專利名稱：水浴提取板栗總苞多酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水浴提取板栗總苞多酚的方法。
背景技術(shù)：
我國(guó)是生產(chǎn)板栗的大國(guó)，產(chǎn)量位居世界第一，年產(chǎn)量仍在繼續(xù)增加，板栗(castanea mollissina Blume)屬殼斗科(Fagceae)栗屬喬木經(jīng)濟(jì)植物,素有“千果之王”的美稱，是世界著名的干果之一。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，國(guó)家制造業(yè)、加工業(yè)的發(fā)展，板栗被加工成各種食品，但是板栗總苞卻被當(dāng)作固體垃圾處理，這樣，不僅使自然資源浪費(fèi)，而且會(huì)造成環(huán)境污染。板栗總苞又名風(fēng)栗殼、板栗殼斗，具有健脾益氣、補(bǔ)腎強(qiáng)筋、散結(jié)解毒之功效，治療丹毒、腫毒、瘰疬等疾病。大量文獻(xiàn)證明板栗總苞中含有大量植物多酚物質(zhì)，多酚是ー類具有獨(dú)特生理活性和藥理活性的天然產(chǎn)物，多酚具有抗氧化能力、抗癌、抑菌消炎、抗病毒、預(yù)防心血管病發(fā)生的能力及保護(hù)視網(wǎng)膜等作用，所以，有了植物多酚是有待開(kāi)發(fā)的醫(yī)藥“金礦”的說(shuō)法。有文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道板栗總苞的水煎液、醇溶物、こ酸こ酯提取物具有極強(qiáng)的抗菌、消炎作用和抗凝血、升高白細(xì)胞等生物活性，同時(shí)還具有抗氧化作用、抗衰老作用和抗糖尿病作用。隨著當(dāng)前“追求自然”消費(fèi)觀念的興起，多酚在制藥、生化、食品以及精細(xì)化工等高科技領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)川前景，同時(shí)板栗毛殼資源豐富，成本低廉，對(duì)其成分開(kāi)發(fā)利用可以替代飼用抗生素的使用。目前對(duì)板栗總苞的開(kāi)發(fā)僅有中國(guó)專利CN102140123A報(bào)道了從板栗栗蓬中提取鞣花酸鞣質(zhì)的方法，此方法公開(kāi)了鞣質(zhì)中鞣花酸的提取及其含量的測(cè)定方法，CN102115611A報(bào)道了板栗苞汽爆聯(lián)產(chǎn)色素、栲膠和活性炭的方法，板栗殼的專利有，而CN101402657A報(bào)道了板栗殼多酚的制備方法，CN101407640A報(bào)道了板栗殼棕色素的提取方法。但是板栗總苞多酚提取的專利國(guó)內(nèi)還沒(méi)有，如何處理這些廢棄物，提高其利用率，實(shí)現(xiàn)其循環(huán)產(chǎn)業(yè)發(fā)展，増加傳統(tǒng)板栗種植業(yè)新的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)已成為新的研究方向，具有良好的開(kāi)發(fā)前景和經(jīng)濟(jì)社會(huì)效益，同吋，減少環(huán)境污染，提高板栗的附加值，増加農(nóng)民的副收入，帶動(dòng)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展。本發(fā)明采用水浴溶劑提取法，此方法相對(duì)超聲提取法，具有成本極低、處理量大、溫度容易控制、重復(fù)性極好、易于エ業(yè)化大量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。大孔樹脂是ー種不溶于酸、堿及各種有機(jī)溶劑的有機(jī)高分子聚合物，具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、比表面積大、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長(zhǎng)、易于構(gòu)成閉路循環(huán)、節(jié)省費(fèi)用、安全性高等特點(diǎn)，目前，大孔樹脂已在醫(yī)藥、食品、化妝品等エ藝領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。本發(fā)明采取水浴提取溶劑法，從板栗總苞中提取多酚，同時(shí)結(jié)合大孔樹脂富集純化多酚，使得到純度高，活性強(qiáng)的板栗總苞多酚物質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于是提供一種以板栗廢棄物總苞為原料，采用こ醇水溶液浸堤，大孔樹脂純化多酚的技術(shù)，此方法可推廣到エ業(yè)化生產(chǎn)中，以應(yīng)用以醫(yī)學(xué)、食品、化妝品、飼料等エ業(yè)中，使廢棄物再利用，開(kāi)發(fā)ー種天然植物多酚抗氧化資源，同時(shí)增加板栗的附加值。
