基于初乳的組合物的制作方法

專利名稱：基于初乳的組合物的制作方法
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本發(fā)明涉及一種在與感染相關(guān)疾病的治療上有臨床應(yīng)用的基于初乳的組合物，所述疾病包括胃腸病和關(guān)節(jié)病。
背景胃腸道感染通常是細(xì)菌、病毒、酵母或寄生性病原體引起的，這些病原體可引起急性感染(如胃腸炎就可能由例如沙門氏菌、志賀菌屬或急性病毒性感染引起)或慢性感染，如空腸彎曲桿菌屬、艱難梭菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌屬。一般情況下，宿主本身所具有的免疫系統(tǒng)能夠?qū)Ω哆@些病原體的出現(xiàn)。但是在某些情況下，這些病原體，例如小腸結(jié)腸炎耶爾森菌屬和幽門螺旋桿菌，能夠在胃和腸中繁殖成菌落并造成嚴(yán)重的疾病。
在健康的動物中，病原性微生物的感染能夠被其免疫系統(tǒng)所控制。免疫球蛋白是免疫系統(tǒng)中必不可少的組成部分。在所有種類的動物中最常見的免疫球蛋白是免疫球蛋白G(IgG)。臨床試驗表明在牛奶中存在特殊的抗體，這種抗體可有效拮抗腸致病性和腸原性生物。
在所有種類的哺乳動物中，免疫球蛋白都是由母親傳給幼體的，以為新生動物提供被動免疫。在人和猿中，IgG及其互補的抗體是在第二妊娠期的三分之二期通過胎盤屏障傳給胎兒的。由于其他免疫球蛋白沒有被傳輸，所以這種傳輸是選擇性的。牛的被動免疫是由初乳中免疫球蛋白，尤其是IgG的分泌提供的。上述初乳是母牛在小牛出生后的前幾天分泌的，且這些免疫球蛋白通過小牛的胃腸道被吸收。這種吸收似乎是選擇性的，因為與其他免疫球蛋白相比，IgG優(yōu)先通過腸壁。
牛奶中所含的抗體已經(jīng)被證明是一種有效的在胃腸道中提供局部保護(hù)以抵抗病原生物體所致疾病的方法。試驗表明牛奶中的特定抗體能夠有效地拮抗腸致病性或分泌腸毒素的大腸桿菌、隱孢子屬、輪狀病毒、費氏志賀菌等。
超免疫牛奶(HIM)可由奶牛獲得，這種奶牛已被特定的抗原超免疫，以便提高可抵抗所選抗原的特定抗體的濃度(即滴度)。這種方法產(chǎn)生了含有增強量的具有生物學(xué)功能的抗體和免疫調(diào)節(jié)劑的特殊的牛奶。已知HIM對于預(yù)防某些疾病有益，它是通過加強機體對致病抗原的天然抵抗力而發(fā)揮作用的。
HIM還被認(rèn)為含有具有消炎活性的組分，并可用于治療關(guān)節(jié)疾病。
神經(jīng)節(jié)苷脂，尤其是GM3和GD3，是所有人體細(xì)胞原生質(zhì)膜的關(guān)鍵組分，且在神經(jīng)系統(tǒng)中含量特別豐富。它們在細(xì)胞間的相互識別、細(xì)胞信號傳導(dǎo)和細(xì)胞生長的中起了重要作用。神經(jīng)節(jié)苷脂是具有極性的復(fù)雜磷脂，含有與糖鏈結(jié)合的神經(jīng)酰胺主鏈。糖鏈中含有酸性糖、N-乙?；窠?jīng)氨酸(唾液酸)。
神經(jīng)節(jié)苷脂是人乳和牛奶的重要組分。在哺乳的不同時期，人體乳腺所分泌的奶中不同神經(jīng)節(jié)苷脂的比例是不同的，同時GD3在哺乳期逐漸增加，在大約一個月后逐漸成為主要的神經(jīng)節(jié)苷脂。神經(jīng)節(jié)苷脂似乎有三種主要的生理學(xué)功能阻止某些病原體發(fā)揮作用；促經(jīng)神經(jīng)細(xì)胞的生長和修復(fù)；在細(xì)胞生長和分化的調(diào)節(jié)中可能也發(fā)揮了作用。它們能夠阻止病原體，如大腸桿菌、輪狀病毒和幽門螺旋桿菌的附著，因此在阻止腸道中的腸道感染和作為抗?jié)兯巹┒加袧撛诘暮锰?。Idota等在Biosci，Biotech，Biochem，59(1)69-72(1995)中證實，神經(jīng)節(jié)苷脂GM3和GD3降低了大腸桿菌對人腸細(xì)胞的結(jié)合。
人腦中高濃度的神經(jīng)節(jié)苷脂憑借其對神經(jīng)細(xì)胞生長所起的作用，因此對提高學(xué)習(xí)能力和促進(jìn)從中風(fēng)和阿爾茨海默病中恢復(fù)都有潛在的好處。例如在大鼠中，腦中低濃度的神經(jīng)節(jié)苷脂會導(dǎo)致其學(xué)習(xí)行為不可逆轉(zhuǎn)的損害。此外，通過神經(jīng)節(jié)苷脂的外源性給藥顯示出對實驗過敏性神經(jīng)炎提供了部分防護(hù)，且在貓實驗?zāi)Ｐ椭?，神?jīng)節(jié)苷脂加速了神經(jīng)系統(tǒng)的體內(nèi)修復(fù)。在細(xì)胞生長/發(fā)育方面，神經(jīng)節(jié)苷脂GM3和表皮生長因子(EGF)相結(jié)合并抑制了EGF依賴的受體酪氨酸自磷酸化反應(yīng)和細(xì)胞的生長。降低神經(jīng)節(jié)苷脂的表達(dá)水平與酪氨酸殘基上EGF受體自磷酸化反應(yīng)的增加和受EGF刺激的細(xì)胞增殖有關(guān)。
