廣棗α-糖苷酶抑制活性有效提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種廣棗α-糖苷酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在降血糖、減肥、降血脂、治療糖尿病等方面的醫(yī)藥用途。廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100：12的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比為100：14石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，用100：14石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫的洗脫液經(jīng)回收溶劑，干燥，即得該提取物；或先用乙酸乙酯洗脫，繼用甲醇洗脫，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收溶劑，干燥，即得該提取物。
【專利說明】
廣棗α-糖苷酶抑制活性有效提取物及其組合物的醫(yī)藥用 途和制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種廣棗α -糖苷酶抑制活性提取物及其組合 物的制備方法以及它在降血糖、減肥、降血脂、治療糖尿病等方面的醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為漆樹科植物南酸率，學(xué)名 (Roxb. ) Burtt et Hill的干燥成熟果實(shí)。主要分布于我國南部名地。南酸棗果實(shí)含有豐富的營養(yǎng)成分，在產(chǎn) 地都有生食其果的習(xí)慣，是食品生產(chǎn)的好原料，干果實(shí)入藥名為廣棗，為維吾爾習(xí)用藥材。 南酸棗鮮果實(shí)可用于食滯腹痛；果核用于燒燙傷；樹皮入藥有解毒收斂、止血止痛之效，外 用治大面積水火燒燙傷。
[0003] 廣棗性平，味甘、酸，具有養(yǎng)心，安神，抗心肌缺血，保護(hù)心功能等作用，可用于氣滯 血瘀，胸痹作痛，心悸氣短，心神不安等癥狀?，F(xiàn)在藥理學(xué)研究證明廣棗具有誘導(dǎo)白血病細(xì) 胞系K562和K562/A02細(xì)胞凋亡的功效。
[0004] 本發(fā)明通過大規(guī)模、系統(tǒng)地活性篩選，意外地發(fā)現(xiàn)維吾爾藥廣棗提取物及其部分 化學(xué)組分，具有顯著地α -糖苷酶抑制活性，該活性提取物及其組合物有望應(yīng)用于降血糖、 減肥、降血脂、糖尿病等方面。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種廣棗提取物。
[0006] 本發(fā)明還提供了以廣棗提取物為主要活性成分的組合物。
[0007] 本發(fā)明同時(shí)提供了廣棗提取物及其組合物的制備和在制備α -糖苷酶抑制活性 藥物中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 維吾爾藥廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（Si02)柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫(石油醚-乙酸乙酯，比例見表1 )，各石油醚-乙 酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其α -糖苷酶抑制活 性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:12,體積比）洗 脫，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫得到的石油 醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比)洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥， 即為α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有α-糖苷酶抑制活性的作 用。最優(yōu)為先用100 :12的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用100 :14的石 油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫20倍柱體積的洗脫液干燥即為本發(fā)明α -糖苷酶抑制活性 的提取物。α -糖苷酶抑制活性的提取物，可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質(zhì)類 成分分離開。該廣棗α-糖苷酶抑制活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其薄層譜色譜（TLC)分 析表征如圖1，TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)顯 色方法：香草醛-硫酸顯色； 或維吾爾藥廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（Si02)柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫(石油醚-乙酸乙酯，比例見表1 )，各石油醚-乙 酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其α -糖苷酶抑制活 性，意外地發(fā)現(xiàn)先用乙酸乙酯洗脫，繼用甲醇洗脫得到的甲醇洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干 燥，即為α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有α-糖苷酶抑制活性的 作用。最優(yōu)為先用乙酸乙酯洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫20倍柱體積，甲醇洗脫液干燥 后即為本發(fā)明α-糖苷酶抑制活性的提取物。α-糖苷酶抑制活性的提取物，可以通過以上 方法得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該廣棗α-糖苷酶抑制活性提取物從未見 文獻(xiàn)報(bào)道，其薄層譜色譜（TLC)分析表征如圖2, TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石 油醚：乙酸乙酯：丙酮（1:1:1)顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0009] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下： 1、廣棗經(jīng)甲醇超聲提取物的制備 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 3勵(lì)217六，樣品0.1163 8，留樣0.00648，上樣量0.10998，拌樣硅膠0.8 8，空白硅膠5 8，石 油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)洗脫。
