一種具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用與流程

本發(fā)明屬于藥學(xué)領(lǐng)域，涉及靶向制劑及其制備方法和應(yīng)用，具體為一種具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

中藥成分一般具有多效性，在于“多靶點協(xié)同起效”，這些靶點往往位于不同靶區(qū)，并且不同靶區(qū)之間對藥量的要求往往不同，因此需要多靶區(qū)同時遞藥，并且在不同靶區(qū)之間能夠?qū)崿F(xiàn)遞藥比例的調(diào)節(jié)。

脂質(zhì)體和包合物都屬于制劑新技術(shù)的范疇，能夠提高遞藥的效果。近年來，環(huán)糊精主動靶向修飾技術(shù)發(fā)展很快，通過在環(huán)糊精表面連接如葉酸等配體，可以實現(xiàn)將載藥環(huán)糊精包合物主動靶向遞藥入胞(主要是腫瘤細(xì)胞)。但是，由于僅通過物理作用包合，載藥環(huán)糊精包合物給藥后在血液循環(huán)中很容易泄漏藥物，并且環(huán)糊精還有一定的腎靶向性，因此嚴(yán)重限制了靶向效果。

包合物脂質(zhì)體，即先將藥物載入環(huán)糊精中制成包合物，再載入脂質(zhì)體中制成包合物脂質(zhì)體。與包合物相比，包合物脂質(zhì)體的靶向性和穩(wěn)定性更好；與脂質(zhì)體相比，包合物脂質(zhì)體中的載藥包合物位于內(nèi)水相，藥物更加穩(wěn)定，并且環(huán)糊精本身也是良好的凍干保護(hù)劑。因此，包合物脂質(zhì)體是一種更加高效的載體，并且能夠應(yīng)用脂質(zhì)雙分子層和內(nèi)水相“雙重載藥”，但是并不能實現(xiàn)多靶區(qū)同時遞藥。

因此，亟需開發(fā)新的靶向制劑，以改善多靶區(qū)同時遞藥的效果，同時改善載體的載藥效果和穩(wěn)定性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體，所述復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體包括內(nèi)水相和脂質(zhì)雙分子層，以及脂質(zhì)體內(nèi)水相中的主動靶向的載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物，和脂質(zhì)雙分子層中的游離藥物。

根據(jù)本發(fā)明，所述磷脂熱敏脂質(zhì)體可以為磷脂類如二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)、氫化大豆磷脂、隱形材料dspe-peg2000(二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇)、單鏈磷脂mspc或膽固醇中的一種或多種。

根據(jù)本發(fā)明，所述載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物可以為將親脂性藥物或其混合物載入葉酸修飾環(huán)糊精構(gòu)成載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物。

優(yōu)選地，所述親脂性藥物優(yōu)選為油水分配系數(shù)大于10的親脂性藥物，例如為莪術(shù)油、莪術(shù)醇、吉馬酮、β-欖香烯、莪術(shù)二酮、姜黃素、去甲氧基姜黃素中的一種或多種。

根據(jù)本發(fā)明，所述游離藥物可以為未經(jīng)環(huán)糊精包合的藥物，例如上述親脂性藥物。

作為本發(fā)明的一個實例，將莪術(shù)油、莪術(shù)醇、吉馬酮、β-欖香烯或莪術(shù)二酮載入葉酸修飾環(huán)糊精包合物后將包封莪術(shù)油、莪術(shù)醇、吉馬酮、β-欖香烯或莪術(shù)二酮的葉酸修飾環(huán)糊精包合物和游離藥物分別載入磷脂熱敏脂質(zhì)體的內(nèi)水相和脂質(zhì)雙分子層。

根據(jù)本發(fā)明，所述復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體可以根據(jù)給藥需求調(diào)節(jié)載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物和游離藥物的比例，優(yōu)選地，所述游離藥物與載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物的摩爾比為0.1～5:1。

本發(fā)明還提供如上所述復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟：

1)將葉酸溶于二甲基亞砜中，加入催化劑反應(yīng)，再加入濃度為0.1～0.5g/ml的氨基-β-環(huán)糊精吡啶溶液，繼續(xù)攪拌，反應(yīng)得固體。將上述固體溶解于水中，靜置、過濾、濃縮、沉淀，沉淀經(jīng)洗滌后干燥，即得葉酸修飾環(huán)糊精；

2)取親脂性藥物與步驟1)所得葉酸修飾環(huán)糊精制備載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物；

3)采用膜材將步驟2)所得載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物及游離藥物載入脂質(zhì)體。

優(yōu)選地，步驟1)中，所述氨基-β-環(huán)糊精與葉酸的摩爾比可以為(1-5):1。所述催化劑可以為n-羥基琥珀酰亞胺和n,n-二環(huán)已基碳二亞胺中的一種或多種，其與氨基-β-環(huán)糊精的摩爾比為2.4:(1-5)，例如使用摩爾比為1.2:1.2:(1-5)的n-羥基琥珀酰亞胺、n,n-二環(huán)已基碳二亞胺與氨基-β-環(huán)糊精。

