專利名稱：采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝的制作方法
采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于卷煙生產(chǎn)工藝技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
卷煙生產(chǎn)的工藝流程是根據(jù)煙葉原料的理化特性，按照一定的程序逐步通過(guò)各種加工方法或設(shè)備，把原料制成合格卷煙產(chǎn)品所必須經(jīng)過(guò)的加工制造過(guò)程。主要工序有制絲、 卷接和包裝。一般而言，卷煙生產(chǎn)企業(yè)根據(jù)不同卷煙葉組中的煙葉品種、煙葉產(chǎn)地、煙葉等級(jí)、煙葉年份和煙葉配比等，通過(guò)加料加香，賦予卷煙產(chǎn)品特定產(chǎn)品風(fēng)格，經(jīng)過(guò)制絲、卷接和包裝而獲得卷煙產(chǎn)品，提供給消費(fèi)者特定的感官體驗(yàn)。在傳統(tǒng)的卷煙加工過(guò)程中，加香加料是形成產(chǎn)品風(fēng)格的重要環(huán)節(jié)，通過(guò)加料，可以改善卷煙的吸食品質(zhì)、改善煙絲的物理性狀、 改善煙絲的燃燒性和防止煙絲霉變等；通過(guò)加香，在不損害煙葉原有香氣的情況下，襯托煙香，同時(shí)掩蓋雜氣，達(dá)到增香賦香、改善吃味和協(xié)調(diào)香味的作用，進(jìn)而最終形成卷煙產(chǎn)品風(fēng)格。按照來(lái)源不同，煙草香料包括天然香料和合成香料2大類。然而，世界衛(wèi)生組織(WHO) 在《煙草控制框架公約》中建議各國(guó)限制或禁止在煙草中使用香料等添加劑，包括葡萄糖、 蜂蜜、香草醛和中草藥等天然或合成煙香香料都在范圍內(nèi)。我國(guó)已于2005年正式批準(zhǔn)《煙草控制框架公約》，因此，減少和限制天然和合成香料的使用是大勢(shì)所趨。
采用復(fù)配微生物制劑達(dá)到替代傳統(tǒng)加料加香的目的，同時(shí)實(shí)現(xiàn)卷煙產(chǎn)品有害成分的降低，以期形成新的卷煙生產(chǎn)工藝和新的卷煙產(chǎn)品，本領(lǐng)域技術(shù)人員也做了大量的工作。 實(shí)際上，微生物發(fā)酵已被證明可改善煙葉可用性，是煙葉吸食品質(zhì)形成的重要環(huán)節(jié)，根據(jù)發(fā)酵方式的不同，可分為人工發(fā)酵和自然發(fā)酵，國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)煙葉的人工發(fā)酵進(jìn)行了大量的研究和實(shí)踐。然而，但還未有僅使用微生物用于卷煙產(chǎn)品賦香的報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)卷煙工業(yè)發(fā)展的需求，本發(fā)明目的在于，提供一種采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝，該工藝將賦香復(fù)合微生物制劑用于卷煙葉組在一定溫度和濕度下發(fā)酵，經(jīng)過(guò)烘絲、卷接和包裝，獲得卷煙成品，所得的卷煙產(chǎn)品，其理化指標(biāo)和評(píng)吸結(jié)果均達(dá)到商品化卷煙標(biāo)準(zhǔn)。
為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明的方法是通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)
一種采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝，其特征在于，在傳統(tǒng)的卷煙生產(chǎn)工藝中，用賦香復(fù)合微生物制劑噴施于切后煙絲/葉組或烘后煙絲/葉組表面，在溫度25°C 45°C、相對(duì)濕度30% 90%條件下恒溫恒濕發(fā)酵24h 60h，發(fā)酵后的煙絲/ 葉組在25V 180°C條件下烘干，當(dāng)煙絲/葉組水分達(dá)到10% 15%再進(jìn)入卷煙機(jī)卷接， 獲得卷煙成品；
所述的賦香復(fù)合微生物制劑含有芽孢桿菌(Bacillus sp. ) LBT1. 0007、芽孢桿菌(Bacillus sp. )LBT1. 0013 和酵母菌(Saccharomyces sp. )LBT1. 0038，且芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0007 芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013 酵母菌 (Saccharomyces sp.) LBT1. 0038 = (0. 001 1) (0. 001 1. 5) (0. 005 15)。
