尿素氮的檢測(cè)試劑及尿素氮的檢測(cè)試紙的制作方法

本發(fā)明涉及尿素氮檢測(cè)的技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及尿素氮的檢測(cè)試劑及尿素氮的檢測(cè)試紙。

背景技術(shù)：

目前，用于檢測(cè)血液中是否存在某種成分或該成分的含量的方法包括液體試劑檢測(cè)和干化學(xué)試紙檢測(cè)。干化學(xué)試紙具有使用方便、操作簡(jiǎn)單、快速出結(jié)果的特點(diǎn)。

根據(jù)檢測(cè)液體樣本在干化學(xué)試紙上的流動(dòng)路程，可以將干化學(xué)試紙分為多種類型，縱向垂直檢測(cè)試紙是干化學(xué)試紙的一種?？v向垂直檢測(cè)試紙包括將帶有反應(yīng)試劑的載體相互疊加在一起，液體樣本自上而下的流經(jīng)各個(gè)反應(yīng)試劑層，最終顯示檢測(cè)結(jié)果。例如美國(guó)專利US4816224采用縱向垂直檢測(cè)試紙的方法。

縱向垂直檢測(cè)試紙其反應(yīng)試劑載體的面積都較小，因此只需要較少的液體樣本用量就可以完成檢測(cè)。因?yàn)閭€(gè)體差異，在指尖采血的過(guò)程中，采集的樣本量是很難控制的，例如，歐美人的指尖采血量往往會(huì)比亞洲人多。而反應(yīng)試劑載體對(duì)液體的吸收有一定的飽和度，當(dāng)?shù)渭釉谠嚰埳系难獦舆^(guò)多時(shí)，現(xiàn)有的干化學(xué)檢測(cè)試紙沒(méi)辦法及時(shí)處理多余的血樣。如現(xiàn)有技術(shù)中的縱向垂直檢測(cè)試紙，該試紙包括：底板粘附并支撐著反應(yīng)層，反應(yīng)層上覆蓋有樣本分離層、玻纖層和網(wǎng)格層。當(dāng)液體滴加到網(wǎng)格層后垂直流經(jīng)玻纖和樣本分離層，最終達(dá)到反應(yīng)層發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。若加入的血液樣本量較多，達(dá)到液體飽和的反應(yīng)層不能再吸收多余的樣本時(shí)，這些多余的血樣就會(huì)溢出檢測(cè)試紙，污染環(huán)境或者接觸到檢測(cè)者。多余的血液還會(huì)聚集在反應(yīng)試劑層上形成液滴，不僅影響光學(xué)等檢測(cè)儀器對(duì)結(jié)果的判讀，還會(huì)嚴(yán)重的污染檢測(cè)儀器。

專利CN 102128918A采用了一種鎖液結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)試紙包括：底板上粘附并支撐著反應(yīng)層，在反應(yīng)層相對(duì)于底板的另一側(cè)覆蓋有加樣層，加樣層上有一加樣口。反應(yīng)層沿著底板方向的至少一側(cè)搭接著鎖液部件，鎖液部件被固定在底板上。在底板相對(duì)于反應(yīng)層處有一用于讀取反應(yīng)結(jié)果的檢測(cè)窗。所有結(jié)構(gòu)通過(guò)粘合片更牢固的固定他們之間的位置。當(dāng)液體樣本加到加樣層時(shí)，先垂直流入反應(yīng)層并被反應(yīng)層所吸收。當(dāng)反應(yīng)層液體飽和時(shí)，液體通過(guò)橫向測(cè)流的方式擴(kuò)散到與反應(yīng)層搭接的鎖液部件中。由于鎖液部件吸收液體的速度小于或等于反應(yīng)層的吸收液體速度，所以當(dāng)多余液體擴(kuò)散到鎖液部件時(shí)，反應(yīng)層上的液體已經(jīng)足夠進(jìn)行相關(guān)的檢測(cè)反應(yīng)，從而并不影響檢測(cè)反應(yīng)所需的有效用量。當(dāng)加入過(guò)量的樣本時(shí)，多余的樣本被鎖液部件所吸收，因此多余的樣本不會(huì)形成液滴溢出試紙之外。但此種鎖液結(jié)構(gòu)工藝復(fù)雜，要求鎖液部件吸收液體的速度小于或等于反應(yīng)層吸收液體的速度，對(duì)鎖液部件的材料要求較高，且在試紙生產(chǎn)工藝上增加了工序，使試紙生產(chǎn)工藝更為復(fù)雜。

