專利名稱：鹽藻的一種培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藻類植物的培養(yǎng)方法，特別是涉及一種培養(yǎng)鹽藻的方法。
背景技術(shù)：
鹽藻(Dunaliella salina Teod.)，又稱杜氏藻，在分類地位上屬綠藻門，綠藻綱，團藻目，鹽藻科，鹽藻屬，是一種單細(xì)胞的海洋經(jīng)濟藻類，廣泛分布在世界各地的海洋、鹽池、咸水湖和淡咸水中，是已知唯一能在接近淡水至飽和鹽溶液中生長的真核生物。鹽藻對極端環(huán)境有極好的耐受性，在高鹽、高光、低溫和高溫下都能夠生存、生長。鹽藻在體內(nèi)能夠合成并積累大量的β-胡蘿卜素，是生產(chǎn)天然β-胡蘿卜素最為理想的原料。因此，以生產(chǎn)β-胡蘿卜素為目的的鹽藻培養(yǎng)在國際上受到重視。
目前，鹽藻的開放式的規(guī)?；囵B(yǎng)還存在著許多問題。如鹽藻的開放式培養(yǎng)除了受季節(jié)、營養(yǎng)鹽濃度、溫度和通氣量的影響外，還受到以鹽藻為食物的纖毛蟲種群的影響。這種分類地位尚未確定的纖毛蟲繁殖快，食量大，和鹽藻一樣，它能夠耐受很高的鹽度，在近飽和鹽度條件下依然可以存活，對鹽藻的培養(yǎng)危害十分嚴(yán)重，是構(gòu)成鹽藻戶外養(yǎng)殖失敗的主要原因。因此，纖毛蟲的防治成為鹽藻開放式培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵。纖毛蟲防治的理想藥物必須是對纖毛蟲有很大的毒性而對鹽藻細(xì)胞無毒或毒性較低。有關(guān)藻類培養(yǎng)過程中有害原生動物防治方法目前已有一些報道，如將藻液pH值降至4.5以下或提高至11以上可以殺死小球藻液中的纖毛蟲(王秀云，何振平，張志茹.酸化處理小球藻液對纖毛蟲殺滅效果的研究.水產(chǎn)科學(xué)，2005，24(7)20-22)，但這種方法對小球藻的傷害比對纖毛蟲的傷害還要大；Moreno-Garrido等在實驗室用硫酸奎寧控制纖毛蟲種群雖然取得一定效果(Moreno-Garrido，Canavate J P.Assessing chemical compounds for controlling predator ciliates in outdoor masscultures of the green algae Dunaliella salina[J].Aquacultural Engineering.2001，24107-114)，但硫酸奎寧對鹽藻細(xì)胞也有毒性，而且在規(guī)?；_放式培養(yǎng)中使用硫酸奎寧防治敵害生物的污染成本過高，因而無法推廣使用。因此，迫切需要一種成本低廉、抗纖毛蟲效果顯著的鹽藻的開放式養(yǎng)殖方法。
青蒿(Herba Artemisiae Annuae)，別名香蒿、苦蒿、黃蒿等，菊科一年生草本植物。高達1.5m；全株黃綠色，有臭氣；莖直立，具縱條紋，上部分枝?；考跋虏咳~在花期枯萎，中部葉卵形，長4.5-7cm，2-3回羽狀深裂，小裂片線形，寬約0.3mm，先端尖銳，表面深綠色，背面色較淺，無毛或略具細(xì)微軟毛，有柄；上部葉漸小，無柄；頭狀花序多數(shù)，球形，直徑約2mm，具細(xì)軟短梗，排成圓錐狀；總苞片2-3層；花管狀，雌花長約0.5mm，兩性花長約1mm，黃色；花藥先端尖尾狀，基部圓鈍；柱頭2裂，裂片先端呈畫筆狀。瘦果橢圓形，長約0.6mm?；ㄆ?-10月，果期10-11月。全草入藥。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種成本低廉，既可提高生物量及β-胡蘿卜素積累量，又對纖毛蟲具有防治作用的鹽藻的培養(yǎng)方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計方案一種培養(yǎng)鹽藻的方法，是對鹽藻進行常規(guī)培養(yǎng)，并在無纖毛蟲污染的情況下，向常規(guī)培養(yǎng)鹽藻的培養(yǎng)基中添加青蒿的水提取物和/或乙醇提取物；在受到纖毛蟲污染的情況下，向常規(guī)培養(yǎng)鹽藻的培養(yǎng)基中添加青蒿的乙醇提取物。