上述芽孢桿菌(Bacillussp.)LBT1. 0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBT1. 0013和酵母菌(Saccharomyces sp. ) LBT1. 0038，在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)分別為 CGMCC No. 5332、CGMCC No. 5333 和 CGMCC No. 5334。
所述的賦香復(fù)合微生物制劑噴施量為煙絲/葉組的0. OOOlwt% IOwt%。
所述的賦香復(fù)合微生物制劑的配比選用芽孢桿菌(Bacillus sp. )LBT1. 0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013 和酵母菌(Saccharomyces sp.) LBT1. 0038 的濕菌體、粉劑或凍干粉。
本發(fā)明的采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝，與傳統(tǒng)卷煙生產(chǎn)工藝完全不同，用該工藝制得的卷煙產(chǎn)品具有無(wú)添加劑、賦香效果好等特征，是一種新的卷煙生產(chǎn)工藝。
具體實(shí)施方式
為了獲得卷煙葉組賦香菌株，申請(qǐng)人從煙葉表面分離、篩選可使卷煙葉組賦香的一組微生物菌株，即芽孢桿菌(Bacillus sp. )LBT1.0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013 和酵母菌(Saccharomyces sp.) LBT1. 0038，于 2011 年 10 月 12 日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，并配制成卷煙葉組復(fù)配賦香微生物，該復(fù)配微生物制劑其可實(shí)現(xiàn)卷煙葉組的增香和降害。在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)分別為 CGMCC No. 5332、CGMCC No. 5333 和 CGMCC No. 5334。
以下給出具體的分離、篩選的實(shí)施例。
1)芽孢桿菌(Bacillus sp. )LBT1. 0007 或芽孢桿菌(Bacillus sp. )LBT1. 0013 的分離與篩選
從自然醇化3年以上的煙葉表面分離卷煙葉組賦香菌菌株，其分離方法是先用無(wú)菌生理鹽水與Ig醇化煙葉混合后，用無(wú)菌取樣的方法取ImL混合液加入到9mL滅菌生理鹽水中制成ΙΟ"1菌懸液，然后逐級(jí)稀釋，取10_2、10_3、10_4、10_5、10_6、ΙΟ"7六個(gè)稀釋度的菌懸液0. 2mL涂布到LB培養(yǎng)基上，37°C恒溫培養(yǎng)Mh，挑取長(zhǎng)勢(shì)良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，鏡檢。
鏡檢若為純培養(yǎng)單一菌株，則接種于LB斜面固體培養(yǎng)基，37°C恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4°C冰箱。
鏡檢若為混合菌株，則再次在LB培養(yǎng)基平板上進(jìn)行劃線分離，直至鏡檢為菌株純培養(yǎng)物后，接種斜面試管，37°C恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4°C冰箱。
LB培養(yǎng)基主要成分為胰化蛋白胨1%，酵母提取物0.5%，NaCl 1%;ρΗ自然，酵母提取物(yeast extract)，也稱酵母膏，市售。
LB斜面固體培養(yǎng)基是在LB培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入2%瓊脂成為L(zhǎng)B斜面固體培養(yǎng)基；PH自然。
鏡檢若為純培養(yǎng)單一菌株，則接種于LB斜面固體培養(yǎng)基，37°C恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4°C冰箱；
鏡檢若為混合菌株，則再次在LB培養(yǎng)基平板上進(jìn)行劃線分離，直至鏡檢為菌株純培養(yǎng)物后，接種斜面試管，37°C恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4°C冰箱；
對(duì)篩選所得的所有純培養(yǎng)菌株用于煙葉發(fā)酵，并根據(jù)煙葉理化性質(zhì)和評(píng)吸結(jié)果， 最終篩選和確定卷煙賦香菌株。
2)酵母菌(Saccharomyces sp. )LBT1. 0038 的分離與篩選
從自然醇化3年以上的煙葉表面分離卷煙葉組賦香菌菌株，其分離方法是
