一種利用硅膠色譜技術制備玉葡萄根活性部位的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及中藥活性部位應用領域，具體涉及一種利用硅膠色譜技術制備玉葡萄根活性部位的方法。該活性部位的制備方法，包括如下步驟：(1)將玉葡萄根用醇提取，得玉葡萄根醇提取物；(2)將得到的玉葡萄根醇提取物上硅膠柱，然后用洗脫劑A進行除雜；(3)再用洗脫機B進行洗脫，收集洗脫部位，濃縮、干燥得玉葡萄根活性部位。本發(fā)明制備得到的玉葡萄根活性部位具有很好的解酒效果，不僅尋找到了玉葡萄根的新用途，而且還利用中藥現(xiàn)代化手段從玉葡萄根中尋找到了解酒活性部位，可用于生產(chǎn)新的解酒藥物。另外，該玉葡萄根活性部位的制備方法簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種利用硅膠色譜技術制備玉葡萄根活性部位的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取物【技術領域】，具體涉及一種利用硅膠色譜技術制備玉葡萄根活性部位的方法。
【背景技術】
[0002]酒文化在我國具有數(shù)千年的歷史，現(xiàn)在的大多數(shù)社交活動及日常生活中離不開飲酒。但飲酒過量會引起頭痛眩暈、惡心嘔吐、記憶力減退、甚至不清等現(xiàn)象。飲酒過過量也會給家庭和社會帶來不良影響，如酒后破壞公物、擾亂社會治安、酒后駕駛導致嚴重交通事故等。另外經(jīng)常醉酒還會引發(fā)脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化等疾病。因此，開發(fā)一種解酒藥品或食品具有十分重要的意義。
[0003]解酒又稱“醒酒”，是指使人從醉酒的狀態(tài)中醒過來，恢復意識或回復自制力。通常不是自然清醒，而是采用某種方式快速解酒，起到節(jié)約時間的目的、減小乙醇對人體危害的目的。中藥解酒是一種很好的方法，中國古籍中記載了葛花、枳犋子、紫葛花、人參、桑葚等植物具有很好的解酒效果?，F(xiàn)有的解酒中藥多以中藥組合物形式存在，需要多種中藥混合在一起，雖然很多組合物具有很好的解酒效果，但是使用的還是中國傳統(tǒng)的中藥用藥方法。沒有將中藥使用現(xiàn)代化手段進行開發(fā)，即很少有以某種中藥為基礎開發(fā)其中的解酒有效部位的研究。由于中國擁有成千上萬種中藥材，目前醫(yī)藥古籍里記載的具有解酒效果的中藥材是屈指可數(shù)的 ，因此，另外尋找到一種具有解酒作用的中藥材不是件容易的事。又由于每種中藥材中又含有成千上萬種化學成分，即使醫(yī)藥古籍中記載了某藥材具有解酒作用，要進一步對其進行中藥現(xiàn)代化開發(fā)尋找其中的有效部位也需要進行大量的工作。
[0004]玉葡萄根為葡萄科蛇葡萄屬三裂蛇葡萄(Ampelopsis de lavayana Planch.)的根，本品為云南較常用的中草藥。別名金剛散。玉葡萄根為云南地區(qū)民間使用的草藥，能了解到的使用歷史約一百余年。本品具有祛風除濕，舒筋活絡，消腫鎮(zhèn)痛之功，用于跌打損傷等。是“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等系列藥品使用的藥材之一。曾收載于《中國藥典》(1977年版)、《云南省藥品標準》(1996年版)。到目前為止，并未有報道稱玉葡萄根中含有解酒或護肝作用的有效部位，醫(yī)藥古籍中也為提到玉葡萄根具有解酒作用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明所要解決的技術問題是，為了克服現(xiàn)有技術中中藥來源的具有解酒作用的活性部位的開發(fā)不足，提供一種利用硅膠色譜技術制備玉葡萄根活性部位的方法。
[0006]本發(fā)明所要解決的上述問題，通過以下技術方案予以實現(xiàn):
一種從玉葡萄根中制備活性部位的方法，所述活性部位具有解酒或護肝作用的，包括如下步驟:
(1)將玉葡萄根用醇提取，得玉葡萄根醇提取物；
(2)將得到的玉葡萄根醇提取物上硅膠柱，然后用洗脫劑A進行除雜；
(3)再用洗脫劑B進行洗脫，收集洗脫部位，濃縮、干燥得玉葡萄根活性部位；步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為92~94:8~6;
步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為85~88:15~12 ；