另外，以上現(xiàn)有技術(shù)中，檢測(cè)準(zhǔn)確度有待提高，檢測(cè)不夠快速。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明一方面在于提供一種尿素氮的檢測(cè)試劑及尿素氮的檢測(cè)試紙，該檢測(cè)試紙可快速檢測(cè)尿素氮的含量，具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、檢測(cè)準(zhǔn)確度較高和方便測(cè)試的優(yōu)點(diǎn)。

一種尿素氮的檢測(cè)試劑，其包含50～65KU/L的脲酶、1.0～1.5g/L的海藻糖和20～30g/L顯色物質(zhì)。

進(jìn)一步地，其還包含0.15～0.35g/L的牛血清白蛋白。

進(jìn)一步地，其還包含0.1～0.15g/L氯化鈉。

進(jìn)一步地，所述顯色物質(zhì)為TOOS、TODB、DAOS、MOAS、酚類、TMB、甲基橙、甲基紅、溴百里香酚藍(lán)中的一種或多種。

進(jìn)一步地，包括反應(yīng)基層、設(shè)置于所述反應(yīng)基層一表面的反應(yīng)層、設(shè)置于反應(yīng)層一表面的濾血層，和設(shè)置于所述濾血層一表面的吸樣層；所述反應(yīng)基層設(shè)有通孔；所述反應(yīng)層覆蓋所述通孔，所述反應(yīng)層由上述任意一項(xiàng)所述的檢測(cè)試劑涂覆在膜材料上所形成。

進(jìn)一步地，所述反應(yīng)基層的材質(zhì)為聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚酰胺酯或聚酯。

進(jìn)一步地，所述反應(yīng)基層與反應(yīng)層之間設(shè)有一雙面膠。

進(jìn)一步地，所述親水層和濾血層之間設(shè)有一雙面膠。

進(jìn)一步地，所述親水層為親水膜或網(wǎng)紗。

進(jìn)一步地，所述反應(yīng)基層與反應(yīng)層之間的雙面膠設(shè)有與所述通孔對(duì)應(yīng)的孔。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的尿素氮的檢測(cè)試劑及尿素氮的檢測(cè)試紙的有益效果是：

本發(fā)明尿素氮的檢測(cè)試劑，其含有多種特定酶進(jìn)行特定配比，能達(dá)到快速和較為準(zhǔn)確檢測(cè)尿素氮的含量的目的。本發(fā)明尿素氮的檢測(cè)試紙包括反應(yīng)基層、反應(yīng)層、濾血層和吸樣層，這些層疊加構(gòu)成一個(gè)虹吸體系，抗干擾能力更強(qiáng)，有效的消除了內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，進(jìn)一步保證了快速和較為準(zhǔn)確檢測(cè)尿素氮的含量。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例檢測(cè)試紙的分解結(jié)構(gòu)示意圖。

主要元件符號(hào)說(shuō)明：

1 檢測(cè)試紙

100 反應(yīng)基層

110 通孔

200，500 雙面膠

210 孔

300 反應(yīng)層

310 檢測(cè)試劑

320 膜材料

400 濾血層

600 親水層

具體實(shí)施方式

除非另有限定，本文使用的所有技術(shù)以及科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。當(dāng)存在矛盾時(shí)，以本說(shuō)明書中的定義為準(zhǔn)。

如本文所用之術(shù)語(yǔ)：

“由……制備”與“包含”同義。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它變形，意在覆蓋非排它性的包括。例如，包含所列要素的組合物、步驟、方法、制品或裝置不必僅限于那些要素，而是可以包括未明確列出的其它要素或此種組合物、步驟、方法、制品或裝置所固有的要素。

