生一系列生物效應(yīng)，使細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷降低，毛發(fā)生長期縮短或毛囊微小化，從 而導(dǎo)致脫發(fā)。因此，從發(fā)病機(jī)理來看，下調(diào)雄激素受體過度表達(dá)可以改善AGA的脫發(fā)癥狀。市場上治療脫發(fā)的藥物主要分為三類(1)以非那雄胺為代表的5 α-還原酶抑制劑。這類藥物通過抑制5 α-還原酶，從 而降低睪酮向活性更高的二氫睪酮的轉(zhuǎn)化，減弱了器官中過量雄激素刺激的作用。但該藥 物也存在一些缺陷，比如引發(fā)陽痿的性功能障礙、停藥后反復(fù)復(fù)發(fā)等。此外由于無法局部應(yīng) 用，激素樣副作用使之不適合用于女性、孕婦禁用(付國強(qiáng).治療雄激素性脫發(fā)藥物的研究 進(jìn)展[J]·國外醫(yī)學(xué)皮膚性病學(xué)分冊(cè)，2000，26 (2) 68-72)等等。(2)雄激素拮抗劑，包括留體類和非留體類。這類藥物通過抗雄激素或與雄激素競 爭性結(jié)合雄激素受體而降低雄激素作用。留體類如醋酸環(huán)丙孕酮、雌激素等，該類藥物有對(duì) 抗雄激素的作用，但同時(shí)產(chǎn)生女性化副作用。非甾體類雄激素拮抗劑雖然沒有激素的副作 用，卻由于與所有內(nèi)源性雄激素競爭受體位點(diǎn)，因而可導(dǎo)致男性患者或女性患者的雄性胎 兒女性化的傾向，以及睪丸產(chǎn)生過度刺激的反饋?zhàn)饔谩?3)鉀離子通道開放劑，如米諾地爾，口服存在快速降低血壓等不良反應(yīng)，故一般 外用。但該藥物停藥后易復(fù)發(fā)，需要長期使用。此外該藥物不直接調(diào)控雄激素或雄激素受 體，因此對(duì)雄激素性脫發(fā)的治療效果不強(qiáng)。由上可知，目前市場上治療脫發(fā)的一線藥物均存在一定副作用，療效也不甚理想。 此外，從美容的角度而言，本領(lǐng)域也缺乏可安全、有效地促進(jìn)毛發(fā)生長以達(dá)到美容效果的組 合物。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)出可有效、安全地促進(jìn)毛發(fā)生長的組合物。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一正是提供一種已知化合物——異硫氰酸酯類化合物在促進(jìn)毛 發(fā)生長中的新用途、其相關(guān)組合物及應(yīng)用。在本發(fā)明的第一方面中，提供了通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II 的衍生物在制備促進(jìn)對(duì)象毛發(fā)生長的組合物中的應(yīng)用
R1-X-NCS 通式 I在通式I中NCS為異硫氰酸酯基；X 為-(CH2) η_，η 為 0-4 的整數(shù)；R1為多取代或單取代或未取代的苯基或C2_4烯基，所述取代基選自磺酸基、氨基 磺酸基、鹵素、甲基、乙基、甲氧基、甲硫基、甲酰氨基、乙酰氨基、甲氨基、乙氨基、羧基和氰 基； 通式II通式II中R1W和X如通式I中所定義；R3為氫或通過硫原子與的碳原子連接的衍生自以下化合物的基團(tuán)N-乙酰
半胱氨酸、谷胱甘肽、半胱氨酸(C1-C6烷基)酯、半胱氨酰氨基酸和半胱氨酰氨基酸(C1-C6 烷基)酯。在本發(fā)明的第一方面中，通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生 物在制備促進(jìn)對(duì)象毛發(fā)生長的組合物中的應(yīng)用R1-X-NCS通式I在通式I中NCS為異硫氰酸酯基；X 為-(CH2) η_，η 為 0-4 的整數(shù)；R1為多取代或單取代或未取代的苯基或C2_4烯基，所述取代基選自磺酸基、氨基 磺酸基、氟、氯、溴、甲基、乙基、甲氧基、甲硫基、甲酰氨基、乙酰氨基、甲氨基、羧基和氰基； 通式II通式II中R1和X如通式I中所定義；R3為氫或通過硫原子與g ^的碳原子連接的衍生自以下化合物的基團(tuán)N-乙酰
-N-C-
半胱氨酸、谷胱甘肽、半胱氨酸(C1-C6烷基)酯、半胱氨酰氨基酸和半胱氨酰氨基酸(C1-C6 烷基)酯，其中氨基酸較優(yōu)的有甘氨酸、谷氨酸、絲氨酸、丙氨酸或蛋氨酸。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述異硫氰酸酯類化合物為選自結(jié)構(gòu)式(1) (8)
化合物中的一種或多種
7 在一個(gè)優(yōu)選例中，所述異硫氰酸酯類化合物選自結(jié)構(gòu)式⑴、(2)、(5)或(6)所示 化合物中的一種或多種。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述異硫氰酸酯類化合物獲自動(dòng)植物、化學(xué)合成或半化學(xué)合 成。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述促進(jìn)毛發(fā)生長針對(duì)選自下組的疾病或征狀 毛發(fā)異常脫落或毛發(fā)稀少。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物還抑制雄激素受體、雄激素受體上游基因Spl或雄 激素受體下游基因前列腺特異抗原的表達(dá)。在另一優(yōu)選例中，所述對(duì)象為哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類或賞毛動(dòng)物。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述毛發(fā)異常脫落選自雄性激素性脫發(fā)、斑禿、 假性斑禿、脂溢性脫發(fā)、生長期脫發(fā)或休止期脫發(fā)。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述毛發(fā)異常脫落為雄激素性脫發(fā)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物選自藥物組合物、食品、保健品或化妝品。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物的劑型選自浴劑、洗劑、搽劑、酊劑、 油劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、熨劑、貼膏、貼片、涂膜劑、膜劑、凝膠劑、巴布劑、穴位貼敷劑、 噴霧劑、氣霧劑、植入劑、乳劑、洗發(fā)液、護(hù)發(fā)素、栓劑、片劑、膠囊、丸劑、注射用粉針、注射劑 或凍干粉劑。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，以組合物的總重量為基準(zhǔn)計(jì)，所述組合物中通式I 所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物的含量為0. 001 99. 9重量％。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物中通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II 的衍生物的含量為0. 01 90重量％，更優(yōu)選0. 05 75重量％。在另一優(yōu)選例中，所述組合物以可直接施用的形式存在，以組合物的總重量為基 準(zhǔn)計(jì)，通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物的含量為0. 