步驟(1)中所述的醇為甲或乙醇。
[0007]作為一種優(yōu)選方案，步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為93:7 ;步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為86:14。
[0008]作為一種進一步優(yōu)選方案，步驟(2)中洗脫劑A的用量為柱體積的31倍；步驟
(3)所述的洗脫劑B的用量為柱體積的31倍。
[0009]作為一種優(yōu)選方案，，步驟(2)中硅膠柱中使用的硅膠為200-300目的硅膠，用量為玉葡萄根醇提取物質(zhì)量的10-50倍。
[0010]作為一種優(yōu)選方案，所述制備方法，包括如下步驟:
(1)將玉葡萄根用95%乙醇提取，將提取液濃縮干燥、得玉葡萄根醇提取物；
(2)將得到的玉葡萄根醇提取物上裝有200-300目硅膠的硅膠柱，然后用洗脫劑A進行除雜；
(3)再用洗脫劑B進行洗脫，收集洗脫部位，濃縮、干燥得玉葡萄根活性部位；
步驟(2)中所述的硅膠，其用量為玉葡萄根醇提取物質(zhì)量的20-30倍；
步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己`烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為92~94:8~6;
步驟(2)中洗脫劑A的用量為柱體積的31倍；
步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為85~88:15~12 ；
步驟(3)所述的洗脫劑B的用量為柱體積的31倍。
[0011]作為一種最優(yōu)選方案，所述制備方法，，包括如下步驟:
(1)將玉葡萄根用95%乙醇提取，將提取液濃縮干燥、得玉葡萄根醇提取物；
(2)將得到的玉葡萄根醇提取物上裝有200-300目硅膠的硅膠柱，然后用洗脫劑A進行除雜；
(3)再用洗脫劑B進行洗脫，收集洗脫部位，濃縮、干燥得玉葡萄根活性部位；
步驟(2)中所述的硅膠，其用量為玉葡萄根醇提取物質(zhì)量的20倍；
步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為93:7;
步驟(2)中洗脫劑A的用量為柱體積的5倍；
步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為86:14;
步驟(3)所述的洗脫劑B的用量為柱體積的5倍。
[0012]上述柱體積等于硅膠柱中填料硅膠所占的體積。
[0013]作為一種優(yōu)選方案，步驟(1)中的提取方法為:甲醇或乙醇用量與玉葡萄根的用量比為0.5~1.0L: 100g，加熱回流提取，提取次數(shù)為I~3次，時間為0.5~2h，提取溫度為80~95°C，提取后將提取液濃縮干燥，得玉葡萄根提取物。
[0014]作為一種優(yōu)選方案，所述玉葡萄根為葡萄科蛇葡萄屬三裂蛇葡萄(Ampelopsisde lavayana Planch.)的根。一種由上述制備方法制備得到的玉葡萄根活性部位。
[0015]上述玉葡萄根活性部位在制備具有解酒或護肝作用的藥物或食品中的應用。
[0016]上述玉葡萄根活性部位在制備增強乙醇脫氫酶活性或降低血液中丙二醛含量的藥物中的應用。
[0017]作為一種優(yōu)選方案，所述的藥物含有治療有效量的玉葡萄根提取物和藥學上可接受的載體。
[0018]作為一種優(yōu)選方案，所述的食品為保健品食品或飲料。
[0019]所 述的解酒藥物制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、乳膏劑、口服液、針劑或粉針劑。
[0020]本發(fā)明制備得到的玉葡萄根活性部位具有很好的解酒效果，不僅尋找到了玉葡萄根的新用途，而且還利用中藥現(xiàn)代化手段從玉葡萄根中尋找到了解酒活性部位，僅需很少的用量即可達到很好的解酒效果，可用于生產(chǎn)新的解酒藥物。進一步研究表明，本發(fā)明制備得到的玉葡萄根活性部位能夠顯著的增強ADH (乙醇脫氫酶)的活性和降低血液中MDA (丙二醛)含量作用，具有很好的解酒護肝效果。另外，該玉葡萄根活性部位的制備方法簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0021]以下結(jié)合具體實施例來進一步解釋本發(fā)明，但實施例對本發(fā)明不做任何形式的限定。