該方法先用無(wú)菌生理鹽水與Ig醇化煙葉混合后，用無(wú)菌取樣的方法取ImL混合液加入到9mL滅菌生理鹽水中制成10—1菌懸液，然后逐級(jí)稀釋，取10_2、10_3、10_4、10_5、10_6、10_7 六個(gè)稀釋度的菌懸液0. 2mL涂布到Y(jié)PD培養(yǎng)基上，32°C恒溫培養(yǎng)Mh，挑取長(zhǎng)勢(shì)良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，鏡檢；
YPD培養(yǎng)基主要成分為酵母膏1%，蛋白胨2%，葡萄糖；
YPD斜面固體培養(yǎng)基是在YPD培養(yǎng)基加入2%瓊脂成為YPD斜面固體培養(yǎng)基；pH自然。
鏡檢若為純培養(yǎng)單一菌株，則接種于YPD斜面固體培養(yǎng)基，32°C恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4°C冰箱；
鏡檢若為混合菌株，則再次在YPD培養(yǎng)基平板上進(jìn)行劃線分離，直至鏡檢為菌株純培養(yǎng)物后，接種斜面試管，32°C恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4°C冰箱；
對(duì)篩選所得的所有純培養(yǎng)菌株用于煙葉發(fā)酵，并根據(jù)煙葉理化性質(zhì)和評(píng)吸結(jié)果， 最終篩選和確定卷煙賦香菌株。
將所得的芽孢桿菌(Bacillussp.) LBT1. 0007 或芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013進(jìn)行培養(yǎng)，其方法是，將保藏的芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBTl. 0013或芽孢桿菌 (Bacillus sp. )LBT1. 0007從斜面接種2環(huán)至IOOmL的LB液體培養(yǎng)基中，于27°C 37°C, IOOrpm 180rpm恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)12h 36h，得到芽孢桿菌(Bacillus sp. )LBT1. 0013 或芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBT 1. 0007新鮮發(fā)酵液；其中，LB液體培養(yǎng)基主要成分為胰化蛋白胨1%，酵母提取物0. 5%，NaCl 1% ；瓊脂2%，pH自然；
所得到的芽孢桿菌(Bacillussp.)LBT1. 0013 或芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBT 1. 0007發(fā)酵液在4°C條件下，以8500r/min 11000r/min離心5min 15min，棄上清液得到濕菌體，進(jìn)一步得到粉劑或凍干粉，保藏于4°C冰箱備用。
將所得的酵母菌(Saccharomyces sp. ) LBT1. 0038進(jìn)行培養(yǎng)，其方法是，將保藏的酵母菌(Saccharomyces sp.) LBT1. 0038從斜面接種2環(huán)至IOOmL的YPD液體培養(yǎng)基中，于 27°C 37°C，IOOrpm 180rpm恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)12h 36h，得到酵母菌(Saccharomyces sp.) LBT1. 0038新鮮發(fā)酵液；其中，YPD液體培養(yǎng)基主要成分為酵母膏1 %，蛋白胨2%， 葡萄糖2%，瓊脂2%，pH自然；
所得到的酵母菌(Saccharomyces sp. )LBT1. 0038發(fā)酵液在4°C條件下，以8500r/ min llOOOr/min離心5min 15min，棄上清液得到濕菌體，進(jìn)一步得到粉劑或凍干粉，保藏于4°C冰箱備用。
3)將得到的芽孢桿菌(Bacillus sp. )LBT1. 0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013和酵母菌(Saccharomyces sp.) LBT1. 0038的發(fā)酵液在4 °C條件下，按照芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0007 芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013 酵母菌 (Saccharomyces sp.) LBT1. 0038 = (0. 001 1) (0. 001 1. 5) (0.005 15)的比例復(fù)配，得到賦香復(fù)合微生物制劑。如果采用粉劑或凍干粉可直接進(jìn)行復(fù)配。
4)將得到的賦香復(fù)合微生物制劑用于傳統(tǒng)的卷煙生產(chǎn)工藝中，具體的步驟至少包括