001 25重 量％，優(yōu)選0. 005 20重量％，更優(yōu)選0. 05 10重量％。在另一優(yōu)選例中，所述組合物以濃縮物的形式存在，在使用前可對(duì)其進(jìn)行稀釋，以 稀釋物的總重量為基準(zhǔn)計(jì)，通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物的含 量為0. 001 25重量％，優(yōu)選0. 005 20重量％，更優(yōu)選0. 05 10重量％。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物還含有其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活 性物質(zhì)。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活性物質(zhì)為選自下組的一種或 多種5 α -還原酶抑制劑、雄激素拮抗劑或鉀離子通道開放劑，優(yōu)選非那雄胺、依立雄胺、度他雄胺、醋酸環(huán)丙孕酮、雌激素、米諾地爾或安體舒通。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，在使用所述組合物之前、同時(shí)或之后，配合使用所 述其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活性物質(zhì)、實(shí)施針對(duì)脫發(fā)的外科手術(shù)或給予針對(duì)脫發(fā)的放射 性治療。在本發(fā)明的第二方面中，提供了一種組合物，其含有(A)有效量的通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物R1-X-NCS 通式 I在通式I中NCS為異硫氰酸酯基；X 為-(CH2) η_，η 為 0-4 的整數(shù)；R1為多取代或單取代或未取代的苯基或C2_4烯基，所述取代基選自磺酸基、氨基 磺酸基、鹵素、甲基、乙基、甲氧基、甲硫基、甲酰氨基、乙酰氨基、甲氨基、乙氨基、羧基和氰 基；RI.X』i-R3 通式 11通式II中R1和X如通式I中所定義；R3為氫或通過硫原子與的碳原子連接的衍生自以下化合物的一價(jià)基團(tuán)
N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、半胱氨酸(C1-C6烷基)酯、半胱氨酰甘氨酸、半胱氨酰甘氨酸 (C1-C6烷基)酯、半胱氨酰谷氨酸、半胱氨酰谷氨酸(C1-C6烷基)酯、半胱氨酰丙氨酸、半胱 氨酰丙氨酸(C1-C6烷基)酯、半胱氨酰絲氨酸、半胱氨酰絲氨酸(C1-C6烷基)酯、半胱氨酰 蛋氨酸、半胱氨酰蛋氨酸(C1-C6烷基)酯；(B)藥學(xué)上可接受的載體、食品、保健品或化妝品可接受的載體；(C) 一種或多種其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活性物質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物中的載體為油脂性基質(zhì)或水溶性基質(zhì)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述油脂性基質(zhì)為選自(bl)中的一種或多種，所 述水溶性基質(zhì)為選自(b2)中的一種或多種(bl)凡士林、凡士林羊毛醇、石蠟、液狀石蠟、液體石蠟羊毛醇、地蠟、蜂蠟、白蠟、 黃蠟、鯨蠟、羊毛脂、豬油、羊油、麻油、花生油、玉米油、大豆油、菜子油、芝麻油、葵花籽油、 杏仁油、蓖麻油、橄欖油、棉籽油、二甲基硅油、氫化植物油、中鏈甘油三酸酯、肉豆蔻酸異丙 酯、硬脂酸、十六醇、十六醇酯蠟、十八醇、臨苯二甲酸二酯、巴西棕櫚蠟、丙酮、石油醚、油酸 乙酯或棕櫚酸異丙酯；或(b2)蒸餾水、乙醇、異丙醇、甘油、淀粉甘油、單乙醇胺、丙三醇三乙酸酯、蟲膠、角 豆膠、明膠、瓜耳膠、角叉菜膠、阿拉伯膠、西黃蓍膠、黃原酸膠、殼聚糖、海藻酸鈉、甲基纖維 素、羧甲纖維素、羧甲纖維素鈣、羧甲纖維素鈉、羥乙纖維素、羥乙甲纖維素、羥丙纖維素、低 取代羥丙纖維素、羥丙甲纖維素、羥丙甲纖維素酞酸酯、卡波姆、聚乙二醇或膠體硅酸鎂鋁。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活性物質(zhì)為選自 下組的一種或多種5 α -還原酶抑制劑、雄激素拮抗劑或鉀離子通道開放劑。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述活性物質(zhì)優(yōu)選為非那雄胺、依立雄胺、度他雄胺、醋酸環(huán)丙孕酮、雌激素、米諾地爾或安體舒通。在本發(fā)明的第三方面中，提供了一種美容方法，所述方法包括給予對(duì)象通式I所 示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物或本發(fā)明的組合物以促進(jìn)所述對(duì)象毛發(fā) 的生長。在本發(fā)明的第四方面中，提供了一種預(yù)防和/或治療脫發(fā)的方法，所述方法包括 給予需要所述預(yù)防和/或治療的對(duì)象有效量的通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通 式II的衍生物。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見 的。
圖1 小鼠新生毛發(fā)生長速度比較。
圖2 小鼠新生毛發(fā)面積比較。
圖3 小鼠新生毛發(fā)重量比較。
圖4 給藥11天小鼠照片
圖4A給藥11天陰性對(duì)照組小鼠照片
圖4B給藥11天給藥組小鼠照片。
圖5 給藥13天小鼠照片
圖5A給藥13天陰性對(duì)照組小鼠照片
圖5B給藥13天給藥組小鼠照片。
圖6 給藥18天小鼠照片
圖6A給藥18天陰性對(duì)照組小鼠照片
圖6B給藥18天給藥組小鼠照片。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)了已知化合物——異硫氰酸酯類化合物對(duì) 于毛發(fā)生長的速度、面積和質(zhì)量均有明顯的促進(jìn)作用，且?guī)缀鯖]有毒副作用，可用于安全有 效地促進(jìn)毛發(fā)生長。由此，本發(fā)明人開發(fā)出了可用于促進(jìn)毛發(fā)生長的組合物，并在此基礎(chǔ)上 完成了本發(fā)明。異硫氰酸酯類化合物如本文所用，術(shù)語“異硫氰酸酯類化合物”、“異硫氰酸酯類活性物質(zhì)”和“本發(fā)明的 活性物質(zhì)”可互換使用，均是指具有通式I所述結(jié)構(gòu)的化合物、其衍生物(尤其是具有通式 II的衍生物)、代謝物或它們的組合。本發(fā)明所述的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代謝物，包括但不限于中國發(fā)明 專利200610126892. 5所涉及的苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、烯 丙基異硫氰酸酯(AITC)、4_磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)、以及它們分別與N-乙酰半胱 氨酸形成的共軛物(BITC-NAC、PEITC-NAC, AITC-NAC和SPITC-NAC)，分別對(duì)應(yīng)于本文中的 結(jié)構(gòu)式(1) ⑶。