還有證據(jù)顯示，O-乙?；疓M3可增強完整腫瘤細(xì)胞的免疫活性。神經(jīng)節(jié)苷脂是細(xì)胞生長和分化潛在的藥理學(xué)調(diào)節(jié)劑。在成纖維細(xì)胞生長因子和血小板衍生生長因子存在的情況下，在組織培養(yǎng)基中直接加入神經(jīng)節(jié)苷脂可延長細(xì)胞周期的G1期從而造成生長抑制并阻斷細(xì)胞增值。
已知牛初乳還富含具有重要的營養(yǎng)作用和生物活性的其它組分，例如生長因子(它已在大量的科學(xué)研究中顯示出有助于皮膚和微組織/肌肉的愈合和修復(fù))、抗微生物的物質(zhì)(如乳鐵蛋白)、礦物質(zhì)和維生素。下表1列出了牛初乳中含有的一些主要生長因子和其它蛋白。表1
用上文所討論的生產(chǎn)超免疫牛奶類似的方法來獲得。
關(guān)節(jié)炎是一種牽涉到關(guān)節(jié)和結(jié)締組織退化的退行性病情，它的標(biāo)志是疼痛和腫脹、滑膜(結(jié)締組織)增厚、關(guān)節(jié)腫大、變紅、有觸痛。
初乳中含有大量的調(diào)節(jié)和生長因子，這可提供消炎保護(hù)作用。這種保護(hù)作用可能部分是由于對微生物病原體的清除和/或平衡，已知這些微生物病原體與繼發(fā)性疾病(如某些形式的關(guān)節(jié)炎)有關(guān)。
對于胃腸道病癥、炎性疾病和骨疾的處理，傳統(tǒng)方法依賴于藥物組合物的應(yīng)用，但這些組合物有相關(guān)的潛在副作用。
本發(fā)明的目的是提供一種組合物，所述組合物可減少或克服至少一些上述問題，或者它可為公眾提供一種有用的備選方案。一個特殊的目的是制造一種包含復(fù)合組分的營養(yǎng)性組合物，這些組分經(jīng)過選擇，對于包括胃腸道病癥、炎癥和骨疾在內(nèi)的感染相關(guān)疾病的處理具有有益功能。
通過以下僅以例證方式給出的描述可顯見本發(fā)明的其它目的。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種包括初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶(HIM)或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物，其量足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
優(yōu)選地，所述組合物還含有神經(jīng)節(jié)苷脂，其量足以提供抗微生物的結(jié)合活性。
優(yōu)選地，所述組合物還含有其它乳脂和/或乳碳水化合物或乳碳水化合物衍生物。
在更加優(yōu)選的形式中，所述組合物還含有鈣，其量足以提供使骨骼健康的推薦的每日需要量。
優(yōu)選地，所述鈣是牛奶衍生的鈣。
優(yōu)選地，所述組合物含有重約50-95％的初乳，5-50％的HIM和0-10％乳脂(如神經(jīng)節(jié)苷脂)以及其他組分，其中HIM和乳脂/其他組分的量和不能超過總組合物的50％。
在一種優(yōu)選形式的組合物中，含有大致50-93％的初乳或初乳衍生產(chǎn)品，5-45％的超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品，2-4％含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分和0.1-1％的鈣。
優(yōu)選地，初乳或初乳衍生產(chǎn)品的量占60％，HIM或HIM衍生產(chǎn)品占35％，神經(jīng)節(jié)苷脂組分占3％，鈣占1.5％。
優(yōu)選地，含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分包括足以提供5-50mg/天的劑量的神經(jīng)節(jié)苷脂。
優(yōu)選地，所述初乳或初乳衍生產(chǎn)品是牛初乳粉。
優(yōu)選地，所述牛初乳粉是磷脂包被的。
優(yōu)選地，所述超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品是牛超免疫牛奶蛋白粉或脫脂奶粉。
優(yōu)選地，所述含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分衍生自牛奶。
優(yōu)選地，所述神經(jīng)節(jié)苷脂包含神經(jīng)節(jié)苷脂GM3和GD3。
