專利名稱：一種南瓜多糖及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種南瓜多糖及其制備方法，屬于藥用活性成分的提取技術(shù)領(lǐng)域。
(二)
背景技術(shù)：
南瓜不但具有非常高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，而且還具有極高的藥用價(jià)值，其中最為人們所熟知的 藥用、保健功能是抗糖尿病。南瓜中所含有的多糖等成份是其抗糖尿病的主要有效物質(zhì)。目 前利用南瓜的抗糖尿病作用，通常是將南瓜脫水干燥磨粉，制成南瓜粉后沖服。這種方法制 得的產(chǎn)品所含藥用成份低，服用量大，療效不顯著，服用不夠方便。近年已有從南瓜中提取 分離出具有明顯降血糖效果的南瓜多糖的公開(kāi)報(bào)道。在公開(kāi)的文獻(xiàn)報(bào)道中，南瓜多糖的提取 多采用水提取乙醇沉淀法。水提乙醇沉淀法提取南瓜多糖，普遍存在著工藝復(fù)雜、流程繁瑣 和提取率低、多糖含量低、成本高的問(wèn)題。
CN1624001A公開(kāi)了南瓜多糖的制備方法先將南瓜制成南瓜粉，再用熱水抽提，濾液用
乙醇沉淀，沉淀物洗滌后加入三氯醋酸，冰箱中放置過(guò)夜，離心，所得濾液逆水透析后干燥 ，即得產(chǎn)物。該方法存在著提取時(shí)間較長(zhǎng)，工藝復(fù)雜，流程繁瑣，沉淀物需要經(jīng)過(guò)多次洗滌 ，加入三氯醋酸脫蛋白后還需經(jīng)過(guò)逆水透析、雙蒸水透析，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，多糖提取率低，純 度不高的問(wèn)題。
(三)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是利用現(xiàn)代生物方法從南瓜中提取、分離、純化南瓜多糖 ，其工藝流程簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短、多糖提取率高且產(chǎn)品純度高。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的南瓜多糖的制備方法為取南瓜，洗凈，去籽后切片，粉碎，加 水提取O. 5 3h，過(guò)濾，收集濾液；濾渣再加水提取2次，每次O. 5 3h，過(guò)濾，收集濾液； 合并濾液，離心，上清液過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，用水清洗樹(shù)脂，收集洗脫液；洗脫液濃縮后 ，加入80% 95%乙醇進(jìn)行沉淀；沉淀物用水溶解后加入5% 15%三氯醋酸離心，脫去蛋白質(zhì) ，取上清液進(jìn)行濃縮，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。由于多糖類成分在水中的溶解度較大， 而且和乙醇相比，用水作提取溶劑的成本明顯降低，因此本發(fā)明在對(duì)南瓜進(jìn)行初提和再提時(shí) 均以水為提取溶劑。柱層析可以通過(guò)吸附很好地去除提取液中的黃酮類物質(zhì)及色素，在雜質(zhì) 量更少的情況下，后續(xù)的醇沉效果更好，沉淀物無(wú)須經(jīng)過(guò)多次洗滌。
更具體的制備方法為取南瓜，洗凈，去籽后切片，粉碎，用4 12倍重量的水提取
40. 5 3h，過(guò)濾，收集濾液；濾渣再分別加4 12倍重量的水提取2次，每次O. 5 3h，過(guò)濾， 收集濾液；合并濾液，離心，上清液過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，用O. 1 3倍進(jìn)柱液重量的水清洗 樹(shù)脂，收集洗脫液；將其濃縮至洗脫液體積的l/20 l/5倍，然后加入3 12倍重量的80% 95%乙醇溶液進(jìn)行沉淀，靜置5 10h;沉淀物用1 8倍重量的水溶解后，加入O. 5 2倍重量 的5% 15%三氯醋酸，攪拌后靜置6 10h，離心，除去蛋白質(zhì)，取上清液進(jìn)行濃縮，制膏， 冷凍干燥，粉碎，即得南瓜多糖。
