檢測溶液中d型色氨酸濃度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，使用三電極體系通過差分脈沖伏安法對待測溶液中的D型色氨酸進行檢測，根據(jù)D型色氨酸的線性方程得到待測溶液中D型色氨酸的濃度，三電極體系中的工作電極為玻碳電極經(jīng)氮摻雜碳點和β環(huán)糊精修飾后得到的修飾玻碳電極。本發(fā)明的方法可以快速檢測出D型色氨酸濃度，且靈敏度高、準確度高。
【專利說明】
檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及異構型氨基酸檢測技術領域。更具體地說，本發(fā)明涉及一種基于氮摻雜碳點與β環(huán)糊精修飾的電化學傳感利用差分脈沖伏安法檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法。
【背景技術】
[0002]色氨酸是植物體內生長素生物合成重要的前體物質，其結構與吲哚乙酸相似，在高等植物中普遍存在?？梢酝ㄟ^色氨酸合成生長素。本品是重要的營養(yǎng)劑。可參與動物體內血漿蛋白質的更新，并可促使核黃素發(fā)揮作用，還有助于煙酸及血紅素的合成，可顯著增加懷孕動物胎仔體內抗體，對泌乳期的乳牛和母豬有促進泌乳作用。當畜禽缺乏色氨酸時，生長停滯，體重下降，脂肪積累降低，種公畜睪丸萎縮。在醫(yī)藥上用做癩皮病的防治劑。
[0003]由于環(huán)糊精的外緣親水而內腔疏水，因而它能夠像酶一樣提供一個疏水的結合部位，作為主體包絡各種適當?shù)目腕w，如有機分子、無機離子以及氣體分子等。其內腔疏水而外部親水的特性使其可依據(jù)范德華力、疏水相互作用力、主客體分子間的匹配作用等與許多有機和無機分子形成包合物及分子組裝體系，成為化學和化工研究者感興趣的研究對象。這種選擇性的包絡作用即通常所說的分子識別，其結果是形成主客體包絡物。環(huán)糊精是迄今所發(fā)現(xiàn)的類似于酶的理想宿主分子，并且其本身就有酶模型的特性。因此，在催化、分離、食品以及藥物等領域中，β環(huán)糊精受到了極大的重視和廣泛應用。
[0004]現(xiàn)有檢測不同構型的氨基酸有循環(huán)伏安以及交流阻抗的方法，這些方法只是對其中一種指標作為依據(jù)同時進行定性和定量分析，比如循環(huán)伏安只是以電流信號的大小作為區(qū)分不同構型的氨基酸，交流阻抗是以阻值大小作為區(qū)分，其準確度較低，靈敏度也低，檢出限高。
【發(fā)明內容】
[0005]本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優(yōu)點。
[0006]本發(fā)明還有一個目的是提供一種檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其能夠快速并定量檢測溶液中D型色氨酸的含量，建立了一種簡單、快速且靈敏度和準確度高的D型色氨酸檢測方法。
[0007]本發(fā)明還有一個目的是提供工作電極的制備方法，使用經(jīng)過氮摻雜碳點與β環(huán)糊精修飾玻碳電極作為工作電極，制備工作電極的方法簡單。
[0008]為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了一種檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，使用三電極體系通過差分脈沖伏安法對待測溶液中的D型色氨酸進行檢測，根據(jù)D型色氨酸的線性方程得到待測溶液中D型色氨酸的濃度，三電極體系中的工作電極為玻碳電極經(jīng)氮摻雜碳點和β環(huán)糊精修飾后得到的修飾玻碳電極。
[0009]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，修飾玻碳電極的制備方法為:將參比電極、輔助電極和預處理后的玻碳電極浸入含有2mg/mL氮摻雜碳點和0.01mg/mLβ環(huán)糊精的混合溶液中，利用循環(huán)伏安方法掃描完成后取出干燥即得修飾玻碳電極，掃描參數(shù)設置為:初始電位0V、最高電位IV、最低點位0V、最終電位0V、掃描速率0.ιν/s、掃描次數(shù)10次、靈敏度I O—4A/V、等待時間為2 s。
[0010]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，包括以下步驟:
[0011]步驟一、制備所述工作電極并搭建三電極體系，配制濃度為O?IOOymo I /L的多份D型色氨酸的標準溶液；