根據(jù)產(chǎn)品要求對(duì)煙葉進(jìn)行制絲，得到煙絲(葉組)，按照煙絲(葉組)質(zhì)量的 0. 000Iwt % IOwt %比例將賦香復(fù)合微生物制劑噴施于切后煙絲(葉組)或烘后煙絲(葉組)表面，并將葉組在25°C 45°C、相對(duì)濕度30% 90%條件下恒溫恒濕發(fā)酵24h 60h。 將發(fā)酵后的煙絲(葉組)在25°C 180°C條件下烘干池 48h，使煙絲(葉組)水分含量在10% 15%之間，進(jìn)入卷煙機(jī)卷制和包裝，獲得卷煙成品。
采用本發(fā)明的卷煙生產(chǎn)工藝，卷煙的理化指標(biāo)和評(píng)吸結(jié)果均達(dá)到商品化卷煙標(biāo)準(zhǔn)。
表1賦香復(fù)合微生物制劑的卷煙理化指標(biāo)
權(quán)利要求
1.一種采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝，其特征在于，在傳統(tǒng)的卷煙生產(chǎn)工藝中，用賦香復(fù)合微生物制劑噴施于切后煙絲/葉組或烘后煙絲/葉組表面，在溫度25°C 45 °C、相對(duì)濕度30% 90%條件下恒溫恒濕發(fā)酵Mh 60h，發(fā)酵后的煙絲/葉組在25°C 180°C條件下烘干，當(dāng)煙絲/葉組水分達(dá)到10% 15%再進(jìn)入卷煙機(jī)卷接，獲得卷煙成品；所述的賦香復(fù)合微生物制劑含有芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBT1. 0013 和酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1. 0038，且芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0007 芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013 酵母菌 (Saccharomyces sp.) LBT1. 0038 = (0. 001 1) (0. 001 1. 5) (0. 005 15)。
2.如權(quán)利要求1所述的工藝，其特征在于，所述的芽孢桿菌(Bacillussp.) LBT1.0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBT1. 0013 和酵母菌(Saccharomyces sp.) LBT1. 0038，在中國(guó)普通微生物菌種保藏中心的保藏號(hào)分別為CGMCC No. 5332、CGMCC No.5333 和 CGMCC No. 5334。
3.如權(quán)利要求1所述的工藝，其特征在于，所述的賦香復(fù)合微生物制劑噴施量為煙絲/ 葉組的 0. OOOlwt % IOwt % ο
4.如權(quán)利要求1所述的工藝，其特征在于，所述的賦香復(fù)合微生物制劑的配比選用芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.) LBT1. 0013 和酵母菌 (Saccharomyces sp.) LBT1. 0038的濕菌體、粉劑或凍干粉。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種采用賦香復(fù)合微生物制劑的無(wú)添加劑卷煙生產(chǎn)工藝，在傳統(tǒng)的卷煙生產(chǎn)工藝中，用賦香復(fù)合微生物制劑噴施于切后煙絲/葉組或烘后煙絲/葉組表面，在溫度25℃～45℃、相對(duì)濕度30％～90％條件下恒溫恒濕發(fā)酵24h～60h，發(fā)酵后的煙絲/葉組在25℃～180℃條件下烘干，當(dāng)煙絲/葉組水分達(dá)到10％～15％再進(jìn)入卷煙機(jī)卷接，獲得卷煙成品；該工藝所用復(fù)配微生物制劑為芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBT1.0007、芽孢桿菌(Bacillus sp.)LBT1.0013和酵母菌(Saccharomyces sp.)LBT1.0038，該復(fù)配微生物制劑中所用菌株均由醇化煙葉表面分離篩選獲得，是一種新的卷煙葉組賦香復(fù)配微生物制劑，用該工藝制得的卷煙產(chǎn)品具有無(wú)添加劑、賦香效果好等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A24B3/12GK102499438SQ20111036972
公開(kāi)日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月19日
發(fā)明者呂欣, 張崗, 張曉妮, 牟含軍, 王穎, 胡喜懷, 趙德學(xué), 郭志剛, 陳寶成 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué), 陜西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司