在本發(fā)明中，對(duì)于獲得異硫氰酸酯類化合物的方法沒有特別的限制，比如其可以從天然植物(例如芥菜或蘿卜)中提取、采用化學(xué)合成或半化學(xué)合成的方法制備等。本發(fā) 明中所使用的異硫氰酸酯類化合物可通過市售途徑獲得，例如可購自無錫杰西醫(yī)藥科技有 限公司或SIGMA公司。尉應(yīng)洽請(qǐng)料靴擺舌本發(fā)明提供了異硫氰酸酯類化合物在促進(jìn)毛發(fā)生長中的新用途。本發(fā)明中異硫氰 酸酯類化合物或含有此類化合物作為活性成分的組合物，能有效促進(jìn)毛發(fā)(優(yōu)選頭發(fā))的 生長，改善脫發(fā)，起到預(yù)防、治療和/或美容的效果。不限于理論，本發(fā)明異硫氰酸酯類化合物可通過如下機(jī)理促進(jìn)毛發(fā)生長(1)促進(jìn)毛發(fā)生長部位血液循環(huán)毛發(fā)生長影響因素的研究表明，增加皮膚局部 的血液循環(huán)，有助于毛發(fā)的生長。本發(fā)明的異硫氰酸酯類化合物對(duì)毛發(fā)生長部位有局部刺 激作用，可改善施用部位的血液循環(huán)，從而促進(jìn)毛發(fā)生長；(2)抑制異常的雄激素受體的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)異硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代 謝物可分別從雄激素受體Ar、AR上游基因spl和AR下游基因SPA三個(gè)方面抑制異常的雄 激素受體的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)(可參考前文所述的中國專利申請(qǐng)200610126892. 5)。因此，本發(fā)明的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代謝物除了可促進(jìn)預(yù)防和/或 治療普通的脫發(fā)之外，還可有效地預(yù)防和/或治療普通藥物、食品、保健品或化妝品難以有 效預(yù)防或治療的雄激素性脫發(fā)。并且，在預(yù)防和/或治療脫發(fā)的同時(shí)，還可用于治療因雄激 素過量導(dǎo)致的普通粉刺或皮脂溢，達(dá)到綜合美容的效果。由此，本發(fā)明中還提供了異硫氰酸酯類化合物及其組合物在促進(jìn)毛發(fā)生長中的用 途，其可用于治療目的的脫發(fā)臨床治療和/或預(yù)防，也可用于非治療目的的美容和/或保 健?；蛘撸蓪⒈景l(fā)明的異硫氰酸酯類化合物及其組合物施用于其它哺乳動(dòng)物，尤其是賞毛 動(dòng)物(例如寵物犬、貓等)。組合物和施用方法本發(fā)明所述組合物可以是藥物組合物(藥品)、食品、保健品或化妝品，其中含有 有效量的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代謝物；藥學(xué)、食品學(xué)、保健品學(xué)或化妝品學(xué)上 可接受的載體或賦形劑；以及任選的其它促進(jìn)毛發(fā)生長的活性物質(zhì)。如本文所用，術(shù)語“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……構(gòu)成”、和 “由……構(gòu)成”。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)、食品學(xué)、保健品學(xué)或化妝品學(xué)上可接受的”的成分 是適用于人和/或動(dòng)物而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))的，即有合理的效 益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。如本文所用，術(shù)語“有效量”是指可對(duì)人和/或動(dòng)物產(chǎn)生功能或活性的 且可被人和/或動(dòng)物所接受的量。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”指用于治療劑給藥的載體，包括各種 賦形劑和稀釋劑。該術(shù)語指這樣一些藥劑載體它們本身并不是必要的活性成分，且施用 后沒有過分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。在《雷明頓藥物科學(xué)》 (Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Pub. Co. ,N. J. 1991)中可找到關(guān)于藥學(xué)上 可接受的賦形劑的充分討論。本發(fā)明的組合物中異硫氰酸酯類活性物質(zhì)有效成分占組合物總重量的 0. 001-99. 9襯％;優(yōu)選為組合物總重量的0. 01-90wt%，較優(yōu)選為0. 05_75wt%，余量為藥學(xué) 上可接受的載體以及其它添加劑等物質(zhì)。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述組合物為單位劑型或多劑型，且其中異硫 氰酸酯類活性物質(zhì)的含量為0. 001-3000mg/劑，優(yōu)選0. 01_2000mg/劑，更優(yōu)選0. l_1500mg/ 劑。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物中含有低劑量的異硫氰酸酯類活性物質(zhì)， 例如0. Ol-IOmg/劑，更優(yōu)選0. 05-8mg/劑，進(jìn)一步優(yōu)選含有0. l_5mg/劑；含有中劑量的異 硫氰酸酯類活性物質(zhì)，例如I-IOOOmg/劑；更優(yōu)選5-800mg/劑，進(jìn)一步優(yōu)選10_500mg/齊lj， 更優(yōu)選15-200mg/劑；或高劑量的異硫氰酸酯類活性物質(zhì)(如作為可在施用前稀釋的濃縮 物)，例如其含量為100-3500mg/劑；更優(yōu)選500_3000mg/劑，進(jìn)一步優(yōu)選1000_2500mg/劑， 更優(yōu)選 1500-2000mg/ 劑。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選例中，每天一次或多次施用本發(fā)明的組合物，例如1、2、3、 4、5或6次。本發(fā)明所述的含有異硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代謝物的藥品、食品、保健 品、化妝品組合物，除如中國發(fā)明專利200610126892. 5所述，可以是適宜口服給藥的各種 劑型外，還可以是各種外用給藥制劑或其它胃腸道外給藥制劑。例如，本發(fā)明所述的外用給 藥制劑，還可以通過添加表面活性劑、透皮吸收促進(jìn)劑、防腐劑、溶劑、抗氧劑、保濕劑、PH調(diào) 節(jié)劑、著色劑、香料等輔料，進(jìn)一步制備成(包括但不限于)浴劑、洗劑、搽劑、酊劑、油齊U、 軟膏劑、硬膏劑、糊劑、熨劑、貼膏、貼片、涂膜劑、膜劑、凝膠劑、巴布劑、穴位貼敷劑、噴霧 劑、氣霧齊IJ、植入劑、乳劑、洗發(fā)液、和護(hù)發(fā)素等。