一種可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料、其制備方法及豬日糧與流程

本發(fā)明涉及畜牧業(yè)的預(yù)混合飼料，具體為一種可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料。
背景技術(shù)：
：霉菌毒素是由真菌(霉菌)產(chǎn)生的具有毒性的次級代謝產(chǎn)物，主要的霉菌毒素包括：黃曲霉毒素、單端孢霉烯族毒素(T2毒素、嘔吐毒素)、玉米赤霉烯酮、赭曲霉素、煙曲霉素等。聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)估計，全世界谷物25％受霉菌毒素污染，平均有2％的糧食由于霉變不能食用，全世界由于霉菌毒素污染造成每年數(shù)千億美元的損失。據(jù)美國農(nóng)業(yè)部統(tǒng)計，由于畜禽食用霉菌毒素污染的飼料，畜牧業(yè)每年遭受14.4億美元的經(jīng)濟(jì)損失。我國華南、華東乃至華北地區(qū)收獲季節(jié)雨量較多，農(nóng)作物在田間就會受到霉菌的污染。因此，解決糧食霉菌毒素污染是一個世界性問題，是解決食品安全和人類健康的大問題。聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)于1995年建議將危害分析與關(guān)鍵控制(HACCP)系統(tǒng)應(yīng)用于霉菌毒素管理，通過加強(qiáng)作物生長、成熟、收獲和貯存等各個環(huán)節(jié)的控制來最大限度的減少食品和飼料中的霉菌毒素。霉菌毒素傳統(tǒng)的物理和化學(xué)去毒方法存在效果不穩(wěn)定、營養(yǎng)成分損失大、影響飼料適口性，且難以規(guī)?；a(chǎn)等缺點而不能被廣泛應(yīng)用到實際生產(chǎn)中。而微生物及生物酶解毒因具有解毒效率高、特異性強(qiáng)、對飼料和環(huán)境沒有污染等特點和優(yōu)勢，備受研究者的關(guān)注。技術(shù)實現(xiàn)要素：為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中的至少一種缺陷，本發(fā)明提供了一種可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料，包括凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌。根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，所述預(yù)混合飼料包括25～30質(zhì)量份凝結(jié)芽孢桿菌、20～25質(zhì)量份枯草芽孢桿菌和20～25質(zhì)量份丁酸梭菌。根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，所述預(yù)混合飼料還包括酵母細(xì)胞壁和復(fù)合維生素。根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，所述預(yù)混合飼料包括25～30質(zhì)量份凝結(jié)芽孢桿菌、20～25質(zhì)量份枯草芽孢桿菌、20～25質(zhì)量份丁酸梭菌、10～15質(zhì)量份酵母細(xì)胞壁和5～10質(zhì)量份復(fù)合維生素。根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，所述預(yù)混合飼料包括25質(zhì)量份凝結(jié)芽孢桿菌、20質(zhì)量份枯草芽孢桿菌、20質(zhì)量份丁酸梭菌、10質(zhì)量份酵母細(xì)胞壁和5質(zhì)量份復(fù)合維生素。