一種快速檢測番鴨細(xì)小病毒抗體的試紙條的制作方法

本實用新型涉及一種檢測番鴨細(xì)小病毒抗體的器具，特別是涉及一種快速檢測番鴨細(xì)小病毒抗體的試紙條。

背景技術(shù)：

番鴨細(xì)小病毒病(Muscovy duck parvovirus Disease, MDPD)，是由番鴨細(xì)小病毒(Muscovy duck parvovirus, MDPV)引起的，以腹瀉、喘氣和軟腳為主要臨診癥狀的一種急性、敗血性傳染病，該病主要發(fā)生于3周齡以內(nèi)的番鴨，故又稱三周病，其主要臨床癥狀是呼吸困難、厭食、腹瀉、脫水及迅速消瘦。由于該病傳播快，發(fā)病率、死亡率都很高，給番鴨養(yǎng)殖造成重要經(jīng)濟(jì)損失。

番鴨細(xì)小病毒病最早于20世紀(jì)80年代中后期出現(xiàn)于我國福建和法國西部Brittany地區(qū)，現(xiàn)已廣泛分布。由于MDPV屬細(xì)小病毒，對環(huán)境抵抗力強(qiáng)，65℃加熱30min對其滴度無影響，對乙醚等有機(jī)溶劑不敏感，對胰酶和pH3穩(wěn)定，難于從環(huán)境中消除，極大影響了我國養(yǎng)鴨業(yè)的健康發(fā)展。

快速檢測MDPDV抗體，不僅可以評價疫苗免疫效果，而且可以輔助臨床診斷，是有效控制MDPD的前提。目前檢測MDPDV抗體的方法主要有瓊脂免疫擴(kuò)散試驗（AGP）、血清中和實驗、IFA和ELISA等方法。然而，AGP耗時長，血清中和實驗、IFA和ELISA等檢測技術(shù)操作復(fù)雜，需要昂貴的儀器設(shè)備、過程較長、耗時費(fèi)力，需要特定儀器設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員操作，很難在基層普及，不能滿足生產(chǎn)一線或疫病現(xiàn)場的快速檢測需要。因此，亟待有一種快速檢測禽番鴨細(xì)小病毒抗體的設(shè)備及技術(shù)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本實用新型的一個目的是提供一種快速檢測番鴨細(xì)小病毒抗體的試紙條，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。

本實用新型還有一個目的是提供一種結(jié)果顯示直觀、準(zhǔn)確、快速檢測MDPV抗體的試紙條，與其他檢測方法相比，該試紙條特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、結(jié)果顯示快速，檢測成本低廉。

本實用新型的技術(shù)方案具體為：

一種快速檢測番鴨細(xì)小病毒抗體的試紙條，包括支撐層，支撐層一端粘貼樣品吸附纖維層，另一端粘貼吸水層，在支撐層的吸附纖維層與吸水層之間的部分粘貼纖維素膜層與金標(biāo)纖維層，吸附纖維層、金標(biāo)纖維層、纖維素膜層、吸水層之間彼此拼接的交界處纖維互相交叉滲透，其特征在于：所述纖維素膜層上設(shè)有標(biāo)記包含以純化的番鴨細(xì)小病毒抗體的檢測印跡與包含以羊或兔抗番鴨細(xì)小病毒抗體的對照印跡，檢測印跡與對照印跡并列排列在纖維素膜層上，檢測印跡的位置靠近吸附纖維層；金標(biāo)纖維層為附著有膠體金標(biāo)記的番鴨細(xì)小病毒或膠體金標(biāo)記的重組番鴨細(xì)小病毒VP2蛋白的玻璃棉制成；本試紙條設(shè)有樣品吸附纖維層的一端為入水端，設(shè)有吸水層的一端為握持端，入水端外側(cè)覆蓋有白色的第一保護(hù)膜，握持端覆蓋有第二保護(hù)膜；在吸附纖維層和金標(biāo)纖維層交界處對應(yīng)的保護(hù)膜上偏向于樣品吸附纖維層一側(cè)0.5cm處印有印跡線；握持端設(shè)有便于握持的凹槽。