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述的外用給藥制劑，可包含下列成份(a) 0-50重量份天然的或人工合成的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代謝物，所 述的異硫氰酸酯類化合物包括但不限于苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯、烯丙基異 硫氰酸酯、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯；所述衍生物、代謝物包括但不限于異硫氰酸酯類化 合物的N-乙酰半胱氨酸共軛物，優(yōu)選地是，苯乙基異硫氰酸酯-N-乙酰半胱氨酸共軛物、苯 甲基異硫氰酸酯-N-乙酰半胱氨酸共軛物、烯丙基異硫氰酸酯-N-乙酰半胱氨酸共軛物、 4-磺酸基苯基異硫氰酸酯-N-乙酰半胱氨酸共軛物； (b) 0-1000重量份活性成分載體，所述的活性成分載體選自油脂性基質(zhì)、水溶性基 質(zhì)(bl)油脂性基質(zhì)，所述的油脂性基質(zhì)選自凡士林、凡士林羊毛醇、石蠟、液狀石 蠟、液體石蠟羊毛醇、地蠟、蜂蠟、白蠟、黃蠟、鯨蠟、羊毛脂、豬油、羊油、麻油、花生油、玉米 油、大豆油、菜子油、芝麻油、葵花籽油、杏仁油、蓖麻油、橄欖油、棉籽油、二甲基硅油、氫化 植物油、中鏈甘油三酸酯、肉豆蔻酸異丙酯、硬脂酸、十六醇、十六醇酯蠟、十八醇、臨苯二甲 酸二酯、巴西棕櫚蠟、丙酮、石油醚、油酸乙酯、棕櫚酸異丙酯中的一種或一種以上組成的混 合物。(b2)水溶性基質(zhì)，所述水溶性基質(zhì)選自蒸餾水、乙醇、異丙醇、甘油、淀粉甘油、 單乙醇胺、丙三醇三乙酸酯、蟲膠、角豆膠、明膠、瓜耳膠、角叉菜膠、阿拉伯膠、西黃蓍膠、黃 原酸膠、殼聚糖、海藻酸鈉、甲基纖維素、羧甲纖維素、羧甲纖維素鈣、羧甲纖維素鈉、羥乙纖 維素、羥乙甲纖維素、羥丙纖維素、低取代羥丙纖維素、羥丙甲纖維素、羥丙甲纖維素酞酸 酯、卡波姆、聚乙二醇、膠體硅酸鎂鋁等的一種或一種以上組成的混合物。本發(fā)明所述的外 用給藥制劑，其特征在于，還可以通過添加如下輔料，進(jìn)一步制備成其它適宜的劑型，其所添加的其它輔料包括(i)0_200重量份乳化劑，所述乳化劑選自白蛋白、酪蛋白、卵磷脂、卡波姆、羊毛 脂、羊毛醇、膽固醇、鯨蠟醇、多庫酯鈉、硬脂酸棕櫚酸乙二醇酯、硬脂酸棕櫚酸甘油酯、三乙 醇胺硬脂酸新生皂、十二烷基硫酸鈉、單硬脂酸甘油酯、單油酸甘油酯、聚山梨酯、失水山梨 醇脂肪酸脂、平平加0、乳化劑0P、聚氧乙烯月桂醇醚、硬脂酸聚氧乙烯酯、維生素E琥珀酸 聚乙二醇酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、波洛沙姆、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷 酮、聚氧乙烯烷基醚、海藻酸丙二醇酯、山梨坦酯、硬脂酸、陰離子乳化蠟、非離子乳化蠟等 的一種或一種以上組成的混合物；(ii)0-20重量份透皮吸收促進(jìn)劑，所述的透皮吸收促進(jìn)劑選自四氫呋喃聚乙二 醇醚、α -吡咯酮、N-甲基吡咯酮、5-甲基吡咯酮、1-5-二甲基吡咯酮、N-乙基吡咯酮、5_羧 基吡咯酮、乙醇、丙二醇、癸醇、甘油、乙酸乙酯、二甲亞砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、癸 基甲基亞砜、油酸、油酸酯、亞油酸、亞油酸酯、月桂酸、月桂酸酯、肉豆蔻酸、肉豆蔻酸異丙 酯、月桂氮卓酮及其同系物、尿素、膽酸、膽酸鹽、水楊酸、薄荷油、桉葉油、桉樹腦、松節(jié)油、 氨基酸、磷脂、樟腦、檸檬烯、β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精、二甲基β-環(huán)糊精的一種或 一種以上組成的混合物。(iii)0_50重量份防腐劑，所述的防腐劑選自海克西定、咪唑烷脲、山梨酸、2-糠 酸、克菌丹，二甘醇單甲醚、己烯乙二醇、氯芐烷銨、洗必泰、苯甲酸類、氯甲酚、甲酚、尼泊金 類、三氯叔丁醇、苯扎氯銨、芐索氯銨、西曲溴銨、溴硝丙二醇、氯己定、羥苯丁酯、羥苯甲酯、 羥苯丙酯、羥苯乙酯、對(duì)氯間二甲苯、苯氧乙醇、丙酸鈉的一種或一種以上組成的混合物；(iv)0-50重量份抗氧劑，所述的抗氧劑選自VE、VC、抗壞血酸鈉、棕櫚酸維生素C 酯、丁羥茴醚、丁羥基甲苯(BHT)、氯甲酚、沒食子酸丙酯、焦性末食子酸乙酯或丙酯、二叔丁 對(duì)苯酚、叔丁對(duì)甲氧酚、枸櫞酸、酒石酸、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、巰基二丙酸和 亞硫酸鹽、焦亞硫酸鉀、焦亞硫酸鈉中的一種或一種以上組成的混合物；(ν) 0-50重量份其它添加劑所述的其它成分包括保濕劑、PH調(diào)節(jié)劑、著色劑、香 料等。所述的保濕劑可選自甘油、丙二醇、丁二醇、山梨醇、木糖醇、環(huán)甲基硅酮、海藻 糖、吡咯烷酮羧酸鈉、聚乙二醇、乳酸鈉、粘多糖、硫酸軟膏素、神經(jīng)酰胺、透明質(zhì)酸、幾丁質(zhì)、 幾丁聚糖、(錨絲保濕劑)乙酰基玻尿酸、蜂蜜中的一種或幾種混合物。所述的ρΗ調(diào)節(jié)劑可選自檸檬酸、檸檬酸鉀、枸櫞酸、富馬酸、乳酸、酒石酸、鹽酸、 磷酸、醋酸、蘋果酸、氫氧化鈉等、氨水、二甲醇胺、葡甲胺、氫氧化鉀、酒石酸一種或幾種混 合物。所述的著色劑可選自莧菜紅、姜黃素、核黃素、酒石黃、喹啉黃、日落黃、胭脂紅、 淡紅、赤蘚紅、麗春紅、阿洛拉紅、專利藍(lán)5、靛藍(lán)胭脂紅、亮藍(lán)FCF、葉綠素、葉綠素和葉綠酸 酮復(fù)合物、綠S、焦糖(醬色)、亮黑ΒΝ、活性炭、辣椒紅、類胡蘿卜素、辣椒玉紅素、番茄紅素、 葉黃素、斑蝥黃、甜菜根紅、花色素苷、花青素、翠雀苷色素、錦葵色素、天竺葵色素、芍藥花 色素、苯乙醇、二氧化鈦、氧化鐵、氫氧化鐵、礬土、鋁粉、青銅粉、碳酸鈣、斑蝥黃、云母等的 一種或一種以上組成的混合物。所述的矯香劑可選自薄荷油、薄荷腦、樟腦、冰片、香精、二甲醚、乙酸乙酯、乙基 香草醛等的一種或一種以上組成的混合物。
在本發(fā)明的藥品、食品、保健品、化妝品組合物中，較優(yōu)的如以苯乙基異硫氰酸酯 為有效成分的組合物，在治療相關(guān)疾病時(shí)，可以是單獨(dú)使用，也可以是聯(lián)合使用，如與外科 手術(shù)聯(lián)合使用或與一種或多種西藥聯(lián)合使用或與中草藥聯(lián)合使用或與放射性治療聯(lián)合使 用或與基因治療聯(lián)合使用或與生物調(diào)節(jié)劑聯(lián)合使用等。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)越性在于1.本發(fā)明首次證明了異硫氰酸酯類化合物能有效促進(jìn)毛發(fā)生長，從而為脫發(fā)臨床 預(yù)防和/或治療、美容或保健提供了新的途徑；2.本發(fā)明提供了異硫氰酸酯類化合物為有效成分的外用給藥制劑的組合配方，該 制劑對(duì)于促進(jìn)毛發(fā)生長非常有效；并且，活性成分異硫氰酸酯類化合物經(jīng)FDA認(rèn)證可安全 用于人體，具有高安全性；3.本發(fā)明揭示了異硫氰酸酯類化合物治療雄激素性脫發(fā)的獨(dú)特的作用機(jī)理異 硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代謝物分別從雄激素受體AR、AR上游基因spl和AR下游基 因SPA三個(gè)方面抑制異常的雄激素受體的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而有效治療雄性激素性脫發(fā)。實(shí)施例下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所 述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。