本發(fā)明一實施方式還提供了一種可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料的制備方法，包括：配制發(fā)酵液；將凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌在所述發(fā)酵液中分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，然后經(jīng)液體深層發(fā)酵；以及將發(fā)酵完成的各菌分別制成粉劑，按照一定質(zhì)量比例混合后粉碎，制得所述可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料。根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，所述質(zhì)量比例為，凝結(jié)芽孢桿菌:枯草芽孢桿菌:丁酸梭菌＝(25～30):(20～25):(20～25)。本發(fā)明一實施方式進(jìn)一步提供了一種豬日糧，包含上述的可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料。本發(fā)明一實施方式的可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料，性質(zhì)穩(wěn)定，不吸附維生素和其他營養(yǎng)物質(zhì)，能高效清除霉菌毒素造成的飼料污染，改善適口性，提高動物食欲，使其增重加快，提早出欄。附圖說明圖1為本發(fā)明應(yīng)用例4的對照組、處理組Ⅰ、處理組Ⅱ的中毒豬陰戶面積影響的統(tǒng)計圖；圖2A為本發(fā)明應(yīng)用例4中試驗前對照組的母豬陰戶狀況的示意圖；圖2B為本發(fā)明應(yīng)用例4中試驗后對照組的母豬陰戶狀況的示意圖；圖3A為本發(fā)明應(yīng)用例4中試驗前處理組Ⅰ的母豬陰戶狀況的示意圖；圖3B為本發(fā)明應(yīng)用例4中試驗后處理組Ⅰ的母豬陰戶狀況的示意圖；圖4A為本發(fā)明應(yīng)用例4中試驗前處理組Ⅱ的母豬陰戶狀況的示意圖；圖4B為本發(fā)明應(yīng)用例4中試驗后處理組Ⅱ的母豬陰戶狀況的示意圖。具體實施方式體現(xiàn)本發(fā)明特征與優(yōu)點的典型實施例將在以下的說明中詳細(xì)敘述。應(yīng)理解的是本發(fā)明能夠在不同的實施例上具有各種的變化，其皆不脫離本發(fā)明的范圍，且其中的描述在本質(zhì)上是當(dāng)作說明之用，而非用以限制本發(fā)明。霉菌毒素生物降解指微生物、植物及其代謝產(chǎn)生的酶與毒素作用，使其分子結(jié)構(gòu)中毒性基團(tuán)被破壞而生成無毒降解產(chǎn)物的過程。以腸道菌群為靶標(biāo)的，通過無菌動物模型、宏基因組技術(shù)，檢測動物腸道菌群正向或負(fù)向豐度變化來評價發(fā)酵飼料對動物腸道菌群變化。本發(fā)明一實施方式提供了一種可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料，包括凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌。本發(fā)明一實施方式通過在常規(guī)預(yù)混料中添加凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、丁酸梭菌等復(fù)合微生物活性成分來降解霉菌毒素(例如玉米赤霉烯酮)，能有效替代抗生素添加劑，可提高飼料活性，促進(jìn)動物健康，進(jìn)而減少飼料原料浪費(fèi)，提高飼料產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)性能，并且提高動物免疫力，改善飼料適口性和轉(zhuǎn)化率等，生產(chǎn)出綠色安全畜牧產(chǎn)品。丁酸梭菌的主要代謝產(chǎn)物為丁酸，而丁酸是腸道上皮組織細(xì)胞的再生和修復(fù)的主要營養(yǎng)物質(zhì)，能有效修復(fù)腸道粘膜結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)腸道的菌群平衡，增強(qiáng)動物機(jī)體的免疫功能。因此，預(yù)混合飼料中包含丁酸梭菌對腸道上皮組織的再生和修復(fù)有很重要的意義。