根據(jù)本發(fā)明，所述氨基-β-環(huán)糊精、葉酸與催化劑的反應(yīng)優(yōu)選在惰性氣體中不高于50℃的溫度下反應(yīng)1-48小時，例如將葉酸與催化劑在氮氣下室溫反應(yīng)3小時，加入氨基-β-環(huán)糊精后攪拌48小時，控溫至45℃繼續(xù)反應(yīng)2小時。

所述沉淀可以為將濃縮后的濃縮液加入葉酸修飾環(huán)糊精的不良溶劑如丙酮中，例如逐滴加入丙酮中。

根據(jù)本發(fā)明，步驟2)中，

所述親脂性藥物與葉酸修飾環(huán)糊精的摩爾比為0.2～5:1。

優(yōu)選通過飽和水溶液法或研磨法制備載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物。

根據(jù)本發(fā)明，步驟3)中，

所述磷脂熱敏脂質(zhì)體具有如上所述的定義，例如使用重量比為8:1～3:0.5～2:0.2～1的二棕櫚酰磷脂酰膽堿：氫化大豆磷脂：隱形材料dspe-peg2000(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇)：單鏈磷脂mspc作為膜材，如使用摩爾比為67.6:18.4:4:10的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)、氫化大豆磷脂(hspc)、隱形材料dspe-peg2000和單鏈磷脂mspc。

所述載藥葉酸修飾環(huán)糊精包合物與游離藥物的摩爾比可以為1:0.1～5。

本發(fā)明還提供如上所述復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的用途，其用于制備抗腫瘤藥物，例如用于制備具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的抗腫瘤藥物。

有益效果

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所制備的同時包封有游離藥物與葉酸修飾載藥環(huán)糊精包合物的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體可以實現(xiàn)同時作用于腫瘤細(xì)胞與腫瘤間質(zhì)，抗腫瘤效果得到增強。同時，現(xiàn)有技術(shù)中脂溶性藥物只能包封于脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層中，而本發(fā)明提供的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體中可以同時以游離藥物形式包封于脂質(zhì)雙分子層和以環(huán)糊精包合物形式包封于內(nèi)水相，因此載體的載藥效果和穩(wěn)定性也有顯著提升。本發(fā)明所述復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體給藥后，在靶部位釋放出游離藥物和主動靶向環(huán)糊精包合物。游離藥物主要作用于腫瘤間質(zhì)，主動靶向環(huán)糊精包合物通過葉酸受體介導(dǎo)進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，實現(xiàn)腫瘤間質(zhì)和腫瘤細(xì)胞雙靶區(qū)同時遞藥。并且可以靈活調(diào)節(jié)兩者的比例以獲得最佳治療效果。

附圖說明

圖1為實施例6包封莪術(shù)醇復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體在不同溫度下的釋放度比較(n＝3)。

圖2為實施例7包封莪術(shù)油復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的體外抗腫瘤效果(n＝5)。

具體實施方式

下文將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的化合物及其制備方法和應(yīng)用做更進(jìn)一步的詳細(xì)說明。下列實施例僅為示例性地說明和解釋本發(fā)明，而不應(yīng)被解釋為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均涵蓋在本發(fā)明旨在保護(hù)的范圍內(nèi)。

除非另有說明，實施例中使用的原料和試劑均為市售商品，或者可以通過已知方法制備。

實施例1具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的制備

1)取葉酸1份，溶于二甲基亞砜中，加入n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)1.2份和n,n-二環(huán)已基碳二亞胺(dcc)1.2份，在氮氣保護(hù)下避光磁力攪拌反應(yīng)3h，加入溶解在8ml吡啶中的氨基-β-環(huán)糊精1份，繼續(xù)攪拌48h，45℃繼續(xù)攪拌2h。減壓蒸去大部分溶劑，得到的固體溶解于300ml蒸餾水中，4℃靜置12小時，過濾，濾液減壓蒸至15ml后，逐滴加到300ml丙酮中，攪拌2h后取沉淀，丙酮洗滌后真空干燥過夜，即得葉酸修飾環(huán)糊精。

2)取莪術(shù)醇按1:1摩爾比與葉酸修飾環(huán)糊精采用飽和水溶液法制備載藥主動靶向包合物。將葉酸修飾環(huán)糊精溶解于水中制成飽和溶液，將莪術(shù)醇溶解在無水乙醇中，逐滴加入葉酸修飾環(huán)糊精飽和水溶液中，50℃攪拌揮去乙醇，靜置至室溫，過0.45μm濾膜，濾液冷凍干燥，即得載有莪術(shù)醇的葉酸修飾環(huán)糊精包合物。