^mm ι -.mmmmm^mikmm^實(shí)施例1-1 處方苯乙基異硫氰酸酯0.05%白凡士林50.00%黃蜂蠟4.95%液體石蠟40.00%單硬脂酸甘油酯5.00%工藝取處方量白凡士林、液體石蠟、黃蜂蠟加入到燒杯中加熱，使其熔化，攪拌均 勻，加入單硬脂酸甘油酯，攪勻。稱取處方量苯乙基異硫氰酸酯于另一燒杯中，將上述混勻 的液體以等量遞增法加入到裝有苯乙基異硫氰酸酯的燒杯中，混合均勻，繼續(xù)攪拌至自然 冷卻，待液體漸漸變成粘稠狀后，停止攪拌，即得。實(shí)施例1-2 處方苯甲基異硫氰酸酯0.75%白凡士林51.00%尼泊金丙酯0.03%黃蜂蠟7. 10%液體石蠟41. 12% 工藝取處方量白凡士林、尼泊金丙酯、液體石蠟、黃蜂蠟加入到燒杯中加熱，使其熔化，攪拌均勻。稱取處方量苯甲基異硫氰酸酯于另一燒杯中，將上述混勻的液體以等量遞 增法加入到裝有苯甲基異硫氰酸酯的燒杯中，混合均勻，繼續(xù)攪拌至自然冷卻，待液體漸漸 變成粘稠狀后，停止攪拌，即得。實(shí)施例1-3 處方烯丙基異硫氰酸酯2.50%白凡士林91.00%維生素E (生育酚)2.00%單硬脂酸甘油酯4.50%工藝取處方量白凡士林、維生素E加入到燒杯中加熱，使其熔化，攪拌均勻，加入 單硬脂酸甘油酯，攪勻。稱取處方量烯丙基異硫氰酸酯于另一燒杯中，將上述混勻的液體以 等量遞增法加入到裝有烯丙基異硫氰酸酯的燒杯中，混合均勻，繼續(xù)攪拌至自然冷卻，待液 體漸漸變成粘稠狀后，停止攪拌，即得。實(shí)施例1-4:處方苯乙基異硫氰酸酯5.00%白凡士林92. 00%尼泊金丙酯0.03%維生素E (生育酚)2.97%工藝取處方量白凡士林、尼泊金丙酯、維生素E加入到燒杯中加熱，使其熔化，攪 拌均勻。稱取處方量苯乙基異硫氰酸酯于另一燒杯中，將上述混勻的液體以等量遞增法加 入到裝有苯乙基異硫氰酸酯的燒杯中，混合均勻，繼續(xù)攪拌至自然冷卻，待液體漸漸變成粘
稠狀后，停止攪拌，即得。實(shí)施例1-5 處方PEITC-NAC1. 49%甘油9.91%三乙醇胺0.40%硬脂酸12.88%凡士林0.99%液體石蠟5.95%單硬脂酸甘油酯3.96%蒸餾水64.42%工藝將PEITC-NAC、甘油和三乙醇胺加入蒸餾水中，加熱溶解。取凡士林、硬脂 酸、液體石蠟、單硬脂酸甘油酯加熱融化形成油相。攪拌下將油相緩緩加入同溫的水溶液 中，繼續(xù)攪拌至完全冷凝，即得。實(shí)施例1-6 處方4_磺酸基苯基異硫氰酸酯0.29%硼酸鈉0.67%白蜂蠟6.73%十六醇7.69%凡士林17.31%
液體石蠟失水山梨醇脂肪酸酯80
41. 35% 2. 88% 1. 92% 21. 16%羊毛脂蒸餾水工藝將硼酸鈉加入蒸餾水中，加熱溶解，冷卻至室溫，加入4_磺酸基苯基異硫氰 酸酯，攪拌溶解，得均一透明溶液。取凡士林、白蜂蠟、十六醇、液體石蠟、失水山梨醇脂肪酸 酯80、羊毛脂加熱融化形成油相。攪拌下將水溶液緩緩加入同溫的油相，繼續(xù)攪拌至完全冷 凝，即得。實(shí)施例2 異硫氰酸酯類化合物的酊劑研究處方苯乙基異硫氰酸酯0.20%乙醇79.80%丙二醇20.00%工藝取乙醇和丙二醇置同一燒杯中，混合均勻。另取一燒杯，精密稱取處方量的 苯乙基異硫氰酸酯，倒入少量的基質(zhì)溶液，攪拌均勻后，再加入少量基質(zhì)，攪拌均勻，依法操 作，至足量的基質(zhì)，攪拌均勻停止，即得。實(shí)施例3 異硫氰酸酯類化合物的搽劑研究實(shí)施例3-1處方苯乙基異硫氰酸酯 2.00%蓖麻油20.00%維生素E1. 00%玉米油77.00%工藝取苯乙基異硫氰酸酯、蓖麻油、玉米油和維生素E混合均勻即得。實(shí)施例3-2處方PEITC-NAC0. 88%月桂氮卓酮1.77%甘油8.85%蒸餾水88.50%工藝取PEITC-NAC、月桂氮卓酮、甘油攪拌分散，加蒸餾水?dāng)嚢柚镣耆芙猓吹?。?shí)施例4 異硫氰酸酯類化合物的糊劑研究處方PEITC-NAC0. 88%西黃蓍膠1.77%羥丙甲纖維素1.00%甘油7.85%蒸餾水88.50%工藝取PEITC-NAC研細(xì)過篩，加適量蒸餾水研勻。取處方量羥丙甲纖維素，加蒸 餾水溶脹完全。再將西黃蓍膠與甘油調(diào)勻后，與羥丙甲纖維素和PEITC-NAC溶液混勻，加蒸 餾水至全量，即得。^MM 5.異硫》 酉旨類化合4勿的涂fl莫齊師開窮t
處方PEITC-NAC2. 50%
乙醇60. 00%
聚乙烯醇2. 50%
丙二醇10. 00%
蒸餾水25. 00%
工藝取聚乙烯醇加入蒸餾水，充分溶脹，加熱成膠漿液，乙醇與丙醇混勻，加入
PEITC-NAC攪拌至全溶，邊攪拌邊加入聚乙烯醇膠漿液，攪勻，即得。
處方4-冰片 薄荷腦 尼泊金 聚山梨酯80 蒸餾水
^酸基苯基異硫氰酸酯0.6%
工藝取蒸餾水約70ml至IOOml于燒杯內(nèi)，加尼泊金加熱至溶解，溶液放冷至室 溫，加入4-磺酸基苯基異硫氰酸酯，攪拌至溶解，得均一溶液；另取冰片、薄荷腦、聚山梨酯 80攪拌使溶解，加入上述溶液中，加蒸餾水至100%，即得。實(shí)施例7 軟膏中有效成分的穩(wěn)定件研究實(shí)驗(yàn)儀器S. C. 101型鼓風(fēng)電熱恒溫干燥箱浙江省嘉興縣新勝電熱儀器廠，METTLER AE100 電子天平瑞士梅特勒公司，SUMMIT HPLC 美國戴安公司。實(shí)驗(yàn)方法取上述實(shí)施例1-1、1-2、1_3和1_4中制劑適量，置潔凈西林瓶中，加橡膠塞，鋁蓋 密閉，置60°C條件下放置，于第0，5，10天取樣，高效液相色譜法考察含量的變化。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示 表1.穩(wěn)定性研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果
實(shí)施例60°C 10天活性成分與0天相比(% )1-1102.111-298. 61-3102. 21-4100. 9結(jié)果討論上述結(jié)果表明本研究試驗(yàn)條件下，受試軟膏中活性成分穩(wěn)定性良好。^MM 8 苯乙基異硫氰丨！!酉旨油膏朿H激t牛試騎
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處方8-1 苯乙基異硫氰酸酯0. 05%白凡士林50. 00%黃蜂蠟2. 50%尼泊金丙酯0.03%液體石蠟45.42%維生素E (生育酚)1.00%單硬脂酸甘油酯1.00%處方8-2 苯乙基異硫氰酸酯5.00%白凡士林50. 00%黃蜂蠟2.50%尼泊金丙酯0.03%液體石蠟40.47%維生素E (生育酚)1.00%單硬脂酸甘油酯1.00%工藝白凡士林+黃蜂蠟+液體石蠟+尼泊金丙酯置同一燒杯，加熱到100°C，攪 拌至均勻。攪拌降溫至約70 80°C，加入單硬脂酸甘油酯，攪拌均勻，加入維生素E，攪拌 均勻。約70°C保溫備用。另取一 25ml小燒杯，精密稱取處方量的苯乙基異硫氰酸酯，倒入 適量的基質(zhì)溶液，70°C保溫，攪拌至均勻，繼續(xù)加入適量基質(zhì)，攪拌至均勻，依法操作，直至 足量，攪拌至均勻。攪拌降溫，至接近粘稠時(shí)，分裝。給藥方式分別取約0. 05g上述軟膏涂抹在藥物研究人員的指定位置，觀察和記錄給藥期內(nèi) 皮膚變化，包括紅、腫、癢、疼痛、辣等不同程度的刺激性癥狀。表2.苯乙基異硫氰酸酯油膏刺激性試驗(yàn)