連接詞“由……組成”排除任何未指出的要素、步驟或組分。如果用于權(quán)利要求中，此短語(yǔ)將使權(quán)利要求為封閉式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但與其相關(guān)的常規(guī)雜質(zhì)除外。當(dāng)短語(yǔ)“由……組成”出現(xiàn)在權(quán)利要求主體的子句中而不是緊接在主題之后時(shí)，其僅限定在該子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作為整體的所述權(quán)利要求之外。

當(dāng)量、濃度、或者其它值或參數(shù)以范圍、優(yōu)選范圍、或一系列上限優(yōu)選值和下限優(yōu)選值限定的范圍表示時(shí)，這應(yīng)當(dāng)被理解為具體公開了由任何范圍上限或優(yōu)選值與任何范圍下限或優(yōu)選值的任一配對(duì)所形成的所有范圍，而不論該范圍是否單獨(dú)公開了。例如，當(dāng)公開了范圍“1～5”時(shí)，所描述的范圍應(yīng)被解釋為包括范圍“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。當(dāng)數(shù)值范圍在本文中被描述時(shí)，除非另外說(shuō)明，否則該范圍意圖包括其端值和在該范圍內(nèi)的所有整數(shù)和分?jǐn)?shù)。

“質(zhì)量份”指表示多個(gè)組分的質(zhì)量比例關(guān)系的基本計(jì)量單位，1份可表示任意的單位質(zhì)量，如可以表示為1g，也可表示2.689g等。假如我們說(shuō)A組分的質(zhì)量份為a份，B組分的質(zhì)量份為b份，則表示A組分的質(zhì)量和B組分的質(zhì)量之比a：b?；蛘?，表示A組分的質(zhì)量為aK，B組分的質(zhì)量為bK(K為任意數(shù)，表示倍數(shù)因子)。不可誤解的是，與質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同的是，所有組分的質(zhì)量份之和并不受限于100份之限制。

“和/或”用于表示所說(shuō)明的情況的一者或兩者均可能發(fā)生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)；

此外，本發(fā)明要素或組分前的不定冠詞“一種”和“一個(gè)”對(duì)要素或組分的數(shù)量要求(即出現(xiàn)次數(shù))無(wú)限制性。因此“一個(gè)”或“一種”應(yīng)被解讀為包括一個(gè)或至少一個(gè)，并且單數(shù)形式的要素或組分也包括復(fù)數(shù)形式，除非所述數(shù)量明顯旨指單數(shù)形式。

本發(fā)明尿素氮的檢測(cè)試劑310，其包含50～65KU/L的脲酶、1.0～1.5g/L的海藻糖和20～30g/L顯色物質(zhì)。

具體地，脲酶(又稱為寡聚酶)的含量可以列舉為50KU/L、52.5KU/L、55KU/L、57.5KU/L、60KU/L、62.5KU/L或65KU/L等；海藻糖的含量可以為1.0g/L、1.1g/L、1.2g/L、1.3g/L、1.4g/L或1.5g/L等；顯色物質(zhì)的含量可以為20g/L、22g/L、25g/L、28g/L、29g/L或30g/L等。

此處，顯色物質(zhì)可以列舉出TOOS、TODB、DAOS、MOAS、酚類、TMB、甲基橙、甲基紅、溴百里香酚藍(lán)中的一種或多種。這里，TOOS即N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽，其CAS號(hào)為82692-93-1；TODB即N,N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二鈉鹽，其CAS號(hào)為127544-88-1；DAOS即N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺鈉鹽，其CAS號(hào)為83777-30-4；TMB即3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，其CAS號(hào)為54827-17-7；酚類即酚類顯色劑。

優(yōu)選地，本發(fā)明尿素氮的檢測(cè)試劑310，除了可以包含上述原料，還可以包含牛血清白蛋白(BSA)。牛血清白蛋白，其又稱第五組分，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點(diǎn)為4.7，在本發(fā)明中主要起維持體系的滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營(yíng)養(yǎng)作用。牛血清白蛋白緩沖液的含量以0.15～0.35g/L為佳，如0.15g/L、0.18g/L、0.20g/L、0.22g/L、0.25g/L、0.28g/L、0.30g/L、0.33g/L或0.35g/L等。