上述制備過(guò)程中，南瓜洗凈后最好切成長(zhǎng)4 10cm、寬2 6cm、厚2 6cm的片，用粉碎 機(jī)粉碎至20 200目的顆粒，以便于攪拌，使有效成分的提取更為完全。為了提高南瓜多糖 的品質(zhì)，在選取原料的時(shí)候，盡量選擇口感甜、淀粉多，外觀平滑、肉質(zhì)硬且厚，成熟、無(wú) 霉壞的南瓜，清洗時(shí)去除瓜柄、瓜蒂并剔除蟲(chóng)叮咬部份后，先用清潔球或毛刷或抹布擦洗， 再用潔凈飲用水沖洗干凈。
南瓜粉碎物提取時(shí)的料液溫度以及濾渣再提取時(shí)的料液溫度均為50 12(TC ，優(yōu)選為80 10CTC?？蓪⒛瞎戏鬯槲镏糜谔崛」拗校斎胝羝M(jìn)行加熱。
南瓜的提取液均用50 300目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾。
柱層析過(guò)程用水清洗樹(shù)脂時(shí)，當(dāng)流出液呈淺黃色的時(shí)候開(kāi)始收集洗脫液，流出液呈無(wú)色 時(shí)，停止洗脫、收集；樹(shù)脂柱用50% 95%的乙醇溶液清洗處理，洗去樹(shù)脂吸附的色素和黃酮 類物質(zhì)。
柱層析所用樹(shù)脂柱為HPD100型、D101型、AB-8型或D201型大孔吸附樹(shù)脂。申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)篩 選實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這幾種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)南瓜多糖的純化效果更好，而且其價(jià)格便宜，可以多次 重復(fù)使用，成本很低。
洗脫液采用真空濃縮，濃縮溫度為40 8(TC (溫度太低不利于濃縮、溫度太高則對(duì)有效 成分有破壞作用)，真空度O. 06 0. 085MPa。
南瓜提取及純化過(guò)程所用的水為純化水、去離子水或飲用水。 以上所述南瓜多糖的制備方法制備得到的南瓜多糖。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用先進(jìn)的樹(shù)脂層析技術(shù)對(duì)南瓜多糖進(jìn)行純化，減少了洗滌次 數(shù)，簡(jiǎn)化了工藝流程；并對(duì)提取條件和工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，使得整個(gè)提取、純化過(guò)程耗時(shí) 較短；因而本發(fā)明工藝流程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)易于控制，生產(chǎn)成本低且產(chǎn)品純度及提 取率高。用本發(fā)明方法制備得到的南瓜多糖，產(chǎn)品純度可達(dá)80%以上，收率可達(dá)到25%以上。
用本發(fā)明所述方法提取得到的南瓜多糖含有D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖、木糖和 D-葡萄糖醛酸等成份。該南瓜多糖對(duì)糖尿病特別是II型糖尿病具有明顯的降糖作用。因此可將本發(fā)明所得南瓜多糖用于糖尿病藥物的制備中，也可將其制備成各種保健品制劑。 具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的實(shí)施例l:南瓜多糖的制備方法，其步驟如下
1) 選取口感甜、淀粉多，外觀平滑、肉質(zhì)硬且厚，成熟、無(wú)霉壞的南瓜100kg，去除瓜 柄、瓜蒂并剔除蟲(chóng)叮咬部份，先用清潔球擦洗，再用潔凈飲用水沖洗干凈，切開(kāi)去籽，切成