于本發(fā)明一實施方式中，預(yù)混合飼料還包含酵母細(xì)胞壁和復(fù)合維生素。本發(fā)明一實施方式的可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料，在凝結(jié)芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌脫毒的同時，可通過酵母細(xì)胞壁吸附和中和細(xì)菌毒素。本發(fā)明一實施方式的可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料，采用生物吸附和物理吸附相結(jié)合的方式，達(dá)到快速高效的吸附多種霉菌毒素的目的，且復(fù)合微生物等活性成分對飼料中的維生素、微量元素吸附性差，不破壞飼料營養(yǎng)成分的吸收率，極大地減少了營養(yǎng)成分的損失，且不受飼料加工工藝和高溫影響，無停用時間，無殘留。于本發(fā)明一實施方式中，預(yù)混合飼料包括25～30質(zhì)量份凝結(jié)芽孢桿菌、20～25質(zhì)量份枯草芽孢桿菌和20～25質(zhì)量份丁酸梭菌。于本發(fā)明另一實施方式中，預(yù)混合飼料包括25～30質(zhì)量份凝結(jié)芽孢桿菌、20～25質(zhì)量份枯草芽孢桿菌、20～25質(zhì)量份丁酸梭菌、10～15質(zhì)量份酵母細(xì)胞壁和5～10質(zhì)量份復(fù)合維生素。于本發(fā)明另一實施方式中，預(yù)混合飼料包括25質(zhì)量份凝結(jié)芽孢桿菌、20質(zhì)量份枯草芽孢桿菌、20質(zhì)量份丁酸梭菌、10質(zhì)量份酵母細(xì)胞壁和5質(zhì)量份復(fù)合維生素。復(fù)合維生素可以去除自由基，保護(hù)生物膜和肝臟，免受霉菌毒素的氧化損傷。本發(fā)明對復(fù)合維生素的種類沒有限定，現(xiàn)有的復(fù)合維生素均可用于本發(fā)明。本發(fā)明對預(yù)混合飼料各成分的制備方法沒有限定，各成分均可按照現(xiàn)有的方法制得，混合后即可得到本發(fā)明的仔豬復(fù)合預(yù)混料。例如，本發(fā)明一實施方式的可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料的制備方法，包括：a、以常規(guī)發(fā)酵底物配制發(fā)酵液；b、根據(jù)各菌株的特性，將凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，然后經(jīng)液體深層發(fā)酵；c、終止發(fā)酵后采用微囊包被噴霧干燥法，凍干制劑法制成粉劑，所有原料按一定的重量配比混合，攪拌均勻，粉碎成過20目篩的顆粒，制得產(chǎn)品即得到高活性可降解霉菌毒素的復(fù)合預(yù)混料。其中，常規(guī)發(fā)酵底物可以包含玉米粉、蛋白胨、酵母提取物、糖蜜、水等。本申請一實施方式的預(yù)混合飼料，不僅可顯著提高仔豬的平均日增重，改善料肉比，顯著降低仔豬的腹瀉率以及死淘率，提高仔豬的生產(chǎn)性能以及經(jīng)濟(jì)效益，還可以提高母豬的采食量，降低母豬產(chǎn)后感染率，并能提高母畜的產(chǎn)奶量和乳汁率。本申請一實施方式的預(yù)混合飼料，可使動物生殖系統(tǒng)免受霉毒素侵害，減少輸卵管炎等生殖疾病，從而改善母畜發(fā)情、泌乳，減少死胎流產(chǎn)等，提高產(chǎn)仔數(shù)，使幼崽成活率高，提高了繁殖效率。本申請一實施方式的預(yù)混合飼料，還可保護(hù)免疫系統(tǒng)免受霉菌毒素的侵害，提高抗病率，減少發(fā)病率，并能高效清除霉菌毒素造的飼料污染。下面，通過具體實施例對本發(fā)明一實施方式的可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料做進(jìn)一步說明。