優(yōu)選地，本發(fā)明尿素氮的檢測(cè)試劑310，還可進(jìn)一步地包含0.1～0.15g/L氯化鈉，例如氯化鈉的含量可以列舉為0.1g/L、0.11g/L、0.12g/L、0.13g/L、0.14g/L或0.15g/L等。

本發(fā)明的尿素氮的檢測(cè)試紙1，包括反應(yīng)基層100、設(shè)置于所述反應(yīng)基層100一表面的反應(yīng)層300、設(shè)置于反應(yīng)層300的一表面的濾血層400，和設(shè)置于所述濾血層400一表面的親水層600；所述反應(yīng)基層100設(shè)有通孔110；所述反應(yīng)層300覆蓋所述通孔110，所述反應(yīng)層300由上述檢測(cè)試劑310涂覆在膜材料320上所形成。

需要理解的是，上述反應(yīng)基層100的作用是支撐整個(gè)檢測(cè)試紙1。反應(yīng)基層100的材質(zhì)可列舉為聚氯乙烯(PVC)、聚碳酸酯(PC)、聚酰胺酯(PA)或聚酯(PBT和PET的統(tǒng)稱)，優(yōu)選為聚酯，進(jìn)一步優(yōu)選為PET基板。

反應(yīng)基層100的形式可以為薄膜或薄板，反應(yīng)基層100上設(shè)有通孔110，以作為光反射檢測(cè)之用。

優(yōu)選地，反應(yīng)層300與反應(yīng)基層100之間可設(shè)置一雙面膠200。該雙面膠200的面積可以小于反應(yīng)基層100，可大于反應(yīng)層300。反應(yīng)層300通過(guò)雙面膠200粘結(jié)在所述反應(yīng)基層100上，反應(yīng)層300與反應(yīng)基層100的粘結(jié)處避開通孔110。該雙面膠200也可以設(shè)置與所述通孔對(duì)應(yīng)的孔210。

所述膜材料320可列舉為聚丙烯纖維素膜或、乙烯纖維膜硝酸纖維素膜、尼龍膜、羧化纖維素膜或純纖維素膜中的一種。較佳地，膜材料320為聚丙烯纖維素膜或聚乙烯纖維膜。所述膜材料的表面用來(lái)滴附上述檢測(cè)試劑310。

作為本發(fā)明的檢測(cè)試紙1，濾血層400的形式可以為薄膜。濾血層400的面積可大于反應(yīng)層，這樣濾血層400覆蓋在反應(yīng)層300上時(shí)其兩端粘貼在雙面膠200。濾血層400的面積可小于粘合其的雙面膠200的大小。

親水層600和濾血層400之間可以設(shè)有一雙面膠500。該雙面膠可以為U型雙面膠或方形雙面膠，并分別粘貼在濾血層400的上下兩端。需要說(shuō)明的是，親水層600和雙面膠400的U型口構(gòu)建的虹吸槽到達(dá)濾血層400。

優(yōu)選地，親水層600可以為親水膜或網(wǎng)紗。

以上未述及之處適用于現(xiàn)有技術(shù)。

實(shí)施例1

一種尿素氮的檢測(cè)試紙1，其制作方法包括以下步驟：

步驟一、在一定的硬度的PET材質(zhì)的反應(yīng)基層100貼上雙面膠200打通孔110后備用。

步驟二、撕掉反應(yīng)基層100上雙面膠200的油紙，將膜材料320粘貼在PET板的雙面膠200上，膜材料320需要完全覆蓋住PET基板上的通孔110。

步驟三、先配制檢測(cè)試劑310：包含50KU/L的脲酶、1.0g/L的海藻糖、20g/L顯色物質(zhì)、0.15g/L BSA、0.1g/L的氯化鈉。將配制好的檢測(cè)試劑310用點(diǎn)膠機(jī)滴加到膜材料320對(duì)應(yīng)通孔110處，每孔滴加量為6mg，滴完液的膜板放入烘道干燥，干燥溫度：37℃，干燥時(shí)間20min，得反應(yīng)層300。