在上述培養(yǎng)方法中，所述鹽藻培養(yǎng)基的選擇是多種多樣的，如海水、ModifiedJohnson’s培養(yǎng)基、f/12或ASP2培養(yǎng)基等；所述鹽藻的常規(guī)培養(yǎng)條件可為培養(yǎng)溫度24-26℃，光照強度100-150μmoles·m-2·s-1，光照時間10-14h/天。
青蒿的水提取物的制備方法可為將青蒿置于沸水中煮1.5-3h，然后過濾，再將濾液減壓濃縮后凍干，得到青蒿的水提取物。
青蒿的乙醇提取物的制備方法可為將青蒿置于體積百分濃度為60-80％的乙醇中浸泡12-24h，然后回流10-20h，再將提取液減壓濃縮后凍干，得到青蒿的乙醇提取物。
由于青蒿是全草入藥的，因而其乙醇提取物或水提取物為全草或選自葉、秸稈等一個或多個部位的乙醇提取物或水提取物，優(yōu)選為青蒿的乙醇提取物，尤其優(yōu)選為青蒿葉的乙醇提取物。
在無纖毛蟲污染的情況下，培養(yǎng)基中青蒿秸稈的水提取物的濃度可為150-300mg/L，優(yōu)選為221mg/L，青蒿秸稈的乙醇提取物的濃度可為68-130mg/L，優(yōu)選為100mg/L，青蒿葉的乙醇提取物的濃度可為120-350mg/L，優(yōu)選為150-300mg/L。
在受到纖毛蟲污染的情況下，培養(yǎng)基中青蒿秸稈的乙醇提取物的濃度可為410-419mg/L，優(yōu)選為410mg/L，青蒿葉的乙醇提取物的濃度可為340-610mg/L，優(yōu)選為340mg/L。
用上述培養(yǎng)方法獲得的鹽藻以及從中提取的β-胡蘿卜素也是本發(fā)明要保護的。所述提取的β-胡蘿卜素可以制備成抑制腫瘤、抗輻射等藥物，還可作為食品色素，制成口服液、沖劑、口含片或水分散型干粉等多種劑型的天然胡蘿卜素。
本發(fā)明提供了一種培養(yǎng)鹽藻的方法。該培養(yǎng)方法中的青蒿的水提取物，乙醇提取物不僅可有效地防治纖毛蟲，還可以提高鹽藻的生長速率、生物量及β-胡蘿卜素積累量。實驗證明，添加一定濃度的青蒿的水提取物和/或乙醇提取物后，鹽藻的生長速率、生物量及β-胡蘿卜素積累量均得到顯著提高，藻細(xì)胞密度最高可比對照組(常規(guī)培養(yǎng))的最大細(xì)胞密度高出21.8％，β-胡蘿卜素含量比對照可高出26.5％。本發(fā)明不僅解決了鹽藻開放式養(yǎng)殖中纖毛蟲的污染問題，還具有成本低，收效高，無污染，操作簡單的優(yōu)點，將對鹽藻和β-胡蘿卜素產(chǎn)業(yè)的跨躍式發(fā)展起到重要的推動作用，應(yīng)用前景廣闊。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)說明。
圖1為添加不同濃度的青蒿秸稈的水提取物對鹽藻生長影響的檢測結(jié)果圖2為添加不同濃度的青蒿秸稈的乙醇提取物對鹽藻生長影響的檢測結(jié)果圖3為添加不同濃度的青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻生長影響的檢測結(jié)果圖4為青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻β-胡蘿卜素積累影響的檢測結(jié)果圖5為青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對纖毛蟲防治作用的檢測結(jié)果圖6為青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物在對纖毛蟲進行防治的同時鹽藻中β-胡蘿卜素積累量的檢測結(jié)果具體實施方式
