本發(fā)明涉及保健食品領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種納豆激酶膠囊的制備方法。
背景技術(shù)：
納豆激酶一種絲氨酸蛋白酶，具有溶解血栓、降低血粘度、改善血液循環(huán)、軟化和增加血管彈性等功能，有助于預(yù)防、治療心腦血管疾病。納豆激酶具有雙重溶栓機(jī)制，溶栓活性強(qiáng)，半衰期長(zhǎng)，效果持久，且無(wú)副作用。
納豆激酶耐酸能力較差，當(dāng)pH<5時(shí)，納豆激酶活性逐漸喪失，處于胃酸（pH 1.2-3）的環(huán)境下1h幾乎完全失活。采用膠囊化可以提高納豆激酶的抗酸能力。但通過(guò)對(duì)收集到的8種納豆激酶膠囊進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)均不具備耐酸性，在模擬胃酸環(huán)境下放置2h，膠囊迅速崩解，酶活完全喪失。目前，納豆激酶膠囊技術(shù)還不夠完善，壁材在包被納豆激酶時(shí)其包埋率存在普遍偏低的現(xiàn)象。
因此本發(fā)明期望聯(lián)合運(yùn)用聚谷氨酸鈉和海藻酸鈉對(duì)納豆激酶進(jìn)行包被，制作成納豆激酶膠囊，以提高其抗酸能力。希望解決納豆激酶胃酸失活的問(wèn)題，并實(shí)現(xiàn)其在腸道環(huán)境中緩慢釋放的效果。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種抗酸能力強(qiáng)的納豆激酶膠囊。
本發(fā)明的另一目的是提供上述納豆激酶膠囊的制備方法。
本發(fā)明的納豆激酶膠囊，其中，所述膠囊是以聚谷氨酸鈉、海藻酸鈉在Ca2+的影響下耦合而成，膠囊內(nèi)納豆激酶活性為0.2-10 FU/g。
本發(fā)明的納豆激酶膠囊，在不同pH的酸性環(huán)境下保持1h，均能保持較高的活性，在模擬胃酸環(huán)境中能保持較高的酶活性。在模擬腸道的環(huán)境中能緩慢釋放，80min后達(dá)到完全釋放。
本發(fā)明的納豆激酶膠囊的制備方法，包括以下步驟
將聚谷氨酸鈉溶液、海藻酸鈉溶液和納豆激酶溶液以1：1：（0.5-1）質(zhì)量比相混合，將混合物置于磁力攪拌下100-300 r/min混合，其中聚谷氨酸鈉溶液濃度為1%-10%，納豆激酶溶液濃度為4-40 FU/mL，海藻酸鈉溶液濃度為1%-10%，混勻后用注射器吸取0.5-1mL滴入到1%-10%的CaCl2溶液中反應(yīng)10-20 min得到納豆激酶膠囊。
本發(fā)明所提供的納豆激酶膠囊及其制作方法，具有較強(qiáng)的實(shí)用性，其優(yōu)點(diǎn)如下：
1）將聚谷氨酸和海藻酸鈉這兩種無(wú)毒無(wú)害的物質(zhì)進(jìn)行有機(jī)的結(jié)合用于包被納豆激酶制得膠囊，該膠囊在不同pH的酸性環(huán)境下保持1h，還能保持有較高的納豆激酶生物活性。
2）體外釋放試驗(yàn)表明，本發(fā)明所述膠囊經(jīng)過(guò)模擬胃酸環(huán)境后，能保持較高的酶活性。在模擬腸道的環(huán)境中能緩慢釋放，80min后達(dá)到完全釋放。部分解決了納豆激酶胃酸失活問(wèn)題，并實(shí)現(xiàn)其在腸道環(huán)境中緩慢釋放的效果。
附圖說(shuō)明
圖1為納豆激酶發(fā)酵液及納豆激酶膠囊的抗酸性能，其中對(duì)照組為納豆激酶發(fā)酵液（游離納豆激酶）。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但所有實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制。
實(shí)施例1納豆激酶酶活測(cè)定
依次向試管中加入 1.4 mL Tris–HCl （50 mmol/L， pH 7. 8），0. 4 mL 纖維蛋白原溶液（0. 72%， w/v， g/mL），37°C 溫浴 5 min，再加入 0. 1 mL 凝血酶溶液（20 U/mL），37°C 溫浴 10 min 形成人工血栓，加入 0. 1 mL 的待測(cè)樣品，37°C 溫浴 60 分鐘，然后加入 2 mL 三氯乙酸（0. 2 mol/L）靜止 20 min 終止反應(yīng)，10000 r/min 離心 10 min，取上清液于 275 nm 處測(cè)定吸光度，每分鐘 275 nm 處吸光度增加0.01所需要的酶被定義為1個(gè)單位的纖維蛋白降解酶活（FU）。
實(shí)施例2納豆激酶膠囊的制備
將納豆激酶干粉配置成6FU/mL的納豆激酶溶液，將其與4%的聚谷氨酸鈉和2%的海藻酸鈉按照1：1：1的比例混合。磁力攪拌20 min后滴入到含8%CaCl2的乙醇溶液（乙醇濃度為80%）中，制成的納豆激酶膠囊其包埋率為45%，納豆激酶酶活為0.8 FU/g。
實(shí)施例3納豆激酶膠囊的制備
將納豆激酶干粉配置成20 FU/mL的納豆激酶溶液，將其與4%的聚谷氨酸和3%的海藻酸鈉按照0.5:1:1的比例混合。磁力攪拌10min后滴入到2%的CaCl2的乙醇溶液（乙醇濃度為80%）中制成的納豆激酶膠囊其包埋率為50%，納豆激酶酶活為1.8 FU/g。
實(shí)施例4納豆激酶膠囊的制備
將納豆激酶干粉配置成40 FU/mL的納豆激酶溶液，將其與4%的聚谷氨酸和3%的海藻酸鈉按照1:1:1的比例混合。磁力攪拌15 min后滴入到8%的CaCl2的乙醇溶液（乙醇濃度為40%）中制成的納豆激酶膠囊其包埋率為60%，納豆激酶酶活為7.5 FU/g。
實(shí)施例5納豆激酶膠囊特性試驗(yàn)
1）抗酸試驗(yàn)
以納豆激酶溶液為對(duì)照，將對(duì)照樣及納豆激酶膠囊分別暴露在不同的pH環(huán)境下：pH 2.5(0. 1mol/L HCl_)，pH 3.5(0. 1mol/L HCl)，pH 4. 5 (磷酸緩沖鹽體系) ，pH 5.5(磷酸緩沖鹽體系)，pH6.5(磷酸緩沖鹽體系)，pH 7.5(磷酸緩沖鹽體系)，分別處理1h后，然后將pH調(diào)至7.4，通過(guò)超聲處理30min破碎膠囊并混合均勻后檢測(cè)酶活。結(jié)果如附圖1所示，納豆激酶膠囊在不同pH條件下均能保持較高的活性，膠囊化提高了納豆激酶的抗酸性能。
2）體外釋放試驗(yàn)
將納豆激酶膠囊暴露在模擬胃酸條件下（pH 2.5，0. 1mol/L HCl），37℃，100r/min，處理1h，然后將其轉(zhuǎn)移到模擬腸道環(huán)境中（pH7. 4，磷酸緩沖體系），37℃繼續(xù)處理，80 min后，納豆激酶完全釋放。