支撐層在入水端設(shè)為網(wǎng)格狀，其網(wǎng)孔的形狀為圓形、正方形、三角形、菱形、六邊形。

支撐層為以塑膠薄片條制成。

本實用新型至少包括以下有益效果：

（1）檢測特異性強(qiáng)，敏感性高。本實用新型提供的試紙條以膠體金標(biāo)番鴨細(xì)小病毒或金標(biāo)記的重組番鴨細(xì)小病毒VP2蛋白為基礎(chǔ)制備而成，金標(biāo)病毒中金顆粒與病毒蛋白分子之間無共價鍵形成，二者通過異性電荷間的范德華力相結(jié)合，膠體金標(biāo)對病毒蛋白的特異性和親和力影響很小，且具有較高的印跡率。

（2）操作簡便，快速。本實用新型的試紙條在使用時無需附加任何其它儀器和試劑，只要將其測試端插入待檢樣品液中30秒左右，5分鐘左右即可判定檢測結(jié)果。

（3）結(jié)果顯示直觀、準(zhǔn)確。本實用新型的試紙條以顯示棕紅色的檢測印跡和對照印跡作為檢測的陽性和陰性印跡，即在纖維素膜上顯示兩條棕紅色印跡，表示在被檢測樣品中有病毒抗體檢出，結(jié)果為陽性；在纖維素膜上只顯示一條棕紅色對照印跡C，表示在被檢測樣品液中未檢出病毒抗體，結(jié)果為陰性。結(jié)果判定直觀、準(zhǔn)確，簡單明了，不易出現(xiàn)假陰性和假陽性誤判。

（4）減少投資和檢測成本。本實用新型的試紙條在使用時，不需另配其它儀器、設(shè)備和試劑，節(jié)省大量儀器、設(shè)備和附加試劑費(fèi)用；專業(yè)和非專業(yè)人士均可隨時隨地進(jìn)行現(xiàn)場檢測，無需支付專家診斷檢查費(fèi)或送樣品去診斷室的路費(fèi)，節(jié)省檢測成本，檢測費(fèi)用低。

（5）應(yīng)用范圍廣，便于普遍推廣應(yīng)用。本實用新型提供的試紙條操作簡單，成“一步式”或“傻瓜式”，而且方便攜帶和保存，能滿足不同層次人員的需要，包括專業(yè)化驗、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、質(zhì)量監(jiān)測、畜產(chǎn)品加工、集約化養(yǎng)殖到個體養(yǎng)殖等，具有廣闊的市場前景和較好的經(jīng)濟(jì)、社會效益。

（6）本實用新型根據(jù)ELISA的基本原理，用免疫層析試紙檢測病毒抗體，利用微孔濾膜的滲濾濃縮和毛細(xì)管作用，將抗原-抗體反應(yīng)由ELISA的傳統(tǒng)液相環(huán)境轉(zhuǎn)到固相濾膜上快速進(jìn)行，并采用膠體金印跡代替酶印跡，憑肉眼直接觀察膠體金的顯色狀況，即時獲得檢測結(jié)果，因此該方法比ELISA等血清學(xué)方法更為簡便、快速。

附圖說明

圖1為本實用新型的剖面示意圖；

圖2為本實用新型的俯視示意圖；

圖3為支撐層的示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖對本實用新型做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。

如圖1與圖2，一種快速檢測番鴨細(xì)小病毒抗體的試紙條，包括支撐層1，支撐層1一端粘貼樣品吸附纖維層2，另一端粘貼吸水層5，在支撐層1的吸附纖維層2與吸水層5之間的部分粘貼纖維素膜層4與金標(biāo)纖維層3，吸附纖維層2、金標(biāo)纖維層3、纖維素膜層4、吸水層5之間彼此拼接的交界處纖維互相交叉滲透，在纖維素膜層4上設(shè)有標(biāo)記包含以純化的番鴨細(xì)小病毒抗體的檢測印跡6與包含以羊或兔抗番鴨細(xì)小病毒抗體的對照印跡7，檢測印跡6與對照印跡7并列排列在纖維素膜層上，檢測印跡6的位置靠近吸附纖維層，檢測印跡6的代號為C；對照印跡7的代號為T。