在另一個優(yōu)選形式中，所述組合物包括大致65-70％的初乳牛奶蛋白粉，大致24-30％的超免疫牛奶粉，大致2-4％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分和大致0.5-1.5％的乳鈣。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了衍生自牛奶和/或初乳的組合物，所述組合物包括初乳或初乳衍生產(chǎn)品、超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品和神經(jīng)節(jié)苷脂，其比例經(jīng)過選擇以提供功能平衡的組合物并提高消炎活性。
優(yōu)選的組合物包括大致50-93％的初乳或初乳衍生產(chǎn)品，大致5-45％的超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品以及大致2-4％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分。
優(yōu)選地，所述組合物還包括乳鈣。優(yōu)選地是其比例大致為1.5％。
優(yōu)選地，所述含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分包括足以提供5-50mg/天的劑量的神經(jīng)節(jié)苷脂。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種用含有初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶(HIM)或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物治療感染相關(guān)疾病或預(yù)防感染相關(guān)疾病的方法，所述組分的量足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
優(yōu)選地，所述組合物還包括神經(jīng)節(jié)苷脂和鈣。
優(yōu)選地，所述組合物包括大致55-95％的初乳或初乳衍生產(chǎn)品，5-45％的超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品，2-4％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分以及0.1-1％的鈣。
優(yōu)選地，所述感染相關(guān)疾病是與幽門螺旋桿菌(H.pylori)或艱難梭菌(Clostridium difficile)有關(guān)的疾病。
另外，所述感染相關(guān)疾病是過敏性腸綜合癥或疾病，或是關(guān)節(jié)炎癥狀。
據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了含有初乳或從初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物在制造用于處理感染相關(guān)疾病的組合物中的應(yīng)用。
優(yōu)選的，所述初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品以足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
優(yōu)選地，所述組合物還包括神經(jīng)節(jié)苷脂和鈣。
優(yōu)選地，所述感染相關(guān)疾病是幽門螺旋桿菌相關(guān)疾病、過敏性腸綜合癥或關(guān)節(jié)炎癥狀。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了含有初乳或從初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物在制造用于處理炎性疾病的組合物中的應(yīng)用。
優(yōu)選地，所述初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品以經(jīng)過選擇的量含有，以提供功能平衡的組合物并提高其消炎活性。
優(yōu)選地，所述組合物還包括神經(jīng)節(jié)苷脂和鈣。
優(yōu)選地，炎性疾病是關(guān)節(jié)炎癥狀。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種大致如這里所述并參考了相應(yīng)實施例的組合物。
通過以下僅以例證方式給出的描述可顯見本發(fā)明的其它方面。
附圖簡述

圖1顯示多種組合物在體外對白色念珠菌結(jié)合能力的比較。
圖2顯示多種組合物在體外對鼠傷寒沙門氏菌結(jié)合能力的比較。
圖3顯示多種組合物在體外對肺炎克雷白菌結(jié)合能力的比較。