下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
實施例1、青蒿水提取物及乙醇提取物對鹽藻和纖毛蟲的毒性檢測現(xiàn)以青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物為例，檢測青蒿水提物及醇提物對鹽藻和纖毛蟲的毒性，具體方法包括如下一、青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物的制備1、制備青蒿秸稈的水提取物稱取200g青蒿秸稈，放入3L圓底燒瓶中，加入蒸餾水煮沸2h，過濾，將濾液減壓濃縮后冷凍干燥，得到青蒿秸稈的水提取物(簡稱青蒿水提物)。
2、制備青蒿秸稈的乙醇提取物稱取200g青蒿秸稈，置于體積百分濃度為70％的乙醇中浸泡20h，回流，將提取液減壓濃縮后冷凍干燥，得到青蒿秸稈的乙醇提取物(簡稱青蒿醇提物)。
3、制備青蒿葉的乙醇提取物(簡稱青蒿葉醇提物)制備方法與步驟2相同。
二、毒性檢測現(xiàn)測定步驟一制備的青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻的72h IC50和對纖毛蟲的24h LC100。其中，對纖毛蟲的24h LC100測定方法為先取纖毛蟲置于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔約10只，把上述青蒿的三種提取物配制成0(對照)、100、500、1000、2000和4000mg/L的大梯度濃度溶液，再分別加到有纖毛蟲的48孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，確定出對纖毛蟲的致死范圍；然后再在48孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的每一孔放入10條纖毛蟲，把上述青蒿的三種提取物配制成0(對照)、50、100、200、400和800mg/L小梯度濃度溶液，再加入到有纖毛蟲的48孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每個濃度梯度設(shè)3個平行對照，24h后在顯微鏡下觀察，得出24h LC100。對鹽藻的72hIC50測定方法采用阻礙生長實驗法(黃小娟等，硝基芳烴類物質(zhì)對鹽藻生長阻礙聯(lián)合毒性試驗及比較，廣州食品工業(yè)科技，20(1)27-29)，分別計算上述青蒿的三種提取物對鹽藻的半數(shù)生長抑制濃度(72h IC50)，公式如下U＝(ln Nt-ln N0)/(t-t0)(U相對生長速率；N0，Nt分別為t0時間和t時間的細(xì)胞數(shù))阻礙率＝(Ub-Uc)/Ub(Ub對照組的生長速度，Uc加入青蒿提取物時的生長速度)，再將青蒿提取物的濃度與生長速度阻礙率進行線性回歸，求出72h IC50。
青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻和纖毛蟲的毒性檢測結(jié)果如表1所示，青蒿秸稈的水提物對鹽藻生長的72h IC50為1736mg/L，小于秸稈的水提物對纖毛蟲的24h LC100(3315mg/L)，因此要對藻液中的纖毛蟲起到防治作用，加入青蒿秸稈水提物的濃度應(yīng)不小于3315mg/L，這個濃度雖然不能將鹽藻全部致死，但是會對鹽藻的生長產(chǎn)生較強的抑制作用，因而不能有效防治纖毛蟲對培養(yǎng)物的污染。