專利名稱：櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種櫸樹的組培快繁方法。
背景技術(shù)：
棒樹schneideriana Hand.-Mazz.為偷科棒屬植物。是珍貴硬質(zhì)闊葉用材樹種，櫸樹的木材材質(zhì)堅硬有彈性，紋理美觀有光澤，且無特殊氣味，已成為許多家庭進(jìn)行室內(nèi)裝飾和制造高檔家具的首選材料，深受廣大消費者喜愛。同時，櫸樹的樹形美觀，樹葉會隨季節(jié)呈現(xiàn)不同的顏色，具有很高的造園和觀賞價值。而且，櫸樹病蟲害少，具有很強(qiáng)的抗病能力；樹冠和根系都很龐大，落葉量多，具有良好的水土保持和改良土壤效果，在保護(hù)和改善生態(tài)環(huán)境中起著十分重要的作用。但是，由于過多的砍伐和缺乏保護(hù)，櫸樹的野生資源已相當(dāng)匱乏，櫸樹被列為國家二級保護(hù)植物。
隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們對生活水平的新追求，目前全國各地宅區(qū)、公園、道路綠化方興未艾，我國市場對綠化苗木，特別是珍稀樹種的需求量越來越大，供需矛盾突出。加上我國人工林樹種單一化與“針葉化”現(xiàn)象非常嚴(yán)重，造成了生態(tài)系統(tǒng)失衡和經(jīng)濟(jì)效益低下等一系列問題，發(fā)展優(yōu)良硬質(zhì)闊葉人工林已引起我國林業(yè)部門的高度重視。在新一代人工林樹種結(jié)構(gòu)調(diào)整中，選擇材質(zhì)優(yōu)良的、速生性能和抗蟲能力較強(qiáng)的珍稀樹種如櫸樹造林已經(jīng)成為專家們的共識，對優(yōu)質(zhì)速生櫸樹苗木的需求不斷增加。但是，對櫸樹的研究，如引種馴化、新品種選育、繁殖和推廣等方面的研究相對滯后，種子育苗良莠不齊現(xiàn)象非常嚴(yán)重，不能提供生產(chǎn)應(yīng)用及市場供應(yīng)的科技支撐。因此，對櫸樹的快速繁殖技術(shù)的研究尤為重要。目前關(guān)于櫸樹組織培養(yǎng)的研究報道主要有頂芽的組織培養(yǎng)和通過葉片誘導(dǎo)愈傷組織的組織培養(yǎng)。頂芽的組織培養(yǎng)得到的叢生芽苗木一致性比較差，繁殖系數(shù)低(27 125);葉片誘導(dǎo)愈傷組織的組織培養(yǎng)產(chǎn)生的再生植株與母株的一致性差。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖的方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為
櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟
(1)將櫸樹幼嫩枝條用75%的酒精消毒25 35s，用無菌水沖洗，用O.1%升汞消毒8 12min，再用無菌水沖洗；
(2)將經(jīng)步驟(I)處理后的枝條切成長O.8 1. 2cm至少含有一個腋芽的莖段，植入?yún)采空T導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28 32天，獲得叢生芽；其中，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM +
I.O 3. O mg. L 1 BA + O I. O mg. L 1NAA,瓊脂 6. 5 g. L 1 ,鹿糖 20 g. L \ pH 值為 5. 7 ；
(3)將經(jīng)步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)后長出的叢生芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)6(Γ65天，進(jìn)行芽的增殖；其中，所述繼代培養(yǎng)基為=WPM + 2. 0 3· O mg. L-1 BA+1. 0 2· O mg. T1NAA,瓊脂6. 5g. L-1，鹿糖 20 g. I/1, pH 值為 5. 7 ；
(4)切取經(jīng)步驟(3)繼代培養(yǎng)后長出的高度為2.O cm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)45 50天，獲得再生植株；其中，所述生根培養(yǎng)基為生根培養(yǎng)基為WPM +O. 5 I. O mg. Γ1 IBA+2. O g. L-1AC,瓊脂 7. O mg. L' 蔗糖 20 g. Λ pH 值為 5. 7 ；
(5)將經(jīng)步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖組成的混合基質(zhì)中煉苗培養(yǎng)7 10天，再室外培養(yǎng)9(Γ100天，即可移至大田栽培，大田栽培時遮蔭一周即可。優(yōu)選地，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是當(dāng)年生春季帶芽幼嫩枝條。優(yōu)選地，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是將含腋芽的櫸樹冬季落葉的健壯枝條置于裝有蒸餾水的燒杯中，25°C下進(jìn)行水培1(Γ15天后，由腋芽萌發(fā)而成的幼嫩枝條。優(yōu)選地，步驟(5)所述的混合基質(zhì)中泥炭土和珍珠巖的體積比為1:1。優(yōu)選地，步驟(2)至(4)中的培養(yǎng)條件為室溫24 ± 2 °C，光照強(qiáng)度PPFD =65. 5 μ · moL. m 2· s S光照時間每天16小時。