[0022]實施例1玉葡萄根活性部位的制備
(1)將IKg干燥的玉葡萄根用12L體積分數(shù)為95%的乙醇加熱回流提取2次，每次lh，將提取液合并濃縮干燥，得玉葡萄根乙醇提取物50g ；
(2)將得到的玉葡萄根醇提取物，上裝有200-300目1000g硅膠的硅膠柱，柱體積(硅膠填料所占的體積)約2.5升；
(3)用12.5升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為93:7)進行洗脫除雜；
(4)用12.5升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為86:14)進行洗脫，收集洗脫液、濃縮干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0023]實施例2玉葡萄根活性部位的制備
(1)將IKg干燥的玉葡萄根用12L體積分數(shù)為95%的乙醇加熱回流提取2次，每次lh，將提取液合并濃縮干燥，得玉葡萄根乙醇提取物47g ；
(2)將得到的玉葡萄根醇提取物，上裝有200-300目1000g硅膠的硅膠柱，柱體積(硅膠填料所占的體積)約2.5升；
(3)用12.5升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為92:8)進行洗脫除雜；
(4)用12.5升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為88:12)進行洗脫，收集洗脫液、濃縮干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0024]實施例3玉葡萄根活性部位的制備
(I)將IKg干燥的玉葡萄根用12L體積分數(shù)為95%的乙醇加熱回流提取2次，每次lh，將提取液合并濃縮干燥，得玉葡萄根乙醇提取物55g ；(2)將得到的玉葡萄根醇提取物，上裝有200-300目1000g硅膠的硅膠柱，柱體積(硅膠填料所占的體積)約2.5升；
(3)用12.5升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為94:6)進行洗脫除雜；
(4)用12.5升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為85:15)進行洗脫，收集洗脫液、濃縮干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0025]實施例4玉葡萄根活性部位的制備
(1)將IKg干燥的玉葡萄根用12L體積分數(shù)為95%的乙醇加熱回流提取2次，每次lh，將提取液合并濃縮干燥，得玉葡萄根乙醇提取物50g ；
(2)將得到的玉葡萄根醇提取物，上裝有200-300目2500g硅膠的硅膠柱，柱體積(硅膠填料所占的體積)約6升；
(3)用50升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為93:7)進行洗脫除雜；
(4)用20升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為86:14)進行洗脫，收集洗脫液、濃縮干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0026]實施例5玉葡萄根活性部位的制備
(1)將IKg干燥的玉葡萄根用12L體積分數(shù)為95%的乙醇加熱回流提取2次，每次lh，將提取液合并濃縮干燥，得玉葡萄根乙醇提取物43g ；
(2)將得到的玉葡萄根醇提取物，上裝有200-300目500g硅膠的硅膠柱，柱體積(硅膠填料所占的體積)約1.2升；
(3)用4升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為93:7)進行洗脫除雜；
(4)用10升的環(huán)己烷/乙酸乙酯(體積比為86:14)進行洗脫，收集洗脫液、濃縮干燥即得玉葡萄根活性部位。
[0027]實施例6小鼠醉酒實驗
取昆明種小白鼠120只，雌雄兼用，體重18~20g，隨機分為6組，每組20只，設給予實施例I~5玉葡萄根活性部位的給藥組5組(取實施例1~5制備得到的玉葡萄根活性部位分別用水溶解備用)和不給藥的對照組I組。各組每天灌胃給酒(53度白酒)0.4ml/只，對照組每天給酒前30min，灌胃給水0.4ml，各給藥組每天給酒前30min，灌胃給藥0.4ml，連續(xù)進行30天。并分別在第2、5、10、15、20天時對小鼠進行翻正反射實驗，觀察給酒精后Ih內(nèi)小鼠出現(xiàn)翻正反射消失的只數(shù)，翻正反射消失可認為動物醉酒，進行每次翻正反射實驗時每只小鼠實驗5次，觀測結(jié)果，計算其醉倒率。