青蒿秸稈的乙醇提取物對鹽藻生長的72h IC50為419mg/L，稍大于其對纖毛蟲的24h LC100(410mg/L)，在治理纖毛蟲污染的時候，加入青蒿秸稈乙醇提取物的濃度在410-419mg/L時，對鹽藻的抑制作用較小。青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻生長的72h IC50為610mg/L，遠大于其對纖毛蟲的24h LC100(340mg/L)，加入青蒿葉的乙醇提取物的濃度為340-610mg/L時，就能有效殺死纖毛蟲，而對鹽藻生長的影響較小。上述檢測結(jié)果表明以在防治纖毛蟲污染時，采用青蒿乙醇提取物的效果較好，青蒿葉的乙醇提取物效果更佳。
表1 青蒿不同提取物對鹽藻和纖毛蟲的毒性檢測結(jié)果
實施例2、鹽藻的培養(yǎng)及不同濃度的青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻生長的影響1、鹽藻的培養(yǎng)及不同濃度的青蒿秸稈的水提取物對鹽藻生長的影響將鹽藻按1×104個/mL的密度接種于Modified Johnson’s培養(yǎng)基(pH 7.5)中，同時向培養(yǎng)基中添加濃度分別為0(對照)，221，442，884，1768mg/L的實施例1制備的青蒿秸稈的水提取物，每個濃度平行設(shè)3組，在25℃，光照強度130μmoles·m-2·s-1，光照時間12h/天，130rpm的條件下對鹽藻進行振蕩培養(yǎng)，以檢測不同濃度的青蒿秸稈的水提取物對鹽藻生長的影響。結(jié)果如圖1所示，在培養(yǎng)前5天，培養(yǎng)基中加入青蒿秸稈的水提取物的鹽藻比不加青蒿水提物的鹽藻生長速度慢，但從第6天開始，青蒿秸稈的水提取物添加濃度為221mg/L組的鹽藻的生長速率加快，細(xì)胞密度超過了對照組，在培養(yǎng)末期，其藻細(xì)胞密度比對照組高出了14.44％，且未受到纖毛蟲污染，而在添加其它濃度青蒿秸稈水提取物的培養(yǎng)基中的鹽藻的生長都或多或少地被抑制，表明在未受纖毛蟲污染的情況下，添加一定濃度(150-300mg/L，優(yōu)選為221mg/L)的青蒿秸稈的水提取物可提高鹽藻的生長速率和生物量，并具有預(yù)防纖毛蟲污染的作用。證明用本發(fā)明的方法進行鹽藻培養(yǎng)，不僅可有效地防治纖毛蟲，還可以提高鹽藻的生物量。
2、鹽藻的培養(yǎng)及不同濃度的青蒿秸稈的乙醇提取物對鹽藻生長的影響將鹽藻按1×105個/mL的密度接種于Modified Johnson’s培養(yǎng)基(pH 7.5)中，同時向培養(yǎng)基中添加濃度分別為0(對照)，100，200，400，600mg/L的實施例1制備的青蒿秸稈的乙醇提取物，每個濃度平行設(shè)3組，在25℃，光照強度130μmoles·m-2·s-1，光照時間12h/天，130rpm的條件下對鹽藻進行振蕩培養(yǎng)，以檢測不同濃度的青蒿秸稈的乙醇提取物對鹽藻生長的影響。結(jié)果如圖2所示，培養(yǎng)基中青蒿秸稈的乙醇提取物濃度為100mg/L時，對鹽藻的生長有促進作用，細(xì)胞密度最大可達3.96×106個/mL，與對照組的最大細(xì)胞密度3.2×106個/mL相比，增加了19.9％，且未受到纖毛蟲污染，培養(yǎng)基中添加的青蒿秸稈水提取物的濃度越高，對鹽藻生長的抑制作用越大。上述檢測結(jié)果表明在未受纖毛蟲污染的情況下，添加一定濃度(68-130mg/L，優(yōu)選為100mg/L)的青蒿秸稈的水提取物可提高鹽藻的生長速率和生物量，并具有預(yù)防纖毛蟲污染的作用。再次證明用本發(fā)明的方法進行鹽藻培養(yǎng)，不僅可有效地防治纖毛蟲，還可以提高鹽藻的生物量。