金標(biāo)纖維層3為附著有膠體金標(biāo)記的番鴨細(xì)小病毒或膠體金標(biāo)記的重組番鴨細(xì)小病毒VP2蛋白的玻璃棉制成。

本試紙條設(shè)有樣品吸附纖維層2的一端為入水端（也稱為測試端），設(shè)有吸水層5的一端為握持端，入水端外側(cè)覆蓋有白色的第一保護(hù)膜81，握持端覆蓋有其它顏色例如黃色的第二保護(hù)膜82。在吸附纖維層2和金標(biāo)纖維層3交界處對應(yīng)的保護(hù)膜上偏向于樣品吸附纖維層2一側(cè)0.5cm處印有印跡線9，印跡線的右端印有箭頭及MAX字樣。

事實上，即使設(shè)有不同顏色的保護(hù)膜，也可能會使檢測人員將入水端與握持端混淆，造成檢測事故。所以，在握持端設(shè)有便于握持的凹槽83或者凸起（圖中只畫了凹槽），凹槽83或者凸起標(biāo)記有大拇指形狀，這樣設(shè)置，既能方便檢測人員區(qū)分水端與握持端，也方便了握持，更符合人體工學(xué)。

如果為凹槽83，凹槽83向內(nèi)延伸到吸水層5或者支撐層1，方便握持。

如果為凸起，凸起可以為彈性材料，方便握持。

支撐層1為以塑膠薄片條制成。

如圖3，支撐層1在入水端設(shè)為網(wǎng)格狀，其網(wǎng)孔11的形狀為圓形、正方形、三角形、菱形、六邊形。正常的試紙條檢測時，吸水層5只有支撐層1的相對側(cè)可以吸水（溶液），而本實用新型的支撐層1的入水端為網(wǎng)格狀，可以使吸水層5在支撐層1的一側(cè)通過網(wǎng)孔11也能吸水，這樣以來，吸水層5可以兩面吸水，加快了吸水的速度，縮短了檢測所用的時間，提高了工作效率。

樣品吸附纖維層2為以玻璃棉制成。

纖維素膜層4為以硝酸纖維素膜制成的。

吸水層5為由吸水濾紙制成。

本實用新型的檢測操作方法

a 檢測樣品液的制備：無菌取被檢動物的血液，并分離血清，以生理鹽水作1: 200倍的稀釋血清，得到待測樣品；

b檢測操作：將該試紙條入水端插入待檢測樣品中，插入深度不超過印跡線，約30秒后取出試紙條，水平放置約1-5分鐘，同時觀察結(jié)果。

c結(jié)果判斷：如果在試紙條的纖維素膜上只顯示出一條棕紅色對照印跡C，表示測檢結(jié)果呈陰性，說明在被檢樣品液中未檢測出番鴨細(xì)小病毒抗體；如果試紙條上的纖維素膜出現(xiàn)棕紅色的對照印跡C和檢測印跡T，表示檢測結(jié)果呈陽性，即在待檢樣品中檢出番鴨細(xì)小病毒抗體；如果纖維素膜上沒有任何棕紅色印跡顯示，則表明試紙條已失效或操作有誤。

本實用新型的檢測原理：

當(dāng)試紙條測試端即吸附纖維層插入待檢測樣品溶液后，待檢溶液通過層析作用帶動待檢病番鴨細(xì)小病毒抗體及金標(biāo)纖維膜中的金標(biāo)抗原一起向纖維素膜擴(kuò)散，并最終滲入手柄端的吸水層中，擴(kuò)散過程中待檢病毒抗體可與該病毒抗體相對應(yīng)的金標(biāo)番鴨細(xì)小病毒或金標(biāo)重組番鴨細(xì)小病毒VP2蛋白相結(jié)合，進(jìn)而與纖維素膜上檢測印跡中的病毒結(jié)合，從而顯示出棕紅色的檢測印跡T；而對照印跡中的羊或兔抗番鴨細(xì)小病毒 IgG則可與金標(biāo)番鴨細(xì)小病毒或金標(biāo)重組番鴨細(xì)小病毒VP2蛋白結(jié)合，形成棕紅色對照印跡