[0010] 2、石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果 取維吾爾藥廣棗20g，經(jīng)100ml甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物SN0217A 116. 3mg，留樣6. 4mg，剩余109. 9 mg。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠柱色譜，拌 樣硅膠500mg，空白硅膠5g，玻璃柱內(nèi)徑1. 6cm，石油醚：乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫(條件見表 1)，柱體積12. 5ml，每個(gè)梯度洗脫100ml，得到，各個(gè)濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑， 即得，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脫提取物，TLC分析結(jié)果見圖3,圖4, TLC分析條件：GF254硅 膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)，石油醚：乙酸乙酯：丙酮（1:1:1)，顯色 方法：香草醛-硫酸顯色。
3、抑制α-糖苷酶活性篩選方法和結(jié)果
1) 實(shí)驗(yàn)條件 a、 材料：DMSO(二甲基亞砜）（科密歐公司）；ΚΗ2Ρ04、Κ2ΗΡ0 4 ·3Η20(廣東汕頭市西隴化 工廠）；a -glucosidase 酶（美國 Sigma 公司）；PNPG(美國 Sigma 公司） b、 實(shí)驗(yàn)儀器：多功能酶標(biāo)儀 Bio-Rad Model 680 型（Bio-Rad Laboratories Inc.) 2) 實(shí)驗(yàn)方法和過程 樣品處理：將lmg待測樣品溶于20 μ L二甲基亞砜（DMSO)作為母液，取1 μ L母液加入 99 μ L緩沖鹽配成500 μ g · mL 1的樣品溶液。
[0012] 在96孔板中依次加入σ-glucosidase酶PBS溶液20 使其終濃度為0. 07 u/ mL，樣品濃度為500々g.mL1的PBS溶液10兒。冰浴5分鐘，加入底物PBS溶液20 使其終濃度為2. 5 mmol/1，用濃度為0. 1 M、pH 6. 84的PBS溶液補(bǔ)足體積為100 #L。加 過樣的96孔板在37 °C水浴30分鐘。于405 nm處測定反應(yīng)物的吸光度，并以阿卡波糖作 為陽性對照。樣品抑制σ-glucosidase酶活性比率用加樣品較空白對照的6?喧的比值來 表示。樣品抑制百分率按以下公式計(jì)算： 酶活性抑制率％ = [A空白-(A樣品-A背景）]/ A空白X 100 式中Aae :不加樣品反應(yīng)后的吸收值； :加入樣品反應(yīng)后的吸收值； :只加樣品的吸收值。
[0013] 3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 表2
結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 本發(fā)明較優(yōu)方案為：維吾爾藥廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上 樣后的硅膠柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚-乙酸乙酯，100:12,體積比）洗 脫，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫，用石油 醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶 劑，干燥，即為該提取物，即為該α-糖苷酶抑制活性提取物。該α-糖苷酶抑制活性提取 物從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖1。
[0014] 或維吾爾藥廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用乙酸乙酯洗脫，繼用甲醇洗脫，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該 提取物，即為該α-糖苷酶抑制活性提取物。該α-糖苷酶抑制活性提取物從未見文獻(xiàn)報(bào) 道，其TLC分析表征如圖2。
[0015] 4、α -糖苷酶抑制活性有效提取物的提取方法研究 1)提取溶劑的種類研究 分別用甲醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等 有機(jī)溶劑提取，并測試提取物的α-糖苷酶抑制活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 表3
研究結(jié)果表明：提取用有機(jī)溶劑可以為甲醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇 水混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0016] 2)提取溶劑的用量研究 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機(jī)溶劑提取，并測試提取物的 α -糖苷酶抑制活性，結(jié)果如下： 表4
活性提取物的提取所用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0017] 3 )干燥方法的研究 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對得到的 抑制α -糖苷酶活性提取物進(jìn)行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、 冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對α -糖苷酶抑制活性提取物進(jìn)行干 燥，其中，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0018] 表 5
因此，廣棗α-糖苷酶抑制活性提取物的制備方法為： 維吾爾藥廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用 石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:12,體積比）洗脫，洗脫2-50倍柱體 積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫2-50 倍柱體積，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫 液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該活性提取物。以上條件最優(yōu)為先用石油醚：乙酸乙酯混合 溶劑(石油醚：乙酸乙酯，100:12,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶 劑(石油醚：乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫20倍柱體積； 或維吾爾藥廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先 用乙酸乙酯洗脫，洗脫2-50倍柱體積，繼用甲醇洗脫，洗脫2-50倍柱體積，用甲醇洗脫的洗 脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該活性提取物。以上條件最優(yōu)為先用乙酸乙酯混合溶劑洗 脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫20倍柱體積。其中， 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、石油醚、水、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合 溶劑、乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇?；钚蕴崛∥锾崛∮糜袡C(jī)溶劑用量為藥 材重量的2-50倍(重量/體積比)。