3、鹽藻的培養(yǎng)及不同濃度的青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻生長的影響將鹽藻按1×104個/mL的密度接種于Modified Johnson’s培養(yǎng)基(pH 7.5)中，同時向培養(yǎng)基中添加濃度分別為0(對照)，150，300，450，600mg/L的實施例1制備的青蒿葉的乙醇提取物，每個濃度平行設(shè)3組，在25℃，光照強度130μmoles·m-2·s-1，光照時間12h/天，130rpm的條件下對鹽藻進行振蕩培養(yǎng)，以檢測不同濃度的青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻生長的影響。結(jié)果如圖3所示，青蒿葉的乙醇提取物的濃度為150mg/L時，對鹽藻生長有很大的促進作用，最大藻細(xì)胞密度達4.1135×106個/mL，比對照組的最大細(xì)胞密度3.215×106個/mL高出了21.8％；加入青蒿葉的乙醇提取物濃度為300mg/L時，對鹽藻的生長也有促進作用，最大細(xì)胞密度為3.35×106個/毫升，也比對照的最大細(xì)胞密度要高，且均未受到纖毛蟲污染，而加入其它濃度的青蒿葉的乙醇提取物時，濃度越高對鹽藻生長的抑制作用越大。上述檢測結(jié)果表明在未受纖毛蟲污染的情況下，添加一定濃度(120-350mg/L，優(yōu)選為150-300mg/L)的青蒿葉的乙醇提取物可提高鹽藻的生長速率和生物量，并具有預(yù)防纖毛蟲污染的作用。進一步證明用本發(fā)明的方法進行鹽藻培養(yǎng)，不僅可有效地防治纖毛蟲，還可以提高鹽藻的生物量。
實施例3、鹽藻的培養(yǎng)及青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻β-胡蘿卜素積累的影響將鹽藻按1×104個/mL的密度接種于Modified Johnson’s培養(yǎng)基(pH 7.5)中，同時向培養(yǎng)基中分別添加濃度為221mg/L的青蒿秸稈的水提取物，濃度為100mg/L的青蒿秸稈的乙醇提取物和濃度為150mg/L的青蒿葉的乙醇提取物，以不添加青蒿提取物的為對照，在25℃，光照強度130μmoles·m-2·s-1，光照時間12h/天，130rpm的條件下對鹽藻進行振蕩培養(yǎng)，隔天測定β-胡蘿卜素含量，以檢測青蒿秸稈的水提取物、乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對鹽藻β-胡蘿卜素積累的影響。β-胡蘿卜素含量的測定方法為首先，參考文獻(劉建國，吳超元.鹽藻和β-胡蘿卜素研究述評[J].海洋與湖沼，1995，26(3)323-330)中的方法提取β-胡蘿卜素，然后用722S分光光度計(購自上海分析儀器廠)測450nm光吸收值，按下式計算β-胡蘿卜素含量
β-胡蘿卜素(mg/L)＝OD450×D×10000/2500(式中D稀釋倍數(shù)；2500為1％β-胡蘿卜素純品的百分吸收系數(shù))。
β-胡蘿卜素含量的測定結(jié)果如圖4所示，在培養(yǎng)的前5天，三種青蒿提取物對鹽藻中β-胡蘿卜素積累的影響沒有明顯的差異，但隨著培養(yǎng)時間的延長，青蒿提取物對鹽藻β-胡蘿卜素積累的影響越來越明顯。在培養(yǎng)末期，加入青蒿提取物的鹽藻積累的β-胡蘿卜素的量都比對照組積累的多，β-胡蘿卜素累積量的多少順序依次是青蒿葉的乙醇提取物＞青蒿秸稈的乙醇提取物＞青蒿秸稈的水提取物＞對照組，添加有青蒿提取物的三組比對照組的β-胡蘿卜素含量分別高出了26.5％，22.8％，12％，且均未受到纖毛蟲污染。上述檢測結(jié)果表明在未受纖毛蟲污染的情況下，添加一定濃度的青蒿水提取物和/或乙醇提取物(如221mg/L左右的青蒿秸稈的水提取物，100mg/L左右的青蒿秸稈的乙醇提取物，150mg/L左右的青蒿葉的乙醇提取物)不僅可提高鹽藻的β-胡蘿卜素累積量，并具有預(yù)防纖毛蟲污染的作用，證明用本發(fā)明的方法進行鹽藻培養(yǎng)，不僅可有效地防治纖毛蟲，還可以提高鹽藻的β-胡蘿卜素的累積量。