圖4顯示多種組合物在體外對艱難梭菌結(jié)合能力的比較。
圖5顯示多種組合物在體外對大腸桿菌O157結(jié)合能力的比較。
圖6顯示多種組合物在體外對幽門螺桿菌結(jié)合能力的比較。
圖7顯示多種組合物在體外對白色念珠菌結(jié)合能力的進(jìn)一步比較。
圖8顯示多種組合物在體外對鼠傷寒沙門氏菌結(jié)合能力的進(jìn)一步比較。
圖9-11顯示按理論計算的組合物。
發(fā)明詳述本發(fā)明一般涉及一種組合物，所述組合物能夠用于處理包括胃腸和關(guān)節(jié)疾病在內(nèi)的多種感染相關(guān)疾病。所述處理可以是預(yù)防性的或是對已出現(xiàn)癥狀的反應(yīng)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過將初乳和HIM(或它們衍生的產(chǎn)品)混合可觀察到對許多致感染細(xì)菌有作用，且此作用要超過單獨使用單個組分。當(dāng)在組合物中使用明顯較低量的初乳/HIM組分時，對于某些細(xì)菌，這種作用會強于任一單一組分，而對其它細(xì)菌，這種作用是相同或相似的。
特別優(yōu)選添加到所述組合物的是含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分。神經(jīng)節(jié)苷脂是乳脂，前面已經(jīng)討論過這種組分對健康的益處，尤其是當(dāng)GM3或GD3增加時。
其它添加物包括鈣，尤其是牛奶衍生的鈣和其它乳脂、磷脂和牛奶碳水化合物及其衍生物。
在一個優(yōu)選的形式中，所述組合物不應(yīng)含有超過50％重的HIM(加上其它組分，如果有的話)，這樣可在初乳或初乳衍生產(chǎn)品上建立平衡。優(yōu)選產(chǎn)品中初乳的量為50-95％重，更好的是60％-80％重，最好是60-75％重。HIM應(yīng)為5-50％，更好為10-45％，最好為15-40％。當(dāng)然，其它范圍的組合也是可以使用的。
初乳來自牧場喂養(yǎng)的未經(jīng)免疫的健康母牛，需經(jīng)過分離乳脂、巴氏滅菌、噴霧干燥以形成蛋白粉。使用來自超免疫母牛的初乳(即超免疫初乳)也是一個選擇。在更加優(yōu)選的形式中，初乳粉被牛奶磷脂包被，這種用于包被的β脂類包括，尤其是卵磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺和鞘磷脂。
已經(jīng)證實牛初乳可與許多病原體特異性結(jié)合，這些病原體包括白色念珠菌、大腸桿菌O157、幽門螺桿菌、瘡皰丙酸桿菌、肺炎克雷白菌、金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、突變鏈球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、表皮葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門菌、流感嗜血菌、空腸彎曲桿菌、單核細(xì)胞增多性李斯特桿菌。
此外，牛初乳富含維生素、礦物質(zhì)、生長因子(如IgG)和免疫/抗細(xì)菌酶。使用超免疫牛初乳能夠最大限度地增加初乳中具有生物功能的抗體和免疫調(diào)節(jié)劑的含量。
初乳中還含有大量不同的具有消炎特性的組分，包括乳鐵蛋白、富含脯氨酸的多肽、溶菌酶和生長因子(如IgG)，其中一些還具有抗微生物活性。不僅如此，用于本發(fā)明組合物的牛初乳還具有免疫調(diào)節(jié)作用，這是通過阻斷前炎癥細(xì)胞因子如TNF-α和IL-6實現(xiàn)的。
免疫牛奶是從用特定抗原和方法超免疫的奶牛中獲得的，此方法可以產(chǎn)生含有具有提高量的具有生物學(xué)功能的抗體和免疫調(diào)節(jié)劑的特殊的牛奶。
已知HIM中的免疫球蛋白可特異性結(jié)合以下病原體銅綠假單胞菌、產(chǎn)氣氣桿菌、haemophilus typhimurium、緩癥鏈球菌、普通變形菌、痢疾志賀菌、肺炎雙球菌、放線菌屬(真菌)、血鏈球菌、唾液鏈球菌、化膿性鏈球菌(1、3、5、8、12、14、18、22型)。
已知這些病原體是導(dǎo)致許多疾病癥狀或生理紊亂的促進(jìn)因素，包括食物中毒、胃十二指腸潰瘍、皮膚和肺的感染、鵝口瘡、齲齒和牙齦疾病、手術(shù)感染、呼吸道疾病、內(nèi)臟和出血疾病。
下表列出了典型病原體和相關(guān)疾病的對應(yīng)關(guān)系。本發(fā)明的組合物可用于治療和/或控制這些疾病的發(fā)生。
表1
如上述討論，神經(jīng)節(jié)苷脂，尤其是GM3和GD3，在腸道健康、腦健康以及細(xì)胞生長/發(fā)育方面都對健康有益。它們的抗附著/抗微生物(如大腸桿菌和幽門螺旋桿菌以及各種生物毒素，如Shigra毒素)活性可能會進(jìn)一步增強或補充初乳與HIM組合的臨床益處。