步驟四、在反應(yīng)層300上貼上濾血膜，并將濾血膜完全覆蓋住反應(yīng)層300。

步驟五、再在濾血膜上圍繞通孔110貼上U型雙面膠，利用虹吸原理，用U型雙面膠和親水層600(親水膜或網(wǎng)紗)組成一個(gè)微量吸樣裝置，可以固定吸樣的量。

實(shí)施例2

本實(shí)施例尿素氮的檢測(cè)試紙1的制作方法中，檢測(cè)試劑310包含55KU/L的脲酶、1.2g/L的海藻糖、22g/L顯色物質(zhì)、0.20g/L BSA、0.12g/L的氯化鈉。其它步驟均同實(shí)施例1。

實(shí)施例3

本實(shí)施例尿素氮的檢測(cè)試紙1的制作方法中，檢測(cè)試劑310包含57.5KU/L的脲酶、1.3g/L的海藻糖、25g/L顯色物質(zhì)、0.15g/L BSA、0.13g/L的氯化鈉。其它步驟均同實(shí)施例1。

實(shí)施例4

本實(shí)施例尿素氮的檢測(cè)試紙1的制作方法中，檢測(cè)試劑310包含60KU/L的脲酶、1.4g/L的海藻糖、28g/L顯色物質(zhì)、0.15g/L BSA、0.14g/L的氯化鈉。其它步驟均同實(shí)施例1。

實(shí)施例5

本實(shí)施例尿素氮的檢測(cè)試紙1的制作方法中，檢測(cè)試劑310包含62.5KU/L的脲酶、1.5g/L的海藻糖、30g/L顯色物質(zhì)、0.15g/L BSA、0.15g/L的氯化鈉。其它步驟均同實(shí)施例1。

對(duì)比例

某醫(yī)院測(cè)試樣本。

評(píng)價(jià)方法：

將實(shí)施例5的尿素氮的檢測(cè)試紙1直接插入自制干式化學(xué)分析儀中，6分鐘后結(jié)果在儀器上顯示出來(lái)。表1為自制干式化學(xué)分析儀的測(cè)試結(jié)果跟對(duì)比例測(cè)試結(jié)果對(duì)比圖，其相關(guān)性達(dá)到0.998?？芍苯佑糜谂R床上測(cè)試。

表2、醫(yī)院測(cè)試樣品的測(cè)試結(jié)果與本發(fā)明尿素氮測(cè)試結(jié)果相比

本發(fā)明尿素氮的檢測(cè)試紙1具有以下優(yōu)勢(shì)：抗干擾能力更強(qiáng)，有效的消除了紅細(xì)胞及內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，并且能在6分鐘內(nèi)能準(zhǔn)確的測(cè)試全血的尿素氮的濃度，測(cè)試結(jié)果與傳統(tǒng)的方法相比測(cè)試結(jié)果更準(zhǔn)確。與公司自制的便攜式干式化學(xué)分析儀一起使用，更符合臨床旁邊的要求，適合醫(yī)院急診、病房、社區(qū)醫(yī)院、家庭用戶等使用。

由于本發(fā)明中所涉及的各工藝參數(shù)的數(shù)值范圍在上述實(shí)施例中不可能全部體現(xiàn)，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員完全可以想象到只要落入上述該數(shù)值范圍內(nèi)的任何數(shù)值均可實(shí)施本發(fā)明，當(dāng)然也包括若干項(xiàng)數(shù)值范圍內(nèi)具體值的任意組合。此處，出于篇幅的考慮，省略了給出某一項(xiàng)或多項(xiàng)數(shù)值范圍內(nèi)具體值的實(shí)施例，此不應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明的技術(shù)方案的公開不充分。

申請(qǐng)人聲明，本發(fā)明通過(guò)上述實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程才能實(shí)施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔料組分成分的添加、具體方式選擇等，落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。