[0019] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0020] 5.廣棗抑制α -糖苷酶活性提取物(體積比為100:14的石油醚-乙酸乙酯混合 溶劑洗脫得到的洗脫液或純甲醇得到的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為α-糖苷酶抑 制活性提取物。）的醫(yī)藥用途研究 按優(yōu)化的廣棗α-糖苷酶抑制活性提取物制備方法制備的活性提取物，經(jīng)測試，其 α -糖苷酶抑制活性為ICM=65. 0 μ g/mL。
[0021] 由于α_糖苷酶抑制劑具有降血糖、減肥、降血脂、糖尿病等方面的醫(yī)藥用途。因 此，我們發(fā)現(xiàn)的廣棗α-糖苷酶抑制活性提取物具有廣泛的醫(yī)藥用途。
[0022] 6、廣棗抑制α -糖苷酶活性提取物的組合物及其制備方法研究 1)固體分散體 處方 廣棗提取物 20 g Vc 1 g 聚乙烯吡咯烷酮 79 g 固體分散l〇〇g 制備方法： 稱取廣棗提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比分別放入 燒杯中，加入適量的無水乙醇和Vc，用磁力攪拌器攪拌至廣棗提取物和載體完全溶解，充分 混合均勻后轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得廣棗有效提取物PVP包 合物。
[0023] 2)環(huán)糊精包合物 處方： 廣棗提取物 20 g Vc 1 g β -環(huán)糊精 79 g 包合物lOOg 制備方法： 將β-環(huán)糊精與1-5倍水研勻，加廣棗有效提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有機(jī) 溶劑中）繼續(xù)充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得環(huán)糊精包合物。
[0024] 3)分散片處方：
預(yù)膠化淀粉 10 可溶性淀粉 1〇〇 交聯(lián)聚維酮 10 微晶纖維素 9 微分硅膠 0. 3 滑石粉 1 100片 制備方法： 1. 廣棗有效提取物分散體的制備，精密稱取廣棗提取物、Vc，加入處方量的十二烷基硫 酸鈉，用適量的濃度為70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫 度下蒸干，粉碎，過100目篩； 2. 將第一步中的廣棗有效提取物淀粉分散體與處方量的交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用 適量的濃度為70%乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min 后，60°C烘箱烘干45min，16目篩整粒，加入處方量的滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓 片即得。
[0025] 7、廣棗抑制α -糖苷酶活性提取物的檢測方法研究 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測和標(biāo)示廣棗α -糖苷酶抑制活性提取 物的特征。見圖1，圖2。
[0026] 具體條件為（圖1) :GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：乙酸乙酯（3:1:1) 顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0027] 具體條件為（圖2) :GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：乙酸乙酯（1:1:1) 顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0028]
【附圖說明】： 圖1廣棗α -糖苷酶抑制活性提取物的TLC色譜圖； 圖2廣棗α -糖苷酶抑制活性提取物的TLC色譜圖； 圖3廣棗溶劑提取物的TLC色譜圖； 圖4廣棗溶劑提取物的TLC色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 以下實(shí)施例表示本發(fā)明的實(shí)用性，本發(fā)明不受此限制。
[0030] 實(shí)施例1 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1. 6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,體積比)洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,體積比)洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該活性提取物。收率0. 01%。 經(jīng)測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=70. 0 μ g/mL。
[0031] 實(shí)施例2: 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1. 6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,體積比)洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經(jīng)測 試，其α -糖苷酶抑制活性為IC5Q=74. 0 μ g/mL。
[0032] 實(shí)施例3 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL石油醚超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（1. 6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙 酯，100:12，體積比)洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙 酸乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥法，即為該活性提取物。 經(jīng)測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=70. 0 μ g/mL。
[0033] 實(shí)施例4: 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL丙酮超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1. 6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,體積比)洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該活性提取物。經(jīng)測 試，其α -糖苷酶抑制活性為IC5Q=72. 0 μ g/mL。
[0034] 實(shí)施例5 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL氯仿超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1. 6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯， 100:12,體積比)洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙 酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離心干燥，即為該活性提取物。經(jīng)測 試，其α -糖苷酶抑制活性為IC5Q=68. 0 μ g/mL。