3)取二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)：氫化大豆磷脂(hspc)：隱形材料dspe-peg2000：單鏈磷脂mspc(摩爾比為67.6:18.4:4:10)作為膜材，將莪術(shù)醇和上述脂質(zhì)一起溶解在無水乙醇中，將載有莪術(shù)醇的葉酸修飾環(huán)糊精包合物溶解在水相中，在磁力攪拌情況下將乙醇相注入水相，60℃攪拌1h揮去乙醇，超聲減小粒徑，即得同時包封莪術(shù)醇葉酸修飾環(huán)糊精包合物和游離莪術(shù)醇的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體。其中游離莪術(shù)醇與葉酸修飾環(huán)糊精包合物中的莪術(shù)醇比例為1:1。

實施例2具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的制備

參考實施例1的制備步驟，與實施例1不同的是，葉酸與氨基β-環(huán)糊精合成時的比例是1:2；載入的藥物為莪術(shù)油；莪術(shù)油與葉酸修飾環(huán)糊精制備包合物時的比例為5:1；脂質(zhì)體中游離莪術(shù)油與葉酸修飾環(huán)糊精包合物中的莪術(shù)油的比例為1:2。

實施例3具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的制備

參考實施例1的制備步驟，與實施例1不同的是，葉酸與氨基β-環(huán)糊精合成時的比例是0.2:1；載入的藥物為β-欖香烯；β-欖香烯與葉酸修飾環(huán)糊精制備包合物時的比例為2:1；脂質(zhì)體中游離β-欖香烯與葉酸修飾環(huán)糊精包合物中的β-欖香烯的比例為1:5。

實施例4具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的制備

參考實施例1的制備步驟，與實施例1不同的是，葉酸與氨基β-環(huán)糊精合成時的比例是1:5；載入的藥物為吉馬酮；吉馬酮與葉酸修飾環(huán)糊精制備包合物時的比例為1:5；脂質(zhì)體中游離吉馬酮與葉酸修飾環(huán)糊精包合物中的吉馬酮的比例為2:1。

實施例5具有雙靶區(qū)同時遞藥效果的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的制備

參考實施例1的制備步驟，與實施例1不同的是，葉酸與氨基β-環(huán)糊精合成時的比例是1:1；載入的藥物為莪術(shù)二酮；莪術(shù)二酮與葉酸修飾環(huán)糊精制備包合物時的比例為0.5:1；脂質(zhì)體中游離莪術(shù)二酮與葉酸修飾環(huán)糊精包合物中的莪術(shù)二酮的比例為1:3。

實施例6包封莪術(shù)醇復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的溫敏釋放度研究

將實施例1制備得到的包封莪術(shù)醇葉酸修飾環(huán)糊精包合物和游離莪術(shù)醇的復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體進(jìn)行溫敏釋放度研究。釋放介質(zhì)為ph7.4等滲磷酸鹽緩沖液(處方中含137mmol/lnacl、3mmol/lkcl、8mmol/lnahpo4、1mmol/lkh2po4)。將包封莪術(shù)醇復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體加入100ml釋放介質(zhì)中，于不同溫度恒溫磁力攪拌，于不同時間點取樣用截留分子量為100k的超濾管超濾，取超濾液采用hplc測定其中莪術(shù)醇濃度，計算釋放度，如圖1所示，可見莪術(shù)醇葉酸修飾環(huán)糊精包合物能夠迅速通過超濾膜，而復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體在42℃條件下快速完全釋放，在體溫37℃下釋放比較緩慢，說明復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體具有較好的溫敏釋放性能。

實施例7包封莪術(shù)油復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性研究

將實施例2制備得到的包封莪術(shù)油復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體進(jìn)行細(xì)胞毒性研究。采用葉酸受體高表達(dá)的人宮頸癌細(xì)胞hela細(xì)胞作為試驗對象，加入不同濃度的莪術(shù)油和包封莪術(shù)油復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體，42℃加熱1h，然后孵育24h，采用mtt法測定腫瘤細(xì)胞活力，計算抑制率，結(jié)果如圖2所示，可見包封莪術(shù)油復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的體外抗腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)高于游離莪術(shù)油。

實施例8包封β-欖香烯復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的抗腫瘤作用研究

將本發(fā)明實施例2制備得到的包封β-欖香烯復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體與β-欖香烯進(jìn)行抗腫瘤作用研究。采用葉酸受體高表達(dá)的人宮頸癌細(xì)胞hela細(xì)胞，裸鼠腋下接種，待腫瘤大小超過150mm³后開始給藥，每天靜脈給藥一次，劑量為100mg/kg，連續(xù)給藥5d，給藥后腫瘤部位42℃加熱1h，給藥后第7d處死動物，取腫瘤部位稱重，并計算抑制率，結(jié)果β-欖香烯和包封β-欖香烯復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的抑制率分別為34.66％和67.96％，可見采用包封β-欖香烯復(fù)合磷脂熱敏脂質(zhì)體的抗腫瘤效果提升了近一倍。

以上，對本發(fā)明的實施方式進(jìn)行了說明。但是，本發(fā)明不限定于上述實施方式。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。