本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟(I)干燥粉碎把采摘來(lái)的板栗總苞風(fēng)干、粉碎、過(guò)篩；(2)浸提取一定量板栗總苞粉末于錐形瓶中，按一定料液比加入こ醇水溶液，充分混勻，一定溫度水浴中密閉浸提，得到浸提液；(3)離心和濃縮將浸提液倒入離心管中，離心，收集上清液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮除去こ醇，定容一定體積，得到多酚粗提液(4)純化將多酚粗提液泵入已經(jīng)平衡好的的大孔吸附樹脂，對(duì)多酚進(jìn)行吸附，先用蒸餾水沖洗柱子，再用30%-80%的こ醇水溶液(按體積百分比)洗脫多酚，收集洗脫液；(5)濃縮和干燥將洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥，得到板栗總苞多酚提取物。步驟I中，板栗總苞粉碎后，過(guò)40-80目的篩。步驟2中，浸提2次，首次浸提料液比為I : 15-1 35(g/mL)，密閉浸提l_3h，第二次浸提料液比為I : 5-1 20，密閉浸提lh。上述浸提過(guò)程中，水浴溫度保持在40-90°C之間，こ醇濃度為20% -70%。步驟3中，將浸提液在4000r/min條件下離心15min,取上清液在40°C、0. IMPa下減壓濃縮。步驟4中，大孔吸附樹脂為L(zhǎng)SA-21、DlOl或AB-8柱，上樣濃度為0. 5mg/mL-4mg/mL,上樣流速為0. 5mL/min-3mL/min,蒸餾水沖洗量為2_5倍的柱體積，こ醇水溶液的洗脫量為2-5倍的柱體積，收集洗脫液。步驟5中，將洗脫液在40°C、0. IMPa下減壓濃縮，冷凍干燥，干燥溫度為(TC -60°C，時(shí)間為 12h-24h。本發(fā)明提供的方法具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是(I)提取過(guò)程采用こ醇水溶液，條件溫和，所制的多酚安全無(wú)毒，對(duì)人體沒(méi)有任何傷害，(2)エ藝簡(jiǎn)單、成本低，可以推廣到大范圍的エ業(yè)生產(chǎn)去。(3)藥材原料處理量大，有效成分易于分離、浄化(4)提取エ藝成本低，綜合經(jīng)濟(jì)效應(yīng)顯著。(5)大孔樹脂吸附法具有選擇性好、吸附容量大、再生處理方便、安全性強(qiáng)、吸附迅速及解吸容易等優(yōu)點(diǎn)。(6)板栗總苞的多酚提取率高，且具有較強(qiáng)的抗氧化能力，清除自由基，同時(shí)，有抗病毒，抗誘變，抑菌作用。
具體實(shí)施方法下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施方法中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可以從商業(yè)途徑買到。本發(fā)明下述實(shí)施例中的板栗總苞多酚提取物的含量是按照以下方法進(jìn)行測(cè)定的準(zhǔn)確稱取5mg沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，定容50mL，配成0. lmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，分別吸取0. 5、I. O、
I.5,2. 0和2. 5mL沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液(0. lmg/mL)定容至IOmL,配制成質(zhì)量濃度為0. 005、
0.010,0. 015,0. 020,0. 025mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)液0. 4mL于IOmL離心管中，加入0. 2mol/LFC試劑lmL15% Na2CO3溶液2mL，蒸餾水定容至8mL，25°C反應(yīng)2h。另精確吸取蒸餾水0. 4mL,同法操作作為空白対照。在765nm處測(cè)量其吸光度A。繪制以吸光度(A)與濃度(C)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并擬合線性回歸方程。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為y = 4. 323x+0. 0166，相關(guān)系數(shù)為 R2 = 0. 9998(I)式中y-吸光度值:x_沒(méi)食子酸標(biāo)品濃度，mg/mL總多酚提取率和含量的計(jì)算多酚濃度(mg/mL)=(吸光度值-0.0166)/4. 323 X 稀釋倍數(shù) /1000 (2)多酚含量)=提取多酚質(zhì)量/堤取物質(zhì)量X 100%(3)
多酚得率)=提取物質(zhì)量/原料質(zhì)量X 100%(4)實(shí)施例I將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入200mL的30 %こ醇水溶液混合，在60°C水浴鍋中密閉浸提IlOmin,在4000r/min條件下離心15min,殘洛重復(fù)上述浸提60min，料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用2倍50%こ醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為9. 58%，其中多酚含量為70. 28%。