[0035] 實(shí)施例6 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙酸乙酯超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（1. 6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙 酯，100:12，體積比)洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸 乙酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙 酸乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經(jīng) 測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=58. Ο μ g/mL。
[0036] 實(shí)施例7 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15 min，提 取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混 合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:12,體積比）洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙 酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸 乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干 燥，即為該活性提取物。經(jīng)測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=73. Ο μ g/mL。
[0037] 實(shí)施例8 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15 min，提 取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸乙酯混 合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:12,體積比）洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙酸乙 酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙酸 乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干 燥，即為該活性提取物。經(jīng)測試，其α-糖苷酶抑制活性為IC 5(]=46.0 yg/mL。
[0038] 實(shí)施例9 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙醇-水混合溶劑（乙醇：水=90 :10)超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用石油醚-乙酸 乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:12，體積比)洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-乙 酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比)洗脫，洗脫20倍柱體積，用石油醚-乙 酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍 干燥，即為該活性提取物。經(jīng)測試，其α-糖苷酶抑制活性為IC 5(]=60.0 yg/mL。
[0039] 實(shí)施例10 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫， 洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該活性提取物。即 為該活性提取物。經(jīng)測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=74. Ο μ g/mL。
[0040] 實(shí)施例11 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫， 洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經(jīng) 測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=77. Ο μ g/mL。
[0041] 實(shí)施例12: 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL石油醚超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗 脫，洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥法，即為該活性提取 物。經(jīng)測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=72. Ο μ g/mL。
[0042] 實(shí)施例13 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL丙酮超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫， 洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該活性提取物。經(jīng) 測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=70. 0 μ g/mL。
[0043] 實(shí)施例14: 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL氯仿超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離， 上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫， 洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離心干燥，即為該活性提取物。經(jīng) 測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=73. 0 μ g/mL。
[0044] 實(shí)施例15 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙酸乙酯超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫10倍柱體積，繼用甲醇 洗脫，洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該活性提取 物。經(jīng)測試，其α -糖苷酶抑制活性為ICM=64. 0 μ g/mL。