結(jié)果與討論上述實(shí)驗(yàn)表明，所試驗(yàn)的異硫氰酸酯類化合物外用制劑對(duì)人體皮膚 有一定的刺激性。比較不同劑量組人體刺激性反應(yīng)可見，這種刺激性與受試藥物中活性成 分的量正相關(guān)，即隨著受試藥物中活性成分的量的增加，刺激性相應(yīng)增大。低劑量組2小時(shí) 后，刺激性基本消失。高劑量組2小時(shí)后，手臂、手臂內(nèi)側(cè)和耳后的刺激性基本消失，相對(duì)敏 感的眼皮和唇上部仍然有一定的刺激性，但刺激性造成的損傷未經(jīng)治療，自然恢復(fù)。毛發(fā)生長影響因素的研究表明增加皮膚局部的血液循環(huán)，有助于毛發(fā)的生長。本 試驗(yàn)研究結(jié)果表明，受試藥物中活性成分類似于辣椒、大蒜和斑蝥酊，對(duì)皮膚有局部刺激作 用，可改善給藥部位血液循環(huán)，從而促進(jìn)毛發(fā)生長。^mm 9 mmmmm^m a^i /N Φ.材料與方法試劑苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)，由無錫杰西醫(yī)藥科技有限公司合成，HPLC測定 其含量(> 99% )；其它試劑均為市售化學(xué)純或分析純產(chǎn)品。器材MettlerAE 100 電子天平，Mettler PE 360 電子天平，VffR V-200/20-200 μ 1移液槍，吉利牌雙面刀片，奧林巴斯μ 1010數(shù)碼相機(jī)。動(dòng)物模型處于毛發(fā)生長終期的7周齡雄性C3H/HeN小鼠，購于揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心。供應(yīng)常規(guī)食物和飲用水，溫度20-26°C，明暗交替時(shí)間12h/12h。藥物治療受試鼠按重量隨機(jī)分組，一組給藥，一組陰性對(duì)照，每組9只。將每只受 試鼠背部剃去面積為3X4cm2的毛發(fā)作為試驗(yàn)區(qū)域。給藥組每天給藥一次，每周7天，共給 藥18天。每次給濃度為0.2%的PEITC酊劑200 μ 1，均勻涂布在試驗(yàn)區(qū)域。自給藥第一天起，觀察20天。陰性對(duì)照組同時(shí)給相等體積的空白基質(zhì)，平行比較。觀察與評(píng)價(jià)試驗(yàn)初期每隔一日對(duì)試驗(yàn)鼠處理區(qū)毛發(fā)生長狀況及藥物皮膚刺激性進(jìn)行觀察比 較。當(dāng)受試鼠觀察區(qū)域顏色加深，即粉紅色向暗灰色變化時(shí)，改為每日觀察，并拍照比較。(1)新生毛發(fā)生長評(píng)價(jià)毛發(fā)生長速度比較自小鼠被處理區(qū)域出現(xiàn)毛發(fā)生長第一跡象(皮膚顏色變深， 毛囊中的黑素細(xì)胞開始合成黑色素)時(shí)，根據(jù)表3的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)受試鼠的毛發(fā)生長速度。表3.毛發(fā)生長速度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)表3，對(duì)受試鼠進(jìn)行評(píng)分，以受試鼠達(dá)到++或更高(完全毛發(fā)生長初期)的小 鼠的百分率對(duì)給藥天數(shù)作圖(圖1)，評(píng)價(jià)毛發(fā)的生長。從圖1可看出，給藥組給藥第11天時(shí)，約30%的小鼠達(dá)到++或更高，第12天時(shí)， 100%的小鼠達(dá)到++或更高；陰性對(duì)照組給藥第11天時(shí)，約20%的小鼠達(dá)到++或更高，第 12天時(shí)，約30%的小鼠達(dá)到++或更高，第16天時(shí)，小鼠才100%達(dá)到++或更高。這說明給 藥組毛發(fā)生長速度明顯優(yōu)于陰性對(duì)照組，意味著藥物的使用縮短了毛發(fā)生長終止期，促使 受試小鼠更快進(jìn)入毛發(fā)生長初期。新生毛發(fā)面積比較給藥第18天時(shí)，給藥組所有小鼠的處理區(qū)域均覆蓋了一層密 而厚的新生毛發(fā)，覆蓋率為100%，而陰性對(duì)照組中尚有部分小鼠的處理區(qū)域未全部長毛。 測量未長毛區(qū)域面積，計(jì)算得陰性對(duì)照組小鼠處理區(qū)域的平均毛發(fā)覆蓋率為87.9%，結(jié)果 見表4，據(jù)此作圖比較(圖2)。表4.新生毛發(fā)面積比較
表4中兩組數(shù)據(jù)P < 0. 05，具有顯著性差異。試驗(yàn)結(jié)果說明，給藥組小鼠處理區(qū)域 新生毛發(fā)面積顯著大于陰性對(duì)照組。新生毛發(fā)質(zhì)量比較給藥后第20天，外觀上看，盡管試驗(yàn)鼠的處理區(qū)域均有新生 毛發(fā)，但給藥組處理區(qū)域的新生毛發(fā)較密且長，而陰性對(duì)照組較稀且短。為了定量研究這一 差異，分別取陰性對(duì)照組和給藥組中每只小鼠，在處理區(qū)域的同一位置剃取IXlcm2區(qū)域的 新生毛發(fā)，合并后分別用電子天平稱重。結(jié)果見圖3，同等面積剃取的小鼠新生毛發(fā)的總重 在陰性對(duì)照組中為0. 0157g，給藥組為0. 0278g,陰性對(duì)照組僅為給藥組的56. 5%。這從新 生毛發(fā)的質(zhì)量角度，說明試驗(yàn)藥物的確促進(jìn)了新生毛發(fā)的生長。新生毛發(fā)直觀比較由圖4可見，給藥第11天，給藥組小鼠絕大部分處理區(qū)域顏 色加深，而陰性對(duì)照組小鼠處理區(qū)域仍為粉紅色；由圖5可見，給藥第13天，給藥組小鼠處 理區(qū)域顏色進(jìn)一步加深且可見新生毛發(fā)，陰性對(duì)照組小鼠處理區(qū)域的顏色開始加深；由圖 6可見，給藥第18天，給藥組小鼠處理區(qū)域新生毛發(fā)密、長、粗，而陰性對(duì)照組大部分則稀、 短、細(xì)，因此可直觀的看出給藥組小鼠新生毛發(fā)的生長明顯好于陰性對(duì)照組。(2)刺激性評(píng)價(jià)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，陰性對(duì)照組未觀察到任何刺激性癥狀；給藥組 在給藥初期時(shí)皮膚紅色加深，稍后仔細(xì)觀察可見細(xì)微脫皮，但至給藥的中后期，上述癥狀逐 漸減弱直至消失。結(jié)論處于毛發(fā)生長終期的7周齡雄性C3HAfeN小鼠，一旦被剃毛，皮膚呈粉紅色(毛發(fā) 生長終止期的視覺跡象)。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，受試鼠毛發(fā)生長初期的第一跡象是毛囊中的黑色 素細(xì)胞開始合成黑色素，從而導(dǎo)致皮膚顏色加深，可以觀察到新生毛發(fā)的生長過程。本試驗(yàn)分別從新生毛發(fā)的生長速度、生長面積和生長質(zhì)量三方面觀察和研究了給 藥組和對(duì)照組的差異。綜合上述試驗(yàn)結(jié)果可知，不論是處理區(qū)域的毛發(fā)生長速度，還是生長 面積或生長密度，給藥組均明顯優(yōu)于陰性對(duì)照組。這些結(jié)果說明試驗(yàn)藥物中的活性成分異 硫氰酸酯類化合物的確可以有效促進(jìn)新生毛發(fā)的生長。實(shí)施例10 苯乙基異硫氰酸酯對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管、呼吸系統(tǒng)的影響試劑苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)，由無錫杰西醫(yī)藥科技有限公司合成，HPLC測定 其含量(> 99% )；其它試劑均為市售化學(xué)純或分析純產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用SPSS 10. Ofor windows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。試驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)ICR小鼠，7周齡，體重18 20g，雌雄各半，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，環(huán)境溫度20 25°C，相對(duì)濕度40% 70%。普通級(jí)Beagle犬，10 11月齡，體重8 11kg，雌雄各半，由南京安立默科技有 限公司提供，環(huán)境溫度20 25°C，相對(duì)濕度40% 70%。試驗(yàn)方法與結(jié)果中樞神經(jīng)系統(tǒng)一次經(jīng)口給予小鼠30mg/kg劑量的苯乙基異硫氰酸酯，觀察苯乙基異硫氰酸酯對(duì) 小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響。結(jié)果如下(1)定性觀察及半定量評(píng)價(jià)試驗(yàn)經(jīng)口給予苯乙基異硫氰酸酯后30、60、90、120分 鐘，動(dòng)物的外表、毛發(fā)、姿勢、步態(tài)正常，無麻醉、催眠、鎮(zhèn)靜等作用，無體位變化；對(duì)痛覺和光 反射活動(dòng)正常，瞳孔反射正常；對(duì)小鼠翻正反射、被動(dòng)狀態(tài)、肌顫、流涎和眼球震顫無影響。(2)避暗試驗(yàn)經(jīng)口給予苯乙基異硫氰酸酯后30、60、90、120分鐘各時(shí)間段潛伏 期、錯(cuò)誤次數(shù)，給藥組與對(duì)照組比較，無顯著性差異。(3)開闊場試驗(yàn)給藥后90分鐘，給藥組雄性小鼠舉前肢次數(shù)多于對(duì)照組(ρ < 0. 01)，其余各項(xiàng)指標(biāo)在給藥后30、60、90、120分鐘，給藥組與對(duì)照組比較，均無顯著性差
已(4)平衡試驗(yàn)給藥后30、60、90、120分鐘，給藥組與對(duì)照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均無顯
著性差異。心血管和呼吸系統(tǒng)一次經(jīng)口給予Beagle犬3mg/kg劑量的苯乙基異硫氰酸酯，觀察其對(duì)Beagle犬心 血管、呼吸系統(tǒng)的影響。給藥后0、5、15、30、60、90、120、240分鐘，給藥組與對(duì)照組比較，均
無顯著性差異。綜上所述，在本試驗(yàn)條件下未見苯乙基異硫氰酸酯對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管和呼 吸系統(tǒng)的明顯影響。^mm H 乙基異硫氰,si酉旨長其m申用安Φ^Η式騎試劑苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)，由無錫杰西醫(yī)藥科技有限公司合成，HPLC測定 其含量(> 99% )；其它試劑均為市售化學(xué)純或分析純產(chǎn)品。器材長春迪瑞Η-100尿液分析儀，CELL-DYN3700血細(xì)胞分析儀，SYSMEXXT_2000i 血球儀，日本Hitachi 7020生化自動(dòng)分析儀，Shamd成套病理設(shè)備作石蠟包埋，切片，HE染 色，olympus顯微鏡光鏡觀察，作組織學(xué)檢查，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 10. 0軟件統(tǒng)計(jì)處理。試驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)SD大鼠，雌、雄各半，體重80 100g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有 限公司提供，環(huán)境溫度20 25°C，相對(duì)濕度40% 70%。試驗(yàn)方法試驗(yàn)動(dòng)物檢疫5天，選擇123 149g體重的雄性大鼠按體重隨機(jī)分組， 選擇116 142g體重的雌性大鼠按體重隨機(jī)分對(duì)照雌組、對(duì)照雄組、給藥雌組和給藥雄組， 每組各20只。給藥組每天經(jīng)口灌胃給藥。每周6天，共6個(gè)月。藥物按20mg/kg用玉米油 稀釋，對(duì)照組給予玉米油。每周隨動(dòng)物體重變化調(diào)整一次給藥量。試驗(yàn)結(jié)果(1) 一般行為及動(dòng)物死亡情況動(dòng)物一般行為未見明顯異常。實(shí)驗(yàn)過程中無動(dòng)物死亡。(2)體重、攝食量及食飼率給藥組體重增長變化、攝食量與對(duì)照組比較未見顯著性差異。食飼效率變化未見明顯規(guī)律性。(3)尿常規(guī)尿液外觀未見明顯的異常。尿常規(guī)檢查無顯著差異(P > 0. 05)。(4)血液學(xué)檢查血常規(guī)檢查無顯著性差異(ρ > 0. 05)。(5)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)給藥組與對(duì)照組比較無顯著性差異(ρ > 0. 05)。(6)凝血酶原時(shí)間檢查給藥組與對(duì)照組比較無顯著性差異(ρ > 0. 05)。(7)血液生化學(xué)檢查試驗(yàn)?zāi)┢诔坌源笫蠼MGLU略高，雌性大鼠組CREA略低外， 其余各項(xiàng)指標(biāo)給藥組與對(duì)照組比較無顯著性差異。(8)大體解剖和臟器系數(shù)檢查大體解剖未見明顯異常。臟器系數(shù)檢查各組臟器系數(shù)與對(duì)照組無顯著差異(P > 0. 05)。(9)病理組織學(xué)檢查給藥組與對(duì)照組未見兩組間有明顯差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，在本實(shí)驗(yàn)條件下，給藥組和對(duì)照組的動(dòng)物體重、血、尿常規(guī)、凝血時(shí) 間、血液生化和病理組織檢查與Omg/kg組比較無明顯差異。這說明長期使用受試藥物是安 全的。上世紀(jì)80年代，受試藥物被發(fā)現(xiàn)有可能預(yù)防吸煙誘發(fā)的肺癌。上世紀(jì)末，美國食 品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)了受試藥物作為肺癌預(yù)防用藥的I期臨床。2008年，該局又批準(zhǔn) 了受試藥物進(jìn)入II期臨床。作為健康人長期使用的預(yù)防用藥，其安全性是藥品審查過程中 最為關(guān)注的因素。本實(shí)施例的結(jié)果與FDA更為嚴(yán)格的驗(yàn)證均證實(shí)了本發(fā)明活性藥物的高安 全性。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物在制備促進(jìn)對(duì)象毛發(fā)生長的組合物中的應(yīng)用R1 X NCS通式I在通式I中NCS為異硫氰酸酯基；X為 (CH2)n ，n為0 4的整數(shù)；R1為多取代或單取代或未取代的苯基或C2 4烯基，所述取代基選自磺酸基、氨基磺酸基、鹵素、甲基、乙基、甲氧基、甲硫基、甲酰氨基、乙酰氨基、甲氨基、乙氨基、羧基和氰基；通式II通式II中R1和X如通式I中所定義；R3為氫或通過硫原子與的碳原子連接的衍生自以下化合物的基團(tuán)N 乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、半胱氨酸(C1 C6烷基)酯、半胱氨酰氨基酸和半胱氨酰氨基酸(C1 C6烷基)酯。F2009100522316C0000011.tif,F2009100522316C0000012.tif