其中，所使用的枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌及丁酸梭菌均購自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物研究所；枯草芽孢桿菌的保藏號為GIM1.254，凝結(jié)芽孢桿菌的保藏號為GIM1.204，丁酸梭菌的保藏號為GIM1.676。如無特別說明，應(yīng)用例中所使用的基礎(chǔ)飼料的組成為：基礎(chǔ)日糧組成原料玉米麩皮豆粕菜餅預(yù)混料磷酸氫鈣石粉食鹽日糧組成％7013105100.640.36實施例可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料的制備a、以常規(guī)發(fā)酵底物(玉米粉、蛋白胨、酵母提取物、糖蜜、水)配制發(fā)酵液；b、根據(jù)枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌及丁酸梭菌的特性分別進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，然后先好氧后厭氧的方式進(jìn)行液體深層發(fā)酵；c、終止發(fā)酵后采用微囊包被噴霧干燥法，凍干制劑法將上述三種菌制成粉劑，按照20質(zhì)量份枯草芽孢桿菌、25質(zhì)量份凝結(jié)芽孢桿菌及20質(zhì)量份丁酸梭菌的重量配比將三者混合，攪拌均勻，粉碎成過20目篩的顆粒，制得產(chǎn)品即得到高活性可降解霉菌毒素的預(yù)混合飼料。應(yīng)用例1活性度試驗以腸道菌群為靶標(biāo)的活性飼料評價方法：通過無菌動物、宏基因組技術(shù)檢測本申請實施例制得的預(yù)混合飼料對動物腸道菌群正向或負(fù)向波動來評價該預(yù)混合飼料的活性度。實驗動物與處理：給豬源菌群小鼠模型(重慶三軍醫(yī)大學(xué)無菌實驗室提供)分別飼喂實施例制得的預(yù)混合飼料(添加量5g/kg)、化學(xué)脫霉劑(蒙脫石，添加量5g/kg)、基礎(chǔ)飼料主要試劑與儀器：DNA提取試劑盒、培養(yǎng)基、離體恒化器、PCR擴(kuò)增儀、超低溫冰箱(-80℃)、超凈工作臺、顯微鏡等。1.體內(nèi)活性因子評價以豬源菌群小鼠模型為實驗動物，通過16SrRNA檢測方法，檢測生物脫霉劑對腸道菌群的正向調(diào)控作用。1.1實驗動物與處理將30只小鼠(6周齡，雌雄各半)分為3組，每組10只。對照組飼喂基礎(chǔ)飼料，A組飼喂基礎(chǔ)飼料+實施例制得的預(yù)混合飼料，B組飼喂基礎(chǔ)飼料+化學(xué)脫霉劑。1.2樣本采集自飼喂后的第4周起定期取小鼠新鮮糞便樣品(3份)并拍照，裝于2mL無菌EP管中，凍藏于-80℃待用。1.3DNA提取取小鼠糞便20mg，于2mL螺口管中，加入700μL裂解液；具體參照天根的糞便基因組DNA提取試劑盒的說明進(jìn)行。1.416SrRNA測序每組3個重復(fù)，共9個樣品測序。2.體外活性因子評價以接種豬腸道菌群的離體恒化器為模型，通過16SrRNA檢測方法，檢測本申請實施例制得的預(yù)混合飼料對腸道菌群的正向調(diào)控作用。2.1離體恒化器分組和處理使用3套離體恒化器模型，分為空白對照組、預(yù)混合飼料組及化學(xué)脫霉劑組，離體模型接種豬腸道菌群14d后，向預(yù)混合飼料組添加本申請實施例的預(yù)混合飼料2.5g，向化學(xué)脫霉劑組添加脫霉劑2.5g，連續(xù)作用8天。2.2樣本采集糞便接種發(fā)酵罐后，在加預(yù)混合飼料及脫霉劑8天后采集培養(yǎng)液，裝于2mL無菌EP管中，凍藏于-80℃待用，用于細(xì)菌數(shù)量檢測和菌群結(jié)構(gòu)分析。2.3DNA提取和16SrDNA測序方法同1.3與1.4。3.實驗結(jié)果通過16SrDNA測序表明本申請實施例的預(yù)混合飼料對腸道菌群有正向激活作用：(1)擬桿菌、梭菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益共生菌群的豐度上調(diào)；(2)腸球菌、腸桿菌等條件性致病菌的豐度下調(diào)；(3)沙門氏菌和致病大腸桿菌等外源致病菌群消失。