實施例4、鹽藻的培養(yǎng)及檢測青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對纖毛蟲的防治作用根據(jù)實施例1的實驗結(jié)果，本實施例中在治理纖毛蟲污染時采用青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物，加入的提取物終濃度分別是對纖毛蟲的24h LC100的濃度，即青蒿秸稈的乙醇提取物410mg/L，青蒿葉的乙醇提取物340mg/L。首先，將鹽藻按1×105個/mL的密度接種于Modified Johnson’s培養(yǎng)基(pH 7.5)中，在25℃，光照強度130μmoles·m-2·s-1，光照時間12h/天，130rpm的條件下對鹽藻進行振蕩培養(yǎng)，然后在鹽藻培養(yǎng)的第2天，向培養(yǎng)液中接入約60只/mL纖毛蟲，再在培養(yǎng)的第3天分別向培養(yǎng)基中分別添加濃度為410mg/L的青蒿秸稈的乙醇提取物和340mg/L的青蒿葉的乙醇提取物，以常規(guī)培養(yǎng)的鹽藻和接入相同量纖毛蟲的鹽藻為對照，分設(shè)3個平行，每天測定鹽藻的細(xì)胞密度，以檢測青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物對纖毛蟲的防治作用。檢測結(jié)果如圖5所示，在鹽藻培養(yǎng)液中接入纖毛蟲后，鹽藻密度迅速的下降，在培養(yǎng)的第6天，藻細(xì)胞幾乎被纖毛蟲全部吞噬，導(dǎo)致鹽藻培養(yǎng)失??；而加入青蒿葉的乙醇提取物后第2天藻細(xì)胞即恢復(fù)生長；加入青蒿秸稈的乙醇提取物后的第4天藻細(xì)胞開始恢復(fù)生長，原因可能是該提取物在抑制纖毛蟲的同時，對鹽藻也有一定的毒性，導(dǎo)致藻細(xì)胞生長恢復(fù)相對延遲。上述檢測結(jié)果表明青蒿的乙醇提取物對纖毛蟲污染具有較好的防治效果，且青蒿葉的乙醇提取物比青蒿秸稈的乙醇提取物治理纖毛蟲的效果更好，證明用本發(fā)明的方法進行鹽藻培養(yǎng)，可有效地防治纖毛蟲。
實施例5、鹽藻的培養(yǎng)及檢測青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物在對纖毛蟲進行防治的同時對鹽藻β-胡蘿卜素積累的影響將鹽藻按1×105個/mL的密度接種于Modified Johnson’s培養(yǎng)基(pH 7.5)中，在25℃，光照強度130μmoles·m-2·s-1，光照時間12h/天，130rpm的條件下對鹽藻進行振蕩培養(yǎng)，然后在鹽藻培養(yǎng)的第2天，向培養(yǎng)液中接入約60只/mL纖毛蟲，再在培養(yǎng)的第3天分別向培養(yǎng)基中分別添加濃度為410mg/L的青蒿秸稈的乙醇提取物和340mg/L的青蒿葉的乙醇提取物，以常規(guī)培養(yǎng)的鹽藻為對照，分設(shè)3個平行，β-胡蘿卜素含量(測定方法同實施例3)，以檢測青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物在對纖毛蟲進行防治的同時對鹽藻β-胡蘿卜素積累的影響。檢測結(jié)果如圖6所示(箭頭1表示在培養(yǎng)第2天向培養(yǎng)基中添加纖毛蟲，箭頭2表示在培養(yǎng)第3天向培養(yǎng)基中添加青蒿秸稈的乙醇提取物及青蒿葉的乙醇提取物)，在加入秸稈的乙醇提取物后的第4天，β-胡蘿卜素的積累量開始迅速增加；而加入青蒿葉的乙醇提取物后的第2天，β-胡蘿卜素的含量即開始增加，第6天鹽藻中的β-胡蘿卜素的含量幾乎超過了對照組的含量。上述檢測結(jié)果表明用本發(fā)明的方法進行鹽藻培養(yǎng)，不僅可有效地防治纖毛蟲，還可以提高鹽藻的生物量和β-胡蘿卜素的累積量。