[0012]步驟二、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對步驟一中配制的每份標準溶液進行檢測，得到每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線，在此過程中分別記錄每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線中電流強度的峰值；
[0013]步驟三、以步驟二中得到的每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Oymol/L時的標準溶液的電流強度的峰值的差值作為縱坐標，以每份標準溶液的濃度為橫坐標繪制標準曲線并計算線性方程；
[0014]步驟四、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對含有未知濃度D型色氨酸的待測溶液進行檢測，得到待測溶液的差分脈沖伏安曲線，將待測溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Omo I /L的標準溶液的電流強度的峰值的差值代入步驟三中得到的線性方程中，計算得到待測溶液中D型色氨酸的濃度。
[0015]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，所述步驟一中D型色氨酸的標準溶液配置方法為:向磷酸緩沖溶液中加入濃度為0.0 lmol/L的D型色氨酸標準溶液，分別制備 D 型色氨酸濃度為 0mol/L、2.0X10—5mol/L、3X10—5mol/L、5X10—5mol/L、7X10—5mol/L、I X 10—4mol/L的六個標準溶液;其中所述磷酸緩沖溶液的pH為7.0，其濃度為lOmmol/L。
[0016]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，所述步驟二具體包括以下步驟:
[0017]步驟2.1、將所述三電極體系分別置入所述六個標準溶液中，在室溫下攪拌2min，靜止2min;
[0018]步驟2.2、掃描差分脈沖圖譜，設置掃描初始電位為-0.1V，終止電位為0.6V，電位增量為0.004V，樣品寬度0.0167s，振幅為0.05V，脈沖寬度0.05V，靈敏度10—4A/V，等待時間為2s;
[0019]步驟2.3、分別測量并記錄所述六個標準溶液的電流強度的峰值，建立所述六個標準溶液的差分脈沖伏安曲線。
[0020]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，氮摻雜碳點的制備方法:將
0.84g梓檬酸加入1mL超純水中，再加入800μ1乙二胺，在室溫下攪拌2小時，隨后轉移至石英管中，于微波功率為80W、溫度為150°C下在微波反應器中反應15min，待冷卻至室溫，用
0.22μπι濾膜過濾，得到的濾液加入5g碳酸鈣，旋轉蒸發(fā)5次，將旋轉蒸發(fā)得到的溶液每ImL加入5mL無水乙醇，在轉速為1000rpm下離心1min，將下層固體于60 °C真空干燥，得氮摻雜碳點備用。
[0021 ]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，待測溶液檢測前還需經(jīng)過前處理，具體方法為:將待測溶液于轉速為1000rpm下離心1min，再通過乙二胺改性的毛細管柱過濾，將過濾后的待測溶液轉移至含有金薄膜的燒杯中，靜置2h，將靜置后的上層清液離心20min，取離心上層清液備用。
[0022]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，玻碳電極的預處理方法為:
[0023]S1、將玻碳電極在濃度為0.lmol/L的NaOH溶液中浸泡2h，超純水清洗lmin，然后在濃度為0.5mol/I^H2S04溶液中浸泡2h，超純水清洗Imin;
[0024]S2、將SI中得到的玻碳電極放置在含有粒度0.3μπι的拋光粉的拋光布上拋光至鏡面，隨后將玻碳電極依次置于無水乙醇、濃度為0.5mol/I^H2S04溶液和超純水中分別超聲Imin，并在每次超聲結束后用超純水沖洗0.5min;
[0025]S3、將S2得到的玻碳電極放置于濃度為0.5mol/U^H2S04溶液中采用循環(huán)伏安法活化后即得預處理后的玻碳電極，參數(shù)設置為:始電位1.0V、最高電位1.0V、最低點位-0.8V、最終電位-0.8V、掃描速率0.lV/s、掃描次數(shù)50次、靈敏度10—3A/V、等待時間為1s。
[0026]優(yōu)選的是，所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，參比電極為Ag/AgCl電極，輔助電極為鉑電極。
[0027]本發(fā)明至少包括以下有益效果:
[0028]1、本發(fā)明采用氮摻雜碳點與β環(huán)糊精修飾玻碳電極制得工作電極，構建相關的傳感界面作為三電極體系傳感器用于檢測，采用電位進行色氨酸構型進行定性，采用出峰電流值進行定量，提高了檢測D型色氨酸的靈敏性和準確度，檢出電位0.056V，最低可以檢測出2.2 X 10—7mol/L的D型色氨酸；
[0029]2、本發(fā)明作為氮摻雜碳點與環(huán)糊精修的電化學檢測D型色氨酸的一種方法，大大降低了檢測成本，操作簡單方便；
[0030]3、本發(fā)明一步快速檢測D型色氨酸，三電極體系傳感器制備完成后，僅需數(shù)分鐘就可以實現(xiàn)一步檢測出D型色氨酸。
[0031]本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領域的技術人員所理解。
【附圖說明】
[0032]圖1為本發(fā)明的實施例1中不同濃度的D型色氨酸標準溶液的差分脈沖伏安曲線圖；
[0033]圖2為本發(fā)明的實施例1中D型色氨酸的標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0034]下面結合附圖和實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。
[0035]需要說明的是，下述實施方案中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法，所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0036]本發(fā)明所涉及到的術語定義:
[0037]除非另外定義，否則本文所用的所有技術及科學術語都具有與本發(fā)明所屬領域的普通技術人員通常所了解相同的含義。雖然在本發(fā)明的實踐或測試中可使用與本文所述者類似或等效的任何方法、裝置和材料，但現(xiàn)在描述優(yōu)選方法、裝置和材料。
[0038]“工作電極”又稱研究電極，是指所研究的反應在該電極上發(fā)生。一般來講，對工作電極的基本要求是:工作電極可以是固體，也可以是液體，各式各樣的能導電的固體材料均能用作電極。所研究的電化學反應不會因電極自身所發(fā)生的反應而受到影響，并且能夠在較大的電位區(qū)域中進行測定；電極必須不與溶劑或電解液組分發(fā)生反應；電極面積不宜太大，電極表面最好應是均一平滑的，且能夠通過簡單的方法進行表面凈化等。采用固體電極時，為了保證實驗的重現(xiàn)性，必須注意建立合適的電極預處理步驟，以保證氧化還原、表面形貌和不存在吸附雜質的可重現(xiàn)狀態(tài)。
[0039]一種檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，使用三電極體系通過差分脈沖伏安法對待測溶液中的D型色氨酸進行檢測，根據(jù)D型色氨酸的線性方程得到待測溶液中D型色氨酸的濃度，三電極體系中的工作電極為玻碳電極經(jīng)氮摻雜碳點和環(huán)糊精修飾后得到的修飾玻碳電極。三電極體系由工作電極、參比電極和輔助電極組成。
[0040]本發(fā)明是采用示差脈沖伏安法對D型色氨酸進行檢測，示差脈沖伏安法在線性掃描波形上，疊加一振幅恒定和脈寬固定的連續(xù)脈沖，掃描過程中，基電位從初始電位掃描到終止電位，在電位脈沖開始之前和結束時進行電流采樣，將這兩個采樣電流的差值對電位作圖，即為DPV曲線，主要用于電化學分析，減少因雜質氧化還原反應導致的背景電流，具有更好的檢測靈敏度和更低的檢測極限，相對于其他方法，所述示差脈沖伏安法成本較低，操作簡單。
[0041 ]所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，包括以下步驟:
[0042 ]步驟一、制備所述工作電極并搭建三電極體系，配制濃度為O?I OOymo I /L的多份D型色氨酸的標準溶液；
[0043]步驟二、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對步驟一中配制的每份標準溶液進行檢測，得到每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線，在此過程中分別記錄每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線中電流強度的峰值；
[0044]步驟三、以步驟二中得到的每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Oymol/L時的標準溶液的電流強度的峰值的差值作為縱坐標，以每份標準溶液的濃度為橫坐標繪制標準曲線并計算線性方程；