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于R1為多取代或單取代或未取代的苯基或C2_4烯基，所述取代基選自磺酸基、氨基磺酸 基、氟、氯、溴、甲基、乙基、甲氧基、甲硫基、甲酰氨基、乙酰氨基、甲氨基、羧基和氰基；R3為氫或通過硫原子與的碳原子連接的衍生自以下化合物的基團(tuán)N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、半胱氨酸(Ci-C；烷基)酯、半胱氨酰氨基酸和半胱氨酰氨基酸(Q-C；烷基) 酯，其中所述氨基酸選自下組甘氨酸、谷氨酸、絲氨酸、丙氨酸或蛋氨酸。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述異硫氰酸酯類化合物為選自結(jié)構(gòu)式 (1) (8)化合物中的一種或多種
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述促進(jìn)毛發(fā)生長針對(duì)選自下組的疾病或 征狀毛發(fā)異常脫落或毛發(fā)稀少。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述毛發(fā)異常脫落選自雄性激素性脫發(fā)、 斑禿、假性斑禿、脂溢性脫發(fā)、生長期脫發(fā)或休止期脫發(fā)。
6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述組合物選自藥物組合物、食品、保健品 或化妝品。
7.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述組合物的劑型選自浴劑、洗劑、搽劑、 酊劑、油劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、熨劑、貼膏、貼片、涂膜劑、膜劑、凝膠劑、巴布劑、穴位貼 敷齊IJ、噴霧齊IJ、氣霧齊IJ、植入劑、乳劑、洗發(fā)液、護(hù)發(fā)素、栓劑、片齊IJ、膠囊、丸齊IJ、注射用粉針、 注射劑或凍干粉劑。
8.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述組合物還含有其它預(yù)防和/或治療脫發(fā) 的活性物質(zhì)。
9.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，在使用所述組合物之前、同時(shí)或之后，配合 使用所述其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活性物質(zhì)、實(shí)施針對(duì)脫發(fā)的外科手術(shù)或給予針對(duì)脫發(fā) 的放射性治療。
10.一種組合物，其含有(A)有效量的通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物Ri-X-NCS通式 I在通式I中NCS為異硫氰酸酯基；X為-(CH2)n-，n為0-4的整數(shù)；R1為多取代或單取代或未取代的苯基或C2_4烯基，所述取代基選自磺酸基、氨基磺酸 基、鹵素、甲基、乙基、甲氧基、甲硫基、甲酰氨基、乙酰氨基、甲氨基、乙氨基、羧基和氰基；Rl.X j-l-W通式 II通式II中R1和X如通式I中所定義；R3為氫或通過硫原子與的碳原子連接的衍生自以下化合物的一價(jià)基團(tuán)N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、半胱氨酸(Ci-C；烷基)酯、半胱氨酰甘氨酸、半胱氨酰甘氨酸((^-(；烷 基)酯、半胱氨酰谷氨酸、半胱氨酰谷氨酸(Q-C；烷基)酯、半胱氨酰丙氨酸、半胱氨酰丙氨 酸(Q-C；烷基)酯、半胱氨酰絲氨酸、半胱氨酰絲氨酸((^-(；基)酯、半胱氨酰蛋氨酸或半 胱氨酰蛋氨酸(crc6烷基)酯；(B)藥學(xué)上可接受的載體、食品、保健品或化妝品可接受的載體；(C)一種或多種其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活性物質(zhì)。
11.如權(quán)利要求10所述的組合物，其特征在于，所述組合物中的載體為油脂性基質(zhì)或 水溶性基質(zhì)。
12.如權(quán)利要求11所述的組合物，其特征在于，所述油脂性基質(zhì)為選自(bl)中的一種 或多種，所述水溶性基質(zhì)為選自(b2)中的一種或多種(bl)凡士林、凡士林羊毛醇、石蠟、液狀石蠟、液體石蠟羊毛醇、地蠟、蜂蠟、白蠟、黃蠟、 鯨蠟、羊毛脂、豬油、羊油、麻油、花生油、玉米油、大豆油、菜子油、芝麻油、葵花籽油、杏仁 油、蓖麻油、橄欖油、棉籽油、二甲基硅油、氫化植物油、中鏈甘油三酸酯、肉豆蔻酸異丙酯、 硬脂酸、十六醇、十六醇酯蠟、十八醇、臨苯二甲酸二酯、巴西棕櫚蠟、丙酮、石油醚、油酸乙 酯或棕櫚酸異丙酯；或(b2)蒸餾水、乙醇、異丙醇、甘油、淀粉甘油、單乙醇胺、丙三醇三乙酸酯、蟲膠、角豆膠、 明膠、瓜耳膠、角叉菜膠、阿拉伯膠、西黃蓍膠、黃原酸膠、殼聚糖、海藻酸鈉、甲基纖維素、羧甲纖維素、羧甲纖維素鈣、羧甲纖維素鈉、羥乙纖維素、羥乙甲纖維素、羥丙纖維素、低取代 羥丙纖維素、羥丙甲纖維素、羥丙甲纖維素酞酸酯、卡波姆、聚乙二醇或膠體硅酸鎂鋁。
13.如權(quán)利要求10所述的組合物，其特征在于，所述其它預(yù)防和/或治療脫發(fā)的活性物 質(zhì)為選自下組的一種或多種5 a-還原酶抑制劑、雄激素拮抗劑或鉀離子通道開放劑。
14.一種美容方法，所述方法包括給予對(duì)象通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有 通式II的衍生物或權(quán)利要求10-13中任一項(xiàng)所述的組合物以促進(jìn)所述對(duì)象毛發(fā)的生長。
15.一種預(yù)防和/或治療脫發(fā)的方法，所述方法包括給予需要所述預(yù)防和/或治療的對(duì) 象有效量的通式I所示異硫氰酸酯類化合物或其具有通式II的衍生物。
全文摘要
本發(fā)明提供了異硫氰酸酯類化合物在促進(jìn)毛發(fā)生長中的應(yīng)用。更具體而言，涉及天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物、代謝物在促進(jìn)毛發(fā)生長，尤其是治療和/或預(yù)防脫發(fā)(優(yōu)選雄激素性脫發(fā))中的新用途，及其相關(guān)的預(yù)防、治療和/或美容方法。本發(fā)明的方法和制劑可有效預(yù)防或治療脫發(fā)，且?guī)缀鯖]有現(xiàn)有相關(guān)藥物的副作用，具有廣泛的臨床應(yīng)用和市場開發(fā)前景。
文檔編號(hào)C07C333/24GK101897691SQ20091005223
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2009年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月31日
發(fā)明者程景才, 鐘成娟, 顧國林 申請(qǐng)人:無錫杰西醫(yī)藥科技有限公司