權(quán)利要求
1.一種培養(yǎng)鹽藻的方法，是對鹽藻進行常規(guī)培養(yǎng)，其特征在于在無纖毛蟲污染的情況下，向培養(yǎng)基中添加青蒿的水提取物和/或乙醇提取物；在受到纖毛蟲污染的情況下，向培養(yǎng)基中添加青蒿的乙醇提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述青蒿的水提取物的制備方法為將青蒿置于沸水中煮1.5-3h，然后過濾，再將濾液減壓濃縮后凍干，得到青蒿的水提取物；所述青蒿的乙醇提取物的制備方法為將青蒿置于體積百分濃度為60-80％的乙醇中浸泡12-24h，然后回流10-20h，再將提取液減壓濃縮后凍干，得到青蒿的乙醇提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述青蒿的乙醇提取物或水提取物為全草或選自葉、秸稈一個或多個部位的乙醇提取物或水提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于在無纖毛蟲污染的情況下，所述培養(yǎng)基中青蒿秸稈的水提取物的濃度為150-300mg/L，青蒿秸稈的乙醇提取物的濃度為68-130mg/L，青蒿葉的乙醇提取物的濃度為120-350mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基中青蒿秸稈的水提取物的濃度為221mg/L，青蒿秸稈的乙醇提取物的濃度為100mg/L，青蒿葉的乙醇提取物的濃度為150-300mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于在受到纖毛蟲污染的情況下，所述青蒿秸稈的乙醇提取物的濃度為410-419mg/L，青蒿葉的乙醇提取物的濃度為340-610mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述青蒿秸稈的乙醇提取物的濃度為410mg/L，青蒿葉的乙醇提取物的濃度為340mg/L。
8.用權(quán)利要求1或2所述方法獲得的鹽藻。
9.一種利用鹽藻生產(chǎn)β-胡蘿卜素的方法，是自培養(yǎng)得到的鹽藻中分離β-胡蘿卜素；其中，所述鹽藻是采用以下方法得到的對鹽藻進行常規(guī)培養(yǎng)，在無纖毛蟲污染的情況下，向培養(yǎng)基中添加青蒿的水提取物和/或乙醇提取物；在受到纖毛蟲污染的情況下，向培養(yǎng)基中添加青蒿的乙醇提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種培養(yǎng)鹽藻的方法。該方法是在無纖毛蟲污染的情況下，向常規(guī)培養(yǎng)鹽藻的培養(yǎng)基中添加青蒿的水提取物和/或乙醇提取物；在受到纖毛蟲污染的情況下，向常規(guī)培養(yǎng)鹽藻的培養(yǎng)基中添加青蒿的乙醇提取物。本發(fā)明不僅解決了鹽藻開放式養(yǎng)殖中纖毛蟲的污染問題，還具有成本低，收效高，無污染，操作簡單的優(yōu)點，將對鹽藻和β－胡蘿卜素產(chǎn)業(yè)的跨躍式發(fā)展起到重要的推動作用，應(yīng)用前景廣闊。
文檔編號C12P23/00GK1923995SQ200610113360
公開日2007年3月7日 申請日期2006年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月25日
發(fā)明者鄭維發(fā), 杜彩華, 陳才法, 儲成才 申請人:江蘇省藥用植物生物技術(shù)重點實驗室