[0045]步驟四、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對含有未知濃度D型色氨酸的待測溶液進行檢測，得到待測溶液的差分脈沖伏安曲線，將待測溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Omo I /L的標準溶液的電流強度的峰值的差值代入步驟三中得到的線性方程中，計算得到待測溶液中D型色氨酸的濃度。
[0046]碳點可以作為一個基底，一個傳感的材料，作為一個導體，加速電極表面電子傳遞速率。環(huán)糊精由于具有外緣親水而內腔疏水，因而它能夠象酶一樣提供一個疏水的結合部位，作為主體包絡各種適當?shù)目腕w，如有機分子、無機離子以及氣體分子等。其內腔疏水而外部親水的特性使其可依據(jù)范德華力、疏水相互作用力、主客體分子間的匹配作用等與許多有機和無機分子形成包合物及分子組裝體系。這種選擇性的包絡作用即通常所說的分子識別，其結果是形成主客體包絡物。而不同構型的色氨酸可以與環(huán)糊精形成主客體的包絡物。利用這一原理，對色氨酸進行檢測分析。而本發(fā)明可以利用出峰的不同電位測定出屬于哪一種構型的色氨酸，而電流值就可以測定含量。
[0047]實施例1:
[0048]—種檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，包括以下步驟:
[0049 ]步驟一、制備所述工作電極并搭建三電極體系，配制濃度為O?I OOymo I /L的多份D型色氨酸的標準溶液；
[0050]其中，工作電極即修飾玻碳電極的制備方法為:將參比電極、輔助電極和預處理后的玻碳電極浸入含有2mg/mL氮摻雜碳點和0.0 lmg/mLP環(huán)糊精的混合溶液中，利用循環(huán)伏安方法掃描完成后取出干燥即得修飾玻碳電極，掃描參數(shù)設置為:初始電位0V、最高電位IV、最低點位0V、最終電位0V、掃描速率0.lV/s、掃描次數(shù)100次、靈敏度10—4A/V、等待時間為2s;[0051 ]其中，所述步驟一中D型色氨酸的標準溶液配置方法為:向磷酸緩沖溶液中加入濃度為0.0 Imo 1/L的D型色氨酸標準溶液，分別制備D型色氨酸濃度依次為Omo 1/L的空白溶液、2.0X 10—5mol/L的溶液a、3X 10—5mol/L的溶液b、5 X 10—5mol/L的溶液c、7 X 10—5mol/L的溶液d、I X 10—4mol/L的溶液e共計六個標準溶液;其中所述磷酸緩沖溶液的pH為7.0，其濃度為1 Ommol /I,；
[0052]步驟二、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對步驟一中配制的每份標準溶液進行檢測，得到每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線，在此過程中分別記錄每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線中電流強度的峰值；
[0053]其中，所述步驟二具體包括以下步驟:
[0054]步驟2.1、將所述三電極體系分別置入所述六個標準溶液中，在室溫下攪拌2min，靜止2min;
[0055]步驟2.2、掃描差分脈沖圖譜，設置掃描初始電位為-0.1V，終止電位為0.6V，電位增量為0.004V，樣品寬度0.0167s，振幅為0.05V，脈沖寬度0.05V，靈敏度10—4A/V，等待時間為2s;
[0056]步驟2.3、分別測量并記錄所述六個標準溶液的電流強度的峰值，建立所述六個標準溶液的差分脈沖伏安曲線，圖1所示為除了 Omol/L的空白溶液以外的其他五個標準溶液的差分脈沖伏安曲線，其中，溶液a、b、c、d、e的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值依次為-0.9123、-0.9063、-0.9033、-0.8913、-0.8793yA，0mol/L 的空白溶液的電流強度峰值為-0.9413μΑ;
[0057]步驟三、以步驟二中得到的溶液a、b、c、d、e標準溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Oymol/L時的標準溶液即空白溶液的電流強度的峰值的差值作為縱坐標，以溶液a、b、c、d、e中D型色氨酸的濃度為橫坐標繪制標準曲線并計算線性方程；例如，以溶液a的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Omol/L時的標準溶液的電流強度的峰值的差值為縱坐標，以溶液a中D型色氨酸的濃度為橫坐標，可以確定標準曲線上的一個點，通過上述方法，將溶液a換成溶液b、c、d、e，通過溶液b、c、d、e確定標準曲線上的另外四個點，采用origin繪制如圖2所示的標準曲線；