長(zhǎng)5cm、寬2cm、厚2. 5cm的片，置于粉碎機(jī)中粉碎成80目的顆粒，得南瓜粉碎物。
2) 將南瓜粉碎物置于提取罐中，加入600kg純化水，經(jīng)攪拌、混合均勻后，輸入蒸汽， 將罐內(nèi)水溫升至95。C，持續(xù)保溫1.5h。
3) 用180目濾網(wǎng)過(guò)濾，收集濾液于貯液罐中，得濾液A。過(guò)濾后的濾渣加入550kg純化水 ，經(jīng)攪拌、混合后，輸入蒸汽，將水溫升至95。C，持續(xù)保溫1.5h。用180目濾網(wǎng)過(guò)濾，收集 濾液于貯液罐中，得濾液B。再向?yàn)V渣中加入500kg純化水，經(jīng)攪拌、混合均勻后，輸入蒸汽 ，將水溫升至95。C，持續(xù)保溫1.5h。再用180目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液于貯液罐中，得濾 液C。
4) 將濾液A 、濾液B 、濾液C合并置于離心機(jī)離心，收取上清液。
5) 將離心后的上清液通過(guò)HPD100型樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，用300kg純化水清洗樹(shù)脂，當(dāng)流 出液呈淺黃色的時(shí)候開(kāi)始收集洗脫液于貯液罐中。流出液呈無(wú)色時(shí)，停止洗脫、收集。樹(shù)脂 柱用85%濃度的乙醇溶液清洗處理，洗去樹(shù)脂吸附的色素和黃酮類物質(zhì)。
6) 將洗脫液吸入濃縮罐中進(jìn)行真空濃縮，濃縮溫度75。C，真空度0.075 MPa，濃縮至洗 脫液體積的1/15倍。
7) 將350kg濃度95。/。的乙醇溶液加入濃縮液中進(jìn)行攪拌、混合、沉淀，靜置6h。
8) 取醇沉后的沉淀物，力n400kg純化水溶解后，再加入180kg濃度10。/。的三氯醋酸溶液， 攪拌后靜置7h，經(jīng)離心機(jī)離心，即可去除蛋白質(zhì)。
9) 取上清液于濃縮罐中進(jìn)行真空濃縮，再經(jīng)制膏，冷凍干燥，粉碎，即得南瓜多糖。 本發(fā)明的實(shí)施例2:按以下步驟制備南瓜多糖
1) 選取外觀平滑、肉質(zhì)硬且厚，成熟、無(wú)霉壞的南瓜150kg，去除瓜柄、瓜蒂并剔除蟲(chóng) 叮咬部份，先用毛刷刷洗，再用潔凈飲用水沖洗干凈，切開(kāi)去籽，切成長(zhǎng)6cm、寬3cm、厚 2.2cm的片，用粉碎機(jī)粉碎成150目的顆粒，得南瓜粉碎物。
2) 將南瓜粉碎物置于提取罐中，力n750kg去離子水，經(jīng)攪拌、混合均勻后，輸入蒸汽， 將罐內(nèi)水溫升至92 °C ，持續(xù)保溫l. 8h 。
3) 用120目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液于貯液罐中，得濾液A。過(guò)濾后的濾渣加入650kg去離子水，經(jīng)攪拌、混合后，輸入蒸汽，將水溫升至92。C，持續(xù)保溫1.8h。用120目濾網(wǎng)進(jìn)行 過(guò)濾，收集濾液于貯液罐中，得濾液B。再向?yàn)V渣中加入600kg去離子水，經(jīng)攪拌、混合均勻 后，輸入蒸汽，將水溫升至98。C，持續(xù)保溫1.8h。再用120目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液于貯 液罐中，得濾液C。
4) 將濾液A 、濾液B 、濾液C合并，置于離心機(jī)離心，收取上清液。
5) 將離心后的上清液通過(guò)D101型樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析。用420kg去離子水清洗樹(shù)脂，當(dāng)流 出液呈淺黃色的時(shí)候開(kāi)始收集洗脫液于貯液罐中。流出液呈無(wú)色時(shí)，停止洗脫、收集。樹(shù)脂 柱用60%濃度的乙醇溶液清洗處理，洗去樹(shù)脂吸附的色素和黃酮類物質(zhì)。