【權(quán)利要求】
1.一種利用硅膠色譜技術制備玉葡萄根活性部位的方法，其特征在于，所述活性部位具有解酒或護肝作用，包括如下步驟: (1)將玉葡萄根用醇提取，得玉葡萄根醇提取物； (2)將得到的玉葡萄根醇提取物上硅膠柱，然后用洗脫劑A進行除雜； (3)再用洗脫劑B進行洗脫，收集洗脫部位，濃縮、干燥得玉葡萄根活性部位； 步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為92~94:8~6; 步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為85~88:15~12 ； 步驟(1)中所述的醇為甲醇或乙醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為93:7 ;步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為86:14。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中洗脫劑A的用量為柱體積的31倍；步驟(3)所述的洗脫劑B的用量為柱體積的31倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中硅膠柱中使用的硅膠為200^300目的硅膠，用量為玉葡萄根醇提取物質(zhì)量的10-50倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)將玉葡萄根用95%乙醇提取，將提取液濃縮干燥，得玉葡萄根醇提取物； (2)將得到的玉葡萄根醇提取物上裝有200-300目硅膠的硅膠柱，然后用洗脫劑A進行除雜； (3)再用洗脫劑B進行洗脫，收集洗脫部位，濃縮、干燥得玉葡萄根活性部位； 步驟(2)中所述的硅膠，其用量為玉葡萄根醇提取物質(zhì)量的20-30倍； 步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為92~94:8~6; 步驟(2)中洗脫劑A的用量為柱體積的31倍； 步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為85~88:15~12 ； 步驟(3)所述的洗脫劑B的用量為柱體積的31倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)將玉葡萄根用95%乙醇提取，將提取液濃縮干燥、得玉葡萄根醇提取物； (2)將得到的玉葡萄根醇提取物上裝有200-300目硅膠的硅膠柱，然后用洗脫劑A進行除雜； (3)再用洗脫劑B進行洗脫，收集洗脫部位，濃縮、干燥得玉葡萄根活性部位； 步驟(2)中所述的硅膠，其用量為玉葡萄根醇提取物質(zhì)量的20倍； 步驟(2)所述的洗脫劑A為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為93:7; 步驟(2)中洗脫劑A的用量為柱體積的5倍；步驟(3)所述的洗脫劑B為由環(huán)己烷和乙酸乙酯組成的混合洗脫劑，其中環(huán)己烷/乙酸乙酯的體積比為86:14; 步驟(3)所述的洗脫劑B的用量為柱體積的5倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1飛任一項制備方法，其特征在于，所述的玉葡萄根為葡萄科蛇葡萄屬 三裂蛇葡萄(Ampelopsis delavayana Planch.)的根。
8.一種由權(quán)利要求廣5任一項制備方法制備得到的玉葡萄根活性部位。
9.權(quán)利要求8所述的玉葡萄根活性部位在制備具有解酒或護肝作用的藥物或食品中的應用。
10.權(quán)利要求8所述的玉葡萄根活性部位在制備增強乙醇脫氫酶活性或降低血液中丙二醛含量的藥 物中的應用。
【文檔編號】A61K125/00GK103610844SQ201310609657
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月27日
【發(fā)明者】楊葉風, 唐大洲, 鄧國邦, 李慕揚 申請人:廣州派騰知識產(chǎn)權(quán)服務有限公司