[0045] 實(shí)施例16 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取15 min，提 取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫 10倍柱體積，繼用甲醇洗脫，洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍 干燥，即為該活性提取物。經(jīng)測試，其α-糖苷酶抑制活性為IC 5(]=76.0 yg/mL。
[0046] 實(shí)施例17 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取15 min，提 取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗脫，洗脫 10倍柱體積，繼用甲醇洗脫，洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍 干燥，即為該活性提取物。經(jīng)測試，其α-糖苷酶抑制活性為IC 5(]=61.0 yg/mL。
[0047] 實(shí)施例18 : 取維吾爾藥廣棗20 g，經(jīng)100 mL乙醇-水混合溶劑（乙醇：水=90 :10)超聲提取15 min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（1.6 cm內(nèi)徑小柱)，先用乙酸乙酯洗 脫，洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫，洗脫20倍柱體積，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶 劑，冷凍干燥，即為該活性提取物。經(jīng)測試，其α-糖苷酶抑制活性為IC 5(]=68.0 yg/mL。
[0048] 實(shí)施例19:固體分散體 稱取廣棗提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比分別放入 燒杯中，加入適量的無水乙醇和Vc，用磁力攪拌器攪拌至廣棗提取物和載體完全溶解，充分 混合均勻后轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得廣棗有效提取物PVP包 合物。
[0049] 實(shí)施例20 :環(huán)糊精包合物 將β-環(huán)糊精與1-5倍水研勻，加廣棗有效提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有機(jī) 溶劑中）繼續(xù)充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得環(huán)糊精包合物。
[0050] 實(shí)施例21 :分散片 1.廣棗有效提取物分散體的制備，精密稱取廣棗提取物、Vc，加入處方量的十二烷基硫 酸鈉，用適量的濃度為70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫 度下蒸干，粉碎，過100目篩； 2.將第一步中的廣棗有效提取物淀粉分散體與處方量的交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用 適量的濃度為70%乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min 后，60°C烘箱烘干45min，16目篩整粒，加入處方量的滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片 即得。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種廣棗提取物，其特征為廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上 樣后的硅膠柱，先用體積比為100 :12的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比為 100 :14石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，用100 :14石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫的洗 脫液經(jīng)回收溶劑，干燥，即為該提取物； 或先用乙酸乙酯洗脫，繼用甲醇洗脫，用甲醇洗脫的洗脫液經(jīng)回收溶劑，干燥，即為該 提取物。2. 如權(quán)利要求1所述廣棗提取物，其特征為，提取所用溶劑可以為甲醇、石油醚、水、乙 酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，最優(yōu)為甲醇或95%乙醇。3. 如權(quán)利要求1所述廣棗提取物，其特征為廣棗經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅 膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:12， 體積比）洗脫，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比）洗脫， 用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑(石油醚-乙酸乙酯，100:14,體積比)洗脫的洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物；或先用乙酸乙酯洗脫，洗脫，繼用甲醇洗脫，甲醇溶劑洗脫的 洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物。4. 如權(quán)利要求1-3所述維的維吾爾藥廣棗提取物，其特征為，洗脫液的用量為2-50倍 柱體積。5. 如權(quán)利要求1_3所述提取物的制備方法，其特征為：最優(yōu)為先用100 :12的石油 醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用100 :14的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫 20倍柱體積；或最優(yōu)為先用乙酸乙酯洗脫10倍柱體積，繼用甲醇洗脫20倍柱體積。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥廣棗提 取物和藥學(xué)上可接受的載體。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的廣棗提取物或權(quán)利 要求6所述的藥物組合物。8. 如權(quán)利要求7所述的藥物制劑，其特征在于，所述的制劑為固體分散體、環(huán)糊精包合 物、分散片。9. 權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述提取物或權(quán)利要求6所述的組合物或權(quán)利要求7所述的 藥物制劑在制備α-糖苷酶抑制活性藥物中的應(yīng)用。10. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的α-糖苷酶抑制活性，可用于治療 阿爾茨海默?。ˋD)等方面的醫(yī)藥用途。11. 如權(quán)利要求1-5中任一種廣棗提取物，其特征在于，用TLC法檢測，其色譜條件為： GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1，顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。
【文檔編號】A61P25/28GK106031734SQ201510109415
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年3月12日
【發(fā)明人】王金輝, 李國玉, 王航宇, 黃健, 劉曉雪, 柳歡, 原朋彩
【申請人】石河子大學(xué)