6) 將貯液罐中的洗脫液吸入濃縮罐中進(jìn)行真空濃縮，濃縮溫度5(TC，真空度0.08MPa， 濃縮至洗脫液體積的1 /12倍。
7) 將420kg濃度85。/。的乙醇溶液加入濃縮液中進(jìn)行攪拌、混合、沉淀，靜置8h。
8) 取醇沉后沉淀物，力n460kg去離子水溶解，再加入220kg濃度13。/。的三氯醋酸，攪拌后 靜置8h，經(jīng)離心機(jī)離心，除去蛋白質(zhì)。
9) 取上清液于濃縮罐中進(jìn)行真空濃縮，再經(jīng)制膏，冷凍干燥，粉碎，即得南瓜多糖。 本發(fā)明的實(shí)施例3:按以下步驟制備南瓜多糖
1) 選取成熟、無(wú)霉壞的南瓜220kg，去除瓜柄、瓜蒂并剔除蟲(chóng)叮咬部份，用抹布擦洗， 再用潔凈飲用水沖洗干凈，切開(kāi)去籽，切成長(zhǎng)4.5cm、寬3.6cm、厚3cm的片，置于粉碎機(jī)中 粉碎成160目的顆粒，得南瓜粉碎物。
2) 將南瓜粉碎物置于提取罐中，加1000kg飲用水，經(jīng)攪拌、混合均勻后，輸入蒸汽，將 罐內(nèi)水溫升至85°C ，持續(xù)保溫2h 。
3) 用140目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液于貯液罐中，得濾液A。過(guò)濾后的濾渣加入900kg飲 用水，經(jīng)攪拌、混合后，輸入蒸汽，將水溫升至85。C，持續(xù)保溫2h。用140目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾
，收集濾液于貯液罐中，得濾液B。再向?yàn)V渣中加入800kg飲用水，經(jīng)攪拌、混合均勻后，輸 入蒸汽，將水溫升至8(TC，持續(xù)保溫2h。再用140目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾，收集濾液于貯液罐中， 得濾液C。
4) 將濾液A 、濾液B 、濾液C合并，置于離心機(jī)離心，收取上清液。
5) 將離心后的上清液通過(guò)AB-8型樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，用1200kg飲用水清洗樹(shù)脂，當(dāng)流 出液呈淺黃色的時(shí)候開(kāi)始收集洗脫液于貯液罐中。流出液呈無(wú)色時(shí)，停止洗脫、收集。樹(shù)脂 柱用90%濃度的乙醇溶液清洗處理，洗去樹(shù)脂吸附的色素和黃酮類物質(zhì)。
6) 將貯液罐中的洗脫液吸入濃縮罐中進(jìn)行真空濃縮，濃縮溫度65。C，真空度0.065MPa，濃縮至洗脫液體積的1/10倍。
7) 將640kg濃度90。/。的乙醇溶液加入濃縮液中進(jìn)行攪拌、混合、沉淀，靜置10h。
8) 取醇沉后沉淀物，力Q750kg飲用水溶解，再加入400kg濃度5。/。的三氯醋酸，攪拌后靜置 10h，經(jīng)離心機(jī)離心，除去蛋白質(zhì)。
9) 取上清液于濃縮罐中進(jìn)行真空濃縮，再經(jīng)制膏，冷凍干燥，粉碎，即得南瓜多糖。
權(quán)利要求
1.一種南瓜多糖的制備方法，其特征在于取南瓜，洗凈，去籽后切片，粉碎，加水提取0.5～3h，過(guò)濾，收集濾液；濾渣再加水提取2次，每次0.5～3h，過(guò)濾，收集濾液；合并濾液，離心，上清液過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，用水清洗樹(shù)脂，收集洗脫液；洗脫液濃縮后，加入80％～95％乙醇進(jìn)行沉淀；沉淀物用水溶解后加入5％～15％三氯醋酸離心，脫去蛋白質(zhì)，取上清液進(jìn)行濃縮，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。
1.