其中，本發(fā)明步驟(2)中叢生芽的誘導(dǎo)率為8(Γ90%;步驟(3)中芽增殖培養(yǎng)的芽增殖系數(shù)為7 10 ;步驟(4)中生根培養(yǎng)的生根率為86、5% ;步驟(5)中移栽至大田栽培的存活率為95 100%。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為
I、本發(fā)明方法選擇帶芽莖段為外植體，并選擇合適的各階段培養(yǎng)基，進(jìn)行組織培養(yǎng)，能夠得到保持母株優(yōu)良性狀的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性。2、本發(fā)明可實現(xiàn)工廠化育苗，并大批量生產(chǎn)整齊一致的櫸樹苗木，大幅度提高繁殖系數(shù)(343 1000)。繁殖系數(shù)的計算是繁殖一次時間是4個月，一年12個月可繁殖3次，一次的增殖系數(shù)是疒10，那么一年的繁殖系數(shù)為7X7X7 IOX IOX 10 (343 1000)。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實施例I
(1)將選取的櫸樹當(dāng)年生春季帶芽幼嫩枝條用75%的酒精消毒3(T35s，用無菌水沖洗3次，用O. 1%升汞消毒8min,再用無菌水沖洗3次；
(2)將經(jīng)步驟(I)處理后的枝條切成長Icm至少含有一個腋芽的莖段，植入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28 30天，獲得叢生芽；其中，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM + 3.0 mg. Γ1 BA，瓊脂6. 5g. L—1，蔗糖20 g. L—1，pH值為5. 7，培養(yǎng)基高壓滅菌20min ;叢生芽的誘導(dǎo)率為84 90% ；
(3)將經(jīng)步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)后長出的叢生芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)60天，進(jìn)行芽的增殖，芽增殖系數(shù)為8 10 ;其中，所述繼代培養(yǎng)基為WPM + 3.0 mg. L-1 BA+2. O mg. T1NAA,瓊脂6. 5 g. L-1，蔗糖20 g. L-1，pH值為5. 7，培養(yǎng)基高壓滅菌20min ；
(4)切取經(jīng)步驟(3)繼代培養(yǎng)后長出的高度為2.Ocm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)45天，獲得再生植株，生根率為89、5%;其中，所述生根培養(yǎng)基為生根培養(yǎng)基為WPM + O. 5 mg. I/1 IBA+2. O g. L^1AC,瓊脂 7. O mg Γ1，蔗糖 20 g. Λ pH 值為 5. 7，培養(yǎng)基高壓滅菌20min ；
(5)將經(jīng)步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖按體積比1:1組成的混合基質(zhì)中煉苗培養(yǎng)7天，再室外培養(yǎng)90天，即可移至大田栽培，大田栽培時遮蔭一周即可，移栽成活率為100%。上述步驟(2)至(4)中的培養(yǎng)條件為室溫24 ± 2 °C，光照強(qiáng)度PPFD = 65. 5μ . moL. m_2· s_S光照時間每天16小時。試驗結(jié)果表明，能夠得到保持母株優(yōu)良性狀的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性，具有較高的繁殖系數(shù)(512 1000)。實施例2
將含腋芽的櫸樹冬季落葉的健壯枝條置于裝有蒸餾水的燒杯中，25°C下進(jìn)行水培15 30天后，取得腋芽萌發(fā)而成的幼嫩枝條，然后進(jìn)行如下步驟；
(1)將櫸樹幼嫩枝條用75%的酒精消毒25 30s，用無菌水沖洗3次，用O.1%升汞消毒12min,再用無菌水沖洗3次；
(2)將經(jīng)步驟(I)處理后的枝條切成長I.2cm至少含有一個腋芽的莖段，植入?yún)采空T導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)3(Γ32天，獲得叢生芽；其中，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+ 1.0 mg. Γ1BA+1. O mg. L-1NAA,瓊脂 6. 5 g. L-1 ,鹿糖 20 g. L-1, pH 值為 5. 7,培養(yǎng)基高壓滅菌 20min ；
(3)將經(jīng)步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)后長出的叢生芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)65天進(jìn)行芽的增殖培養(yǎng)，芽增殖系數(shù)為7 9 ;其中，所述繼代培養(yǎng)基為WPM +2.0 mg. L—1 BA+1. O mg. T1NAA,瓊脂6. 5 g. L-1，蔗糖20 g. L-1，pH值為5. 7，培養(yǎng)基高壓滅菌20min ；