ELISA圖(見此處圖7)顯示，加入此組合物的特定神經(jīng)節(jié)苷脂產(chǎn)品對其上經(jīng)過選擇的微生物沒有明顯的結(jié)合效果。神經(jīng)節(jié)苷脂具有抗微生物的效果，但它并不和微生物結(jié)合。故而這種活性被認(rèn)為是抗附著作用(參見上述idota等的觀點)。因此，神經(jīng)節(jié)苷脂組分的活性不會影響HIM或初乳的微生物結(jié)合活性。這說明此組合物的效果在未加入神經(jīng)節(jié)苷脂產(chǎn)品時就已經(jīng)顯示出來了，結(jié)合效果的協(xié)同作用在初乳和HIM之間產(chǎn)生。
以下圖表(圖9-11)說明，如果各個組分組合的結(jié)果是單純相加的，那么結(jié)合效果是可以預(yù)測的。然而，從圖9-11可以看出，事實上獲得了比預(yù)期更高的結(jié)合效果，這再次支持了HIM和初乳組合的協(xié)同作用。
所觀察到的HIM和初乳組合物的增強的結(jié)合效果(由圖可以看出)可能是神經(jīng)節(jié)苷脂的作用所引起。這種效果是事先沒有預(yù)料到的，就其本身而言，產(chǎn)生了一種協(xié)同效應(yīng)。就這一點而言，HIM和初乳(或其衍生產(chǎn)品)以及神經(jīng)節(jié)苷脂的組合構(gòu)成了本發(fā)明的另一個方面。
為提供適當(dāng)?shù)目刮⑸锝Y(jié)合活性(和可能的協(xié)同作用)，本發(fā)明組合物中神經(jīng)節(jié)苷脂的濃度達(dá)到5-50mg的日劑量是優(yōu)選的。神經(jīng)節(jié)苷脂優(yōu)選約占組合物量的0.02％-0.5％。根據(jù)組分中神經(jīng)節(jié)苷脂的量，含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分最多可占所述組合物的約10％。更加優(yōu)選的范圍是2％-4％。
神經(jīng)節(jié)苷脂產(chǎn)品是作為非遺傳修飾的產(chǎn)品從牛奶中直接提取的。此物質(zhì)(或含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分)含有濃縮的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3和GD3。
本組合物也可含有其它脂類和碳水化合物。脂質(zhì)的例子有鞘磷脂、磷脂酰絲氨酸(phophotidylserine)、磷脂酰膽堿(phosphotidylcholine)。碳水化合物的例子有低聚乳糖、唾液酸乳糖(sialyl lactose)、唾液酸化的寡糖(sialatedoligosaccharide)。這些例子并不意味著對其加以限制。
用于本發(fā)明組合物的鈣也是從牛奶中提取的。優(yōu)選的含量約為0.1-2％。更加優(yōu)選的是0.1-1.5％。
初乳和超免疫牛奶蛋白濃縮物所具有的對胃腸道病原體的特異性結(jié)合活性和互補作用(complimentary action)可進(jìn)一步被神經(jīng)節(jié)苷脂的唾液酸結(jié)合作用所加強，這意味著本發(fā)明的組合物尤其著眼于急性和慢性胃腸道疾病的治療。例如，胃潰瘍、十二指腸潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎、局限性腸炎、慢性腸憩室病、過敏性腸疾病、假膜性結(jié)腸炎、抗生素相關(guān)腹瀉、旅行者痢疾(travellers diarrhoea)、幼年性痢疾(juvenile diarrhoea)和隱孢子原蟲病相關(guān)痢疾(cryptosporidiosisassociated diarrhoes)。
通過以合適的比例混合初乳和超免疫牛奶可制得具有廣譜的抗病原生物的活性的產(chǎn)品，此產(chǎn)品同時具有可以預(yù)見和潛在的沒有預(yù)見到的好處。各種組分對細(xì)菌的作用是可以預(yù)計的，但此組合物的作用水平是預(yù)料不到的，因此在治療和費用上具有其優(yōu)點。
所述組合物主要成分的典型組成范圍如下
HIM與其它組分的總量不應(yīng)超過組合物的50％。顯然這一范圍只是用來說明的。
正如將在已經(jīng)完成的實施例和試驗中所顯示的那樣，用本發(fā)明所述組合物進(jìn)行治療的效果是顯著的。盡管已知組合物的主要組分(HIM和初乳)具有有益效果，但沒有想到這種組合會有這里所示的效果。就此而言，可以假設(shè)組合物中超免疫牛奶和初乳組分通過直接或間接的方式產(chǎn)生了協(xié)同作用。
實施例1準(zhǔn)備試驗組合物，它含有70％的初乳牛奶蛋白粉、24％的超免疫奶粉、4％的神經(jīng)節(jié)苷脂組分、乳清粉、乳糖和1.5％的乳鈣。所得組合物化學(xué)組成的詳細(xì)描述列在表2中。