一種南瓜多糖的制備方法，其特征在于取南瓜，洗凈，去籽后 切片，粉碎，加水提取O. 5 3h，過(guò)濾，收集濾液；濾渣再加水提取2次，每次O. 5 3h，過(guò) 濾，收集濾液；合并濾液，離心，上清液過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，用水清洗樹(shù)脂，收集洗脫液 ;洗脫液濃縮后，加入80% 95%乙醇進(jìn)行沉淀；沉淀物用水溶解后加入5% 15%三氯醋酸離 心，脫去蛋白質(zhì)，取上清液進(jìn)行濃縮，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。權(quán)利要求
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于取南瓜， 洗凈，去籽后切片，粉碎，用4 12倍重量的水提取0.5 3h，過(guò)濾，收集濾液；濾渣再分別 加4 12倍重量的水提取2次，每次0.5 3h，過(guò)濾，收集濾液；合并濾液，離心，上清液過(guò) 樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，用O. 1 3倍進(jìn)柱液重量的水清洗樹(shù)脂，收集洗脫液；將其濃縮至洗脫液 體積的l/20 l/5倍，然后加入3 12倍重量的80% 95%乙醇溶液進(jìn)行沉淀，靜置5 10h;沉 淀物用1 8倍重量的水溶解后，加入O. 5 2倍重量的5% 15%三氯醋酸，攪拌后靜置6 10h ，離心，除去蛋白質(zhì)，取上清液進(jìn)行濃縮，制膏，冷凍干燥，粉碎，即得南瓜多糖。權(quán)利要求
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于南瓜 洗凈后切成長(zhǎng)4 10cm、寬2 6cm、厚2 6cm的片，用粉碎機(jī)粉碎至20 200目的顆粒。權(quán)利要求
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于南瓜 粉碎物提取時(shí)的料液溫度為50 12(TC ，濾渣再提取時(shí)的料液溫度也為50 12(TC 。權(quán)利要求
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于南瓜 的提取液均用50 300目濾網(wǎng)進(jìn)行過(guò)濾。權(quán)利要求
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于柱層 析過(guò)程用水清洗樹(shù)脂時(shí)，當(dāng)流出液呈淺黃色的時(shí)候開(kāi)始收集洗脫液，流出液呈無(wú)色時(shí)，停止 洗脫、收集；樹(shù)脂柱用50% 95%的乙醇溶液清洗處理。權(quán)利要求
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于柱層 析所用樹(shù)脂柱為HPD100型、D101型、AB-8型或D201型大孔吸附樹(shù)脂。權(quán)利要求
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于洗脫液采用真空濃縮，濃縮溫度為40 80。C，真空度O. 06 0. 085MPa。
9 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述南瓜多糖的制備方法，其特征在于南瓜 提取及純化過(guò)程所用的水為純化水、去離子水或飲用水。
10 權(quán)利要求l-9中任一項(xiàng)所述南瓜多糖的制備方法制備得到的南瓜多糖。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種南瓜多糖及其制備方法，它是以南瓜為原料，經(jīng)前處理，加水提取0.5～3h，過(guò)濾，濾液離心，上清液過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行柱層析，收集洗脫液；洗脫液濃縮后，加入乙醇進(jìn)行沉淀；沉淀物用水溶解后加入三氯醋酸離心脫蛋白，上清液經(jīng)濃縮，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。本發(fā)明采用先進(jìn)的樹(shù)脂層析技術(shù)對(duì)南瓜多糖進(jìn)行純化，減少了洗滌次數(shù)，簡(jiǎn)化了工藝流程；并對(duì)提取條件和工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，使得整個(gè)提取、純化過(guò)程耗時(shí)較短；因而本發(fā)明工藝流程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)易于控制，生產(chǎn)成本低且產(chǎn)品純度及提取率高。用本發(fā)明方法制備得到的南瓜多糖，產(chǎn)品純度可達(dá)80％以上，收率可達(dá)到25％以上。
文檔編號(hào)A61P3/00GK101314621SQ20081030294
公開(kāi)日2008年12月3日 申請(qǐng)日期2008年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月23日
發(fā)明者盧昶年, 盧照凱 申請(qǐng)人:盧照凱;盧昶年