[0058]由圖2中標準曲線得到線性方程:Y= 0.02056+4.1466X10—4X，式中Y為電流值(1-1o)，I為每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值;1為D型色氨酸濃度為0mol/L時的標準溶液的電流強度的峰值，單位為μΑ;Χ為標準溶液中D型色氨酸濃度，單位為ymol/L，相關系數(shù)R2為0.9911。修飾電極對0型色氨酸的檢測限為2.2乂10—711101/1，檢出電位
0.056V；
[0059]步驟四、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對含有未知濃度D型色氨酸的待測溶液進行檢測，得到待測溶液的差分脈沖伏安曲線，計算待檢測液中D型色氨酸的濃度:將待測溶液的差分脈沖伏安曲線對應的待測溶液的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Omol/L的標準溶液的電流強度的峰值的差值作為Y值代入線性方程中，計算得到待檢測液中D型色氨酸的濃度。
[0060]其中，氮摻雜碳點的制備方法:將0.84g檸檬酸加入1mL超純水中，再加入800μ1乙二胺，在室溫下攪拌2小時，隨后轉移至石英管中，于微波功率為80W、溫度為150°C下在微波反應器中反應15min，待冷卻至室溫，用0.22μπι濾膜過濾，得到的濾液加入5g碳酸鈣，旋轉蒸發(fā)5次，將旋轉蒸發(fā)得到的溶液每ImL加入5mL無水乙醇，在轉速為1000rpm下離心1min，將下層固體于60°C真空干燥，得氮摻雜碳點備用。
[0061]其中，待測溶液檢測前還需經(jīng)過前處理，具體方法為:將待測溶液于轉速為1000rpm下離心lOmin，再通過乙二胺改性的毛細管柱過濾，將過濾后的待測溶液轉移至含有金薄膜的燒杯中，靜置2h，將靜置后的上層清液離心20min，取離心上層清液備用。待測溶液經(jīng)前處理后可以消除待測樣品中的大顆粒、重金屬離子和含有巰基的氨基酸，讓物質更加的純化，避免其他物質的干擾。
[0062]其中，玻碳電極的預處理方法為:
[0063]S1、將玻碳電極在濃度為0.lmol/L的NaOH溶液中浸泡2h，超純水清洗lmin，然后在濃度為0.5mol/I^H2S04溶液中浸泡2h，超純水清洗Imin;
[0064]S2、將SI中得到的玻碳電極放置在含有粒度0.3μπι的拋光粉的拋光布上拋光至鏡面，隨后將玻碳電極依次置于無水乙醇、濃度為0.5mol/I^H2S04溶液和超純水中分別超聲Imin，并在每次超聲結束后用超純水沖洗0.5min;
[0065]S3、將S2得到的玻碳電極放置于濃度為0.5mol/U^H2S04溶液中采用循環(huán)伏安法活化后即得預處理后的玻碳電極，參數(shù)設置為:始電位1.0V、最高電位1.0V、最低點位-0.8V、最終電位-0.8V、掃描速率0.lV/s、掃描次數(shù)50次、靈敏度10—3A/V、等待時間為1s。
[0066]其中，參比電極為Ag/AgCl電極，輔助電極為鉑電極。
[0067]盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領域，對于熟悉本領域的人員而言，可容易地實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細節(jié)和這里示出與描述的實施例。
【主權項】
1.一種檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，使用三電極體系通過差分脈沖伏安法對待測溶液中的D型色氨酸進行檢測，根據(jù)D型色氨酸的線性方程得到待測溶液中D型色氨酸的濃度，其特征在于，三電極體系中的工作電極為玻碳電極經(jīng)氮摻雜碳點和β環(huán)糊精修飾后得到的修飾玻碳電極。2.如權利要求1所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，修飾玻碳電極的制備方法為:將參比電極、輔助電極和預處理后的玻碳電極浸入含有2mg/mL氮摻雜碳點和0.01mg/mLi3環(huán)糊精的混合溶液中，利用循環(huán)伏安方法掃描完成后取出干燥即得修飾玻碳電極，掃描參數(shù)設置為:初始電位0V、最高電位IV、最低點位0V、最終電位0V、掃描速率0.1V/s、掃描次數(shù)10次、靈敏度I O—4A/V、等待時間為2 s。3.如權利要求2所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、制備所述工作電極并搭建三電極體系，配制濃度為O?