表2試驗組合物的組成
體外結(jié)合研究進(jìn)行結(jié)合研究以比較試驗組合物、初乳奶粉、脫脂奶粉和HIM對各種細(xì)菌和酵母病原體的結(jié)合活性，所述病原體包括白色念珠菌、鼠傷寒沙門氏菌、幽門螺桿菌、大腸桿菌屬、艱難梭菌和肺炎克雷白菌。結(jié)果如圖1-8所示。總之，所述試驗組合物與這些病原體有非常高的特異性結(jié)合速度。
體外消炎特性緊密連接試驗(Tight Junction assay)測量了單層上皮細(xì)胞，尤其是腎細(xì)胞的泄漏情況。細(xì)胞形成一個緊密的屏障是上皮細(xì)胞的一個通常的特征，例如腸和腎的細(xì)胞，但這種屏障功能有時候會受到損害而造成上皮細(xì)胞泄漏。這就是在炎癥時發(fā)生的情況。
在此試驗中，將細(xì)胞和試驗樣品一起培養(yǎng)或者不和試驗樣品一起培養(yǎng)，然后和一種能夠使細(xì)胞發(fā)生泄漏的化合物競爭。測量任何泄漏的增長情況，并將其活性記錄為競爭前離開基線的變化。活性單位越低則細(xì)胞泄漏情況就越少，因此樣品的保護(hù)性就越強。
在各種炎癥的小鼠模型中，將此試驗中HIM的活性與其消炎特性進(jìn)行比較，并發(fā)現(xiàn)了非常好的相關(guān)性。因此，這種緊密連接試驗提供了一個非常好的對牛奶樣品進(jìn)行消炎活性篩選的手段。
在此試驗中將試驗組合物與HIM、牛初乳和對照進(jìn)行了比較。每種樣品都被制成10％(w/v)的磷酸緩沖鹽水，然后在100,000g下離心一小時以去處酪蛋白。對其乳清成分進(jìn)行緊密連接試驗分析。使MDCK細(xì)胞在Transwell中生長至融合，加入乳清至10％并維持48小時。照組細(xì)胞中則不加乳清。在與EGTA競爭前和競爭后一小時測量通過細(xì)胞單層的經(jīng)上皮電阻值。所有的樣品都測量4次。
結(jié)果如表3所示表3
和對照相比，每一個樣品都有顯著的保護(hù)活性。HIM的活性顯著高于牛初乳。試驗組合物的活性在統(tǒng)計學(xué)上也明顯高于牛初乳，且其效果僅比HIM略低，而在試驗組合物中超免疫牛奶只有24％。這個結(jié)果清楚說明試驗組合物提高了每單位超免疫牛奶的保護(hù)活性。這種提高是顯著的。
總的來說，本發(fā)明的試驗組合物包括幾種成分的組合，每種組分都有其特定的抗微生物結(jié)合活性和/或消炎活性，它們可結(jié)合形成對許多疾病都具有的特殊的意想不到的臨床效用，這些疾病包括感染相關(guān)的疾病，尤其是胃腸道疾病、炎癥和與骨有關(guān)的病癥。這種效用是聯(lián)合使用而產(chǎn)生的未預(yù)料到的結(jié)果。
此外，所述組合物中還含有足量的鈣，以滿足人類的平均日需求；還含有許多維生素和礦物質(zhì)，以及含有平衡的蛋白質(zhì)/碳水化合物的混合物。所述組合物在單獨施用或和常規(guī)藥物一起施用時，對預(yù)防或治療疾病有好處。
本發(fā)明組合物的另一種典型的化學(xué)組成如表4所示表4
表2和4顯示的組合物是用所述組合物的牛奶蛋白濃縮物制成的。很明顯對于有經(jīng)驗的人來說，脫脂牛奶也是可以用的。
實施例2參考圖1-8，將試驗組合物和對照(脫脂奶粉)以及實驗組合物的兩個主要組分進(jìn)行了比較。數(shù)據(jù)顯示了各種樣品在體外結(jié)合多種病原體的效果。
我們可以看出，和其他樣品相比較，試驗組合物顯示出了顯著的優(yōu)越性。由于試驗組合物中初乳和HIM的量明顯少于它們各自的對比樣品，因此這樣的結(jié)果是令人驚訝的。
根據(jù)圖7可知，神經(jīng)節(jié)苷脂對于白色念珠菌具有很小的或沒有結(jié)合效果。這已經(jīng)在上文討論過了。
實施例3在胃腸道領(lǐng)域的臨床上，主要是乳糜泄和IDB(chrohnsdisease和潰瘍性結(jié)腸炎)，進(jìn)行了初步的研究?，F(xiàn)有療法無效的20名病人參與了試驗。時間持續(xù)了6-8周，劑量每天兩次，每次20克。超過45％有了顯著的改善。超過34％在用目前標(biāo)準(zhǔn)療法治療后復(fù)發(fā)的病人獲得臨床治愈的確認(rèn)。
在服用本發(fā)明所涉及的組合物的之前和之后的癥狀表現(xiàn)如下表所列，組合物的構(gòu)成為60％的初乳、35％的超免疫牛奶、3％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的成分和1.5％d乳鈣。