(4)切取經(jīng)步驟(3)繼代培養(yǎng)后長出的高度為2.O cm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)50天，獲得再生植株，生根率為86% ;其中，所述生根培養(yǎng)基為生根培養(yǎng)基為WPM +1.0 mg. I/1 IBA+2. O g. L^1AC,瓊脂 7. O mg Γ1，蔗糖 20 g. Λ pH 值為 5. 7，培養(yǎng)基高壓滅菌20min ；
(5)將經(jīng)步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖按體積比1:1組成的混合基質(zhì)中煉苗培養(yǎng)10天，再室外培養(yǎng)100天，即可移至大田栽培，大田栽培時遮蔭一周即可，移栽成活率為95%。上述步驟(2)至(4)中的培養(yǎng)條件為室溫24 ± 2 °C，光照強(qiáng)度PPFD = 65. 5 μ . moL. m_2· s_S光照時間每天16小時。試驗結(jié)果表明，能夠得到保持母株優(yōu)良性狀的大量苗木，可以100%保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性，具有較高的繁殖系數(shù)(343 729)。
權(quán)利要求
1.一種櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟 (1)將櫸樹幼嫩枝條用75%的酒精消毒25 35s，用無菌水沖洗，用0.1%升汞消毒8 12min，再用無菌水沖洗； (2)將經(jīng)步驟(I)處理后的枝條切成長0.8^1. 2cm至少含有一個腋芽的莖段，植入?yún)采空T導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)28 32天，獲得叢生芽；其中，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM + I. 0 3. 0 mg. L 1 BA + 0 I. 0 mg. L 1NAA,瓊脂 6. 5 g. L 1 ,鹿糖 20 g. L \ pH 值為 5. 7 ； (3)將經(jīng)步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)后長出的叢生芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)60飛5天，進(jìn)行芽的增殖，；其中，所述繼代培養(yǎng)基為WPM + 2. 0 3. 0 mg. L-1 BA+1. 0 2. 0 mg. [1NAA,瓊脂6. 5g. L-1，鹿糖 20 g. I/1, pH 值為 5. 7 ； (4)切取經(jīng)步驟(3)繼代培養(yǎng)后長出的高度為2.Ocm以上的櫸樹健壯苗，植入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)45 50天，獲得再生植株；其中，所述生根培養(yǎng)基為WPM + 0. 5 1.0 mg. T1IBA+2. 0 g. L-1AC,瓊脂 7. 0 mg L-1，蔗糖 20 g. L-1，pH 值為 5. 7 ； (5)將經(jīng)步驟(4)獲得的再生植株洗凈，移植到由泥炭土和珍珠巖組成的混合基質(zhì)中煉苗培養(yǎng)7 10天，再室外培養(yǎng)9(Tl00天，即可移至大田栽培。
2.如權(quán)利要求I所述櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是當(dāng)年生春季帶芽幼嫩枝條。
3.如權(quán)利要求I所述櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟(I)所述櫸樹幼嫩枝條是將含腋芽的櫸樹冬季落葉的健壯枝條置于裝有蒸餾水的燒杯中，25°C下進(jìn)行水培15 30天后，由腋芽萌發(fā)而成的幼嫩枝條。
4.如權(quán)利要求I所述櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟(5)所述的混合基質(zhì)中泥炭土和珍珠巖的體積比為1:1。
5.如權(quán)利要求I所述櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，步驟(2)至(4)中的培養(yǎng)條件為室溫24 ± 2 °C，光照強(qiáng)度PPFD = 65.5 y . moL. m—2. s—1，光照時間每天16小時。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種櫸樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，該方法選擇帶芽莖段為外植體，并選擇合適的各階段培養(yǎng)基，進(jìn)行組織培養(yǎng)，能夠得到保持母株優(yōu)良性狀的大量苗木，可以100％保持原植株基因型及其所有的優(yōu)良特性，大幅度提高了繁殖系數(shù)。
文檔編號A01H4/00GK102792890SQ20121027310
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月3日
發(fā)明者金曉玲, 何平, 胡希軍, 張日清, 廖飛勇, 汪靈丹 申請人:中南林業(yè)科技大學(xué)