實(shí)施例2將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入1800mL的40 %こ醇水溶液混合，在80°C水浴鍋中密閉浸提170min,在4000r/min條件下離心15min,,殘洛重復(fù)上述浸提60min，料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用4倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用3倍柱體積的70%こ醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為10. 43%，其中多酚含量為 70. 64%。實(shí)施例3將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入150mL的50 %こ醇水溶液混合，在80°C水浴鍋中密閉浸提140min,在4000r/min條件下離心15min,,殘洛重復(fù)上述浸提60min，料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用3倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用5倍柱體積的60%こ醇水溶液以I. 5mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為9. 87%，其中多酚含量為71. 54%。實(shí)施例4將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入210mL的20 %こ醇水溶液混合，在90°C水浴鍋中密閉浸提800min,在4000r/min條件下離心15min,,殘洛重復(fù)上述浸提60min,料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用4倍柱體積的70%こ醇水溶液以3mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為11. 53%，其中多酚含量為69. 62%。
權(quán)利要求
1.水浴提取板栗總苞多酚的方法。，其特征在于，它包括下列步驟 (1)干燥粉碎把采摘來(lái)的板栗總苞風(fēng)干、粉碎、過(guò)篩； (2)浸提取一定量板栗總苞粉末于錐形瓶中，按一定料液比加入乙醇水溶液，充分混勻，一定溫度水浴中密閉浸提，得到浸提液； (3)離心和濃縮將浸提液倒入離心管中，離心，收集上清液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮除去乙醇，定容一定體積，得到多酚粗提液； (4)純化將多酚粗提液泵入已經(jīng)平衡好的的大孔吸附樹脂，對(duì)多酚進(jìn)行吸附，先用蒸餾水沖洗柱子，再用30%-70%的乙醇水溶液(按體積百分比)洗脫多酚，收集洗脫液； (5)濃縮和干燥將洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥，得到板栗總苞多酚提取物。
2.如權(quán)利要求I中(I)所述，其特征在于，板栗總苞粉碎后，過(guò)40-80目篩。
3.如權(quán)利要求I中(2)所述，其特征在于，水浴浸提2次，首次浸提料液比為I 10-1 40(g/mL)，密閉浸提l-3h，第二次浸提料液比為I : 5_1 20，密閉浸提lh。上述浸提過(guò)程中，水浴溫度保持在40-100°C之間，乙醇濃度為20% -80%。
4.如權(quán)利要求I中(3)所述,其特征在于,將浸提液在4000r/min條件下離心15min,取上清液在40°C、0. IMPa下減壓濃縮。
5.如權(quán)利要求I中(4)所述，其特征在于，大孔吸附樹脂為L(zhǎng)SA-21、DlOl或AB-8柱，上樣濃度為O. 5mg/mL-4mg/mL,上樣流速為O. 5mL/min-3mL/min,蒸懼水沖洗量為2_5倍的柱體積，乙醇水溶液的洗脫量為2-5倍的柱體積，收集洗脫液。
6.如權(quán)利要求I中(5)所述，其特征在于，將洗脫液在40°C、0.IMPa下減壓濃縮，并冷凍干燥，冷凍溫度為0°C -60°C。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了水浴提取板栗總苞多酚的方法，包括如下步驟干燥粉碎、浸提、離心和濃縮、純化、濃縮、干燥得到多酚提取物。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)采用乙醇水溶液，條件溫和，所制的多酚安全無(wú)毒。(2)工藝簡(jiǎn)單、成本低、操作簡(jiǎn)便，可推廣到工業(yè)生產(chǎn)。(3)大孔樹脂吸附選擇性好、吸附容量大、再生處理方便、安全性強(qiáng)、吸附迅速及解吸容易。(4)提取率高，且具有較強(qiáng)的抗氧化能力，清除自由基，同時(shí)，有抗病毒，抗誘變，抑菌作用。我國(guó)大量富含植物多酚的廢棄物沒(méi)有得到綜合利用，嚴(yán)重污染著環(huán)境，該發(fā)明使占板栗近20％廢棄物-板栗總苞資源得到最大利用，提高板栗附加值，同時(shí)為食品和制藥工業(yè)開(kāi)辟了一種的天然植物多酚抗氧化劑新資源。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102626429SQ201210062760
公開(kāi)日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月12日
發(fā)明者石恩慧, 賈昌喜, 郭凱軍 申請(qǐng)人:北京農(nóng)學(xué)院