本發(fā)明的組合物可被制成片劑或膠囊劑，或者可以粉末的形式提供以便作為飲料施用。依據(jù)產(chǎn)品是用于預(yù)防還是治療，以及應(yīng)用于特定適應(yīng)癥的情況，其每天所需的劑量范圍可以從1克到40克。對于胃腸道失調(diào)的情況，較好的劑量范圍在10-30克/天每日兩次服用，空腹。當(dāng)這種組合物應(yīng)用于胃潰瘍時，預(yù)期與溶粘蛋白劑聯(lián)合應(yīng)用具有較好的效果。通過應(yīng)用這種組合物能夠減少或取消傳統(tǒng)的抗?jié)兯幬镏委煹膭┝俊?br> 在此之前的描述中已經(jīng)指出本發(fā)明涉及到的組合物中的特定組分或其混合物在效果上是相同的，在此處對這些單獨的組分加以混合。
盡管已經(jīng)通過實施例并參考其可能的實施方案描述了本發(fā)明，應(yīng)該理解，在不背離如附加的權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明范圍和精神的情況下，可對其做出修飾或改進(jìn)。
權(quán)利要求
1.一種組合物，其特征在于，所述組合物含有初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶(HIM)或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物，其量足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，它還含有神經(jīng)節(jié)苷脂成份，其量足以提供抗微生物的結(jié)合活性。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，它還含有乳脂、磷脂和/或牛奶碳水化和物或碳水化和物衍生物。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的組合物，它還含有鈣，其量足以提供骨骼健康所需的每日推薦量。
5.如權(quán)利要求4所述的組合物，其中，所述鈣是來自牛奶的鈣。
6.如所述任一項權(quán)利要求所述的組合物，其中，所述組合物含有占重量50-95％的初乳或初乳衍生產(chǎn)品、5-50％的HIM或HIM衍生產(chǎn)品、0-10％的神經(jīng)節(jié)苷脂和其它組分；其中，HIM或HIM衍生產(chǎn)品以及神經(jīng)節(jié)苷脂和其它組分的量不超過所有組合物的50％
7.如權(quán)利要求4-6中任一項所述的組合物，其中，所述組合物含有大致50-93％的初乳或初乳衍生物、5-45％的超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品、2-4％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分和0.1-1％的鈣。
8.如權(quán)利要求3-7中任一項所述的組合物，其中，所述含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組份足以提供5-50毫克/天的劑量。
9.如上述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其中，所述初乳是超免疫初乳。
10.如上述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其中，所述初乳或初乳衍生產(chǎn)品是牛初乳粉。
11.如上述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其中，所述初乳粉是磷脂包被的。
12.如上述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其中，所述超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品是牛超免疫牛奶蛋白粉或脫脂奶粉。
13.如上述權(quán)利要求中任一項所述的組合物，其中，所述磷脂或含有神經(jīng)節(jié)苷脂的成份來自牛奶。
14.如權(quán)利要求3-13中任一項所述的組合物，其中，所述神經(jīng)節(jié)苷脂包括神經(jīng)節(jié)苷脂GM3和GD3。
15.如權(quán)利要求1-6和8-15中任一項(當(dāng)不滿足權(quán)利要求7時)所述的組合物，其中，所述組合物包括大致65-70％的初乳牛奶蛋白粉、大致24-30％的超免疫奶粉、大致2-4％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分和大致0.5-1.5％的乳鈣。
16.一種衍生自牛奶和/或初乳的組合物，其特征在于，所述組合物含有初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物，其量足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