ΙΟΟμπιοΙ/L的多份D型色氨酸的標準溶液； 步驟二、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對步驟一中配制的每份標準溶液進行檢測，得到每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線，在此過程中分別記錄每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線中電流強度的峰值； 步驟三、以步驟二中得到的每份標準溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Ομπιο?/L時的標準溶液的電流強度的峰值的差值作為縱坐標，以每份標準溶液的濃度為橫坐標繪制標準曲線并計算線性方程； 步驟四、采用所述三電極體系，利用差分脈沖伏安法對含有未知濃度D型色氨酸的待測溶液進行檢測，得到待測溶液的差分脈沖伏安曲線，將待測溶液的差分脈沖伏安曲線對應的電流強度的峰值與D型色氨酸濃度為Omol/L的標準溶液的電流強度的峰值的差值代入步驟三中得到的線性方程中，計算得到待測溶液中D型色氨酸的濃度。4.如權利要求3所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，所述步驟一中D型色氨酸的標準溶液配置方法為:向磷酸緩沖溶液中加入濃度為0.01mol/L的D型色氨酸標準溶液，分別制備 D 型色氨酸濃度為 0mol/L、2.0X10—5mol/L、3X10—5mol/L、5X10—5mol/L、7X 10—5mol/L、l X 10—4mol/L的六個標準溶液;其中所述磷酸緩沖溶液的pH為7.0，其濃度為1 Ommol /L5.如權利要求4所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，所述步驟二具體包括以下步驟: 步驟2.1、將所述三電極體系分別置入所述六個標準溶液中，在室溫下攪拌2min，靜止2min； 步驟2.2、掃描差分脈沖圖譜，設置掃描初始電位為-0.1V，終止電位為0.6V，電位增量為0.004V，樣品寬度0.01678，振幅為0.05￥，脈沖寬度0.05￥，靈敏度10—1八，等待時間為28; 步驟2.3、分別測量并記錄所述六個標準溶液的電流強度的峰值，建立所述六個標準溶液的差分脈沖伏安曲線。6.如權利要求1或2所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，氮摻雜碳點的制備方法:將0.84g檸檬酸加入1mL超純水中，再加入800μ1乙二胺，在室溫下攪拌2小時，隨后轉移至石英管中，于微波功率為80W、溫度為150°C下在微波反應器中反應15min，待冷卻至室溫，用0.22μπι濾膜過濾，得到的濾液加入5g碳酸鈣，旋轉蒸發(fā)5次，將旋轉蒸發(fā)得到的溶液每ImL加入5mL無水乙醇，在轉速為1000rpm下離心1min，將下層固體于60 °C真空干燥，得氮摻雜碳點備用。7.如權利要求1或3所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，待測溶液檢測前還需經(jīng)過前處理，具體方法為:將待測溶液于轉速為1000rpm下離心1min，再通過乙二胺改性的毛細管柱過濾，將過濾后的待測溶液轉移至含有金薄膜的燒杯中，靜置2h，將靜置后的上層清液離心20min，取離心上層清液備用。8.如權利要求2所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，玻碳電極的預處理方法為: 51、將玻碳電極在濃度為0.lmol/L的NaOH溶液中浸泡2h，超純水清洗Imin，然后在濃度為0.5mol/L的H2SO4溶液中浸泡2h，超純水清洗Imin ； 52、將SI中得到的玻碳電極放置在含有粒度0.3μπι的拋光粉的拋光布上拋光至鏡面，隨后將玻碳電極依次置于無水乙醇、濃度為0.5mol/U^H2S04溶液和超純水中分別超聲lmin，并在每次超聲結束后用超純水沖洗0.5min; 53、將S2得到的玻碳電極放置于濃度為0.5mol/U^H2S04溶液中采用循環(huán)伏安法活化后即得預處理后的玻碳電極，參數(shù)設置為:始電位1.0V、最高電位1.0V、最低點位-0.8V、最終電位-0.8V、掃描速率0.lV/s、掃描次數(shù)50次、靈敏度10—3A/V、等待時間為1s。9.如權利要求2所述的檢測溶液中D型色氨酸濃度的方法，其特征在于，參比電極為Ag/AgCl電極，輔助電極為鉑電極。
【文檔編號】G01N27/48GK105891310SQ201610205617
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月5日
【發(fā)明人】肖琦, 黃珊, 盧雙燕, 黃初升, 蘇煒, 崔建國
【申請人】廣西師范學院