專利名稱：一種提高水稻花藥綠苗率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高水稻花培育種，更具體是涉及一種提高水稻花藥綠苗率的方法，是一種利用水稻單倍體育種方法選育水稻新品種途徑的植物細(xì)胞工程實用方法。
背景技術(shù)：
水稻是一種重要的糧食作物，許多國家的人民都將其作為主要的食物來源。由于人口的增加，對糧食的需求越來越多，因而對改良水稻品種，以提高其產(chǎn)量和品質(zhì)也就越來越引起人們的重視。人們把這個任務(wù)寄托在單個細(xì)胞、組織和器官水平的遺傳操作上，希望從而縮短育種周期，選取抗病、抗蟲、品質(zhì)優(yōu)良和耐性強(qiáng)的水稻新品種。而水稻愈傷組織再生植株是改良水稻品質(zhì)的有效方法之一。由于秈稻花藥培養(yǎng)是重要農(nóng)作物中難于誘導(dǎo)高頻率花粉再生植株的作物，一般秈稻的平均出愈率不超過5％，而花藥綠苗用于育種往往低于1.0％，無法提供一定量的群體花粉植株苗供育種使用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提高水稻花藥綠苗率的方法，提出一種適宜的瓊脂濃度，可顯著提高秈稻愈傷組織綠苗的分化頻率。本發(fā)明具體方法1.誘導(dǎo)培養(yǎng)時期，通過顯微鏡檢，選取水稻發(fā)育為小孢子靠邊期的花藥接于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為培養(yǎng)基(M8)+2mg/L二氯苯氧乙酸(2，4-D)，瓊脂濃度為0.7--0.8％；2.分化培養(yǎng)基通過25-30天26度黑暗下誘導(dǎo)培養(yǎng)處理，愈傷組織長出2毫米，轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)。分化培養(yǎng)溫度為26-27度，12小時光周期，光照強(qiáng)度為2000Lx。分化培養(yǎng)基為培養(yǎng)基(Ms)+2mg/L激動素(KT)+0.5mg/L吲哚乙酸(IAA)+0.5mg/L a-萘乙酸(NAA)。瓊脂濃度為0.9--1.0％。
本發(fā)明以水稻花培理論為基礎(chǔ)，根據(jù)水稻花藥小孢子發(fā)育對培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)的需求，篩選出適宜的瓊脂含量濃度，使培養(yǎng)基與培養(yǎng)物之間產(chǎn)生水分脅迫，降低愈傷組織含水量，提高愈傷組織內(nèi)ABA激素含量和脯氨酸含量的水平及愈傷組織分化的質(zhì)量，使水稻花藥綠苗分化頻率提高10-20％。
本發(fā)明改變了認(rèn)為瓊脂只是培養(yǎng)基的固化劑起支撐培養(yǎng)物的作用，而提出了一種使秈稻花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)與分化培養(yǎng)頻率顯著提高的一種瓊脂濃度指標(biāo)，為花培育種技術(shù)應(yīng)用。其誘導(dǎo)與分化培養(yǎng)基瓊脂濃度含量分別為0.8％、1.0％，按此瓊脂濃度分別配制的培養(yǎng)基，可提高秈稻綠苗分化頻率10-20％。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點該方法比濾紙和硅膠法處理愈傷組織簡便、實用、效果更佳，且不易污染培養(yǎng)物，最重要的是其改變了培養(yǎng)物的生理狀況，有利于花粉母細(xì)胞的發(fā)育及細(xì)胞的生長和分化，從而顯著地提高了水稻愈傷組織綠苗分化頻率。
具體實施步驟1、首先按常規(guī)方法采集稻穗采回的稻穗經(jīng)表面消毒后，置于攝氏6--9度預(yù)處理3--5小時后，通過外部特征和顯微鏡核對，選取水稻發(fā)育為小孢子靠邊期的花藥接于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；接種后將接于誘導(dǎo)培養(yǎng)上的花藥置于攝氏26--27度下黑暗培養(yǎng)25～30天，當(dāng)愈傷組織長出1.5～2毫米時，轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，愈傷組織分化綠苗的條件是溫度為攝氏26～27度、12小時光周期，光照強(qiáng)度為2000Lx。
2、兩種培養(yǎng)基的制配誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)基(M8)+2mg/L二氯苯氧乙酸(2，4-D)，瓊脂濃度為0.7--0.8％；分化培養(yǎng)基培養(yǎng)基(Ms)+2mg/L激動素(KT)+0.5mg/L吲哚乙酸(IAA)+0.5mg/L a-萘乙酸(NAA)。瓊脂濃度為0.9--1.0％。
權(quán)利要求
1.一種提高水稻花藥綠苗率的方法，包括下列步驟按照常規(guī)方法采回稻穗經(jīng)表面消毒后，置于攝氏8～9度低溫預(yù)處理3～5小時，誘導(dǎo)培養(yǎng)時期選取小孢子靠邊期的花藥供誘導(dǎo)培養(yǎng)基使用，然后將花藥置于配置的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在攝氏26度下黑暗培養(yǎng)25～30天，當(dāng)愈傷組織長到1.5～2毫米時，轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，愈傷組織分化綠苗的條件是溫度為攝氏26～27度、12小時光周期，光照強(qiáng)度為2000Lx。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高水稻花藥綠苗率的方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為培養(yǎng)基(M8)+2mg/L二氯苯氧乙酸(2，4-D)，瓊脂濃度為0.7--0.8％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高水稻花藥綠苗率的方法，其特征在于，所述的分化培養(yǎng)基的配方為培養(yǎng)基(Ms)+2mg/L激動素(KT)+0.5mg/L吲哚乙酸(IAA)+0.5mg/L a-萘乙酸(NAA)，瓊脂濃度為0.9--1.0％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提高水稻花藥綠苗率的方法,改變了認(rèn)為瓊脂只是培養(yǎng)基的固化劑起支撐培養(yǎng)物的作用,而提出了一種使秈稻花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)與分化培養(yǎng)頻率顯著提高的一種瓊脂濃度指標(biāo),誘導(dǎo)培養(yǎng)基的瓊脂濃度為0.7－0.8%；分化培養(yǎng)基的瓊脂濃度為0.9－1.0%。經(jīng)下列步驟:將取回的稻穗經(jīng)表面消毒后,置于攝氏8度預(yù)處理,選取小孢子靠邊期穎花供花藥接種。接種后置于黑暗培養(yǎng),當(dāng)愈傷組織長到1.5－2毫米,轉(zhuǎn)分化培養(yǎng)基上,從而使水稻花藥綠苗分化頻率提高10－20%。
文檔編號A01H4/00GK1422524SQ0113821
公開日2003年6月11日 申請日期2001年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月26日
發(fā)明者馮雙華, 謝小立, 汪漢林 申請人:中國科學(xué)院長沙農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化研究所