17.如權(quán)利要求16所述的組合物，其中，所述組合物含有大致50-93％的初乳或初乳衍生產(chǎn)品、大致5-45％的超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品以及大致2-4％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分。
18.如權(quán)利要求16或17所述的組合物，它還含有乳鈣，其優(yōu)選比例大致為1.5％。
19.如權(quán)利要求16-18中任一項所述的組合物，其中，所述含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組份足以提供5-50毫克/天的劑量。
20.一種治療感染相關(guān)疾病或預(yù)防感染相關(guān)疾病的方法，其特征在于，所述方法使用了一種組合物，此組合物含有初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品，其量足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述組合物還含有神經(jīng)節(jié)苷脂和鈣。
22.如權(quán)利要求20或21所述的方法，其特征在于，所述組合物含有大致55-95％的初乳或初乳衍生產(chǎn)品、5-45％的超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品、2-4％的含有神經(jīng)節(jié)苷脂的組分和0.1-1％的鈣。
23.如權(quán)利要求20-22中任一項所述的方法，其中，所述感染相關(guān)疾病是與幽門螺旋桿菌有關(guān)的疾病。
24.如權(quán)利要求20-22中任一項所述的方法，其中，所述感染相關(guān)疾病是腸道易激綜合征或疾病、或關(guān)節(jié)炎癥狀。
25.一種含有初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物在制造用于治療感染相關(guān)疾病的組合物中的應(yīng)用。
26.如權(quán)利要求25所述的應(yīng)用，其中，所述初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的量足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
27.如權(quán)利要求25或26所述的應(yīng)用，其中，所述組合物還含有神經(jīng)節(jié)苷脂和鈣。
28.如權(quán)利要求25-27中任一項所述的應(yīng)用，其中，所述感染相關(guān)疾病是幽門螺旋桿菌相關(guān)的疾病、腸道易激綜合征或關(guān)節(jié)炎癥狀。
29.如權(quán)利要求25-27中任一項所述的應(yīng)用，其中，所述感染相關(guān)疾病是與艱難梭菌有關(guān)的疾病。
30.如權(quán)利要求29所述的應(yīng)用，其中，所述感染相關(guān)疾病是腸道易激綜合征。
31.一種含有初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物在制造用于治療炎性疾病的組合物中的應(yīng)用。
32.如權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，其中，所述初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品以經(jīng)過選擇的比例含有，以提供功能平衡的組合物并提高消炎活性。
33.如權(quán)利要求31或32所述的應(yīng)用，其中，所述組合物還含有神經(jīng)節(jié)苷脂和鈣。
34.如權(quán)利要求31-33中任一項所述的應(yīng)用，其中，所述炎性疾病是關(guān)節(jié)炎癥狀。
35.如權(quán)利要求25-34中任一項所述的應(yīng)用，其中，所述初乳是超免疫初乳。
36.一種含有如此所述的初乳和超免疫牛奶，并參考附屬實施例和附圖的組合物。
全文摘要
一種包括初乳或初乳衍生產(chǎn)品和超免疫牛奶(HIM)或超免疫牛奶衍生產(chǎn)品的組合物，其量足以提供具有抗廣譜病原生物體的病原體結(jié)合活性的組合抗菌譜。
文檔編號A61K35/20GK1486194SQ01822044
公開日2004年3月31日 申請日期2001年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月15日
發(fā)明者C·E·威廉斯, P·G·霍布曼, S·S·亞羅, C E 威廉斯, 亞羅, 霍布曼 申請人:馮泰拉合作集團(tuán)有限公司