應(yīng)用例2仔豬解毒試驗將96只平均體重25±0.5kg健康的三元仔豬，隨機(jī)分成3個處理，每個處理4個重復(fù)，每個重復(fù)8頭仔豬，飼養(yǎng)期為21天?？瞻讓φ战M：飼喂基礎(chǔ)日糧(正常玉米)；霉玉米對照組：飼喂霉變玉米等量替換基礎(chǔ)日糧中20％的正常玉米；試驗組：飼喂霉變玉米等量替換基礎(chǔ)日糧中20％的正常玉米+1kg/t實施例的預(yù)混合飼料。試驗地點：河南某養(yǎng)殖試驗場表1實施例的預(yù)混合飼料和霉玉米對小豬的影響表1的結(jié)果顯示：霉玉米對照組可以導(dǎo)致仔豬拉稀，本申請實施例的預(yù)混合飼料可以防止仔豬拉稀，對霉玉米具有解毒作用。霉玉米對照組試驗小豬采食2～3天后，個別小豬出現(xiàn)拉稀和陰門紅腫現(xiàn)象，采食量下降，小豬生長緩慢。用液體狀的本申請實施例的預(yù)混合飼料噴涂于基礎(chǔ)飼料表面飼喂霉對照組小豬，2～3天后拉稀現(xiàn)象消失，5～7天后陰門紅腫現(xiàn)象消失，后期采食量和日增重恢復(fù)到正常水平。應(yīng)用例3對斷奶仔豬的促生長作用本試驗選用35±1日齡、平均體重7.86±0.06kg健康的三元(杜×長×大)雜交斷奶仔豬90頭，隨機(jī)分為3個處理組，每個處理組設(shè)5個重復(fù)，每個重復(fù)6頭仔豬(公母各半)，各重復(fù)組間初始體重?zé)o顯著性差異(p>0.05)。3個處理組分別為：空白對照組(基礎(chǔ)日糧)、抗生素對照組(金霉素的添加量為75mg/kg飼料)和試驗組(本申請實施例的預(yù)混合飼料添加量1g/kg飼料)。仔豬自由采食和飲水，飼養(yǎng)管理和免疫程序參照仔豬飼養(yǎng)管理手冊。表2本申請實施例的預(yù)混合飼料對斷奶仔豬的促生長作用表2的結(jié)果顯示：本申請實施例的預(yù)混合飼料可顯著提高仔豬的平均日增重(p<0.05)，改善料肉比，并顯著降低仔豬的腹瀉率以及死淘率(p<0.05)，提高仔豬的生產(chǎn)性能以及經(jīng)濟(jì)效益，能有效替代抗生素添加劑。應(yīng)用例4對玉米赤霉烯酮中毒青年母豬癥狀的緩解效果選擇平均體重42～45kg左右的三元雜交青年母豬18頭，隨機(jī)分為3個處理，每個處理6個重復(fù)，每個重復(fù)1頭豬。對照組飼喂正常日糧，處理組Ⅰ、Ⅱ前10天飼喂含玉米赤霉烯酮(240ppb)日糧，處理組Ⅱ第11天開始飼喂含玉米赤霉烯酮(240ppb)同時添加本申請實施例的預(yù)混合飼料(2kg/t)的日糧。圖1示出了添加本申請實施例的預(yù)混合飼料對玉米赤霉烯酮中毒豬陰戶面積的影響；圖2A至4B示出了試驗前后母豬陰戶變化情況。由圖1至4B可知：飼喂玉米赤霉烯酮含量為240ppb的日糧可引起青年母豬玉米赤霉烯酮中毒，使豬的陰戶面積增大，出現(xiàn)外陰紅腫現(xiàn)象，在霉變?nèi)占Z中添加本申請實施例的預(yù)混合飼料可緩解豬的中毒癥狀，使陰戶面積恢復(fù)到正常組的水平。應(yīng)用例5對母豬的影響將40頭母豬按照體重、胎次隨機(jī)分成兩組，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.1％本申請實施例的預(yù)混合飼料寶，從產(chǎn)前一周開始飼喂，至產(chǎn)后三周斷奶結(jié)束。表3本申請實施例的預(yù)混合飼料對母豬繁殖和生產(chǎn)性能的改善由表3可知：本申請實施例的預(yù)混合飼料可以提高母豬的采食量，降低母豬產(chǎn)后感染率，可以提高仔豬的日增重，降低仔豬的腹瀉率和淘汰率。除非特別限定，本發(fā)明所用術(shù)語均為本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義。本發(fā)明所描述的實施方式僅出于示例性目的，并非用以限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，本領(lǐng)域技術(shù)人員可在本發(fā)明的范圍內(nèi)作出各種其他替換、改變和改進(jìn)，因而，本發(fā)明不限于上述實施方式，而僅由權(quán)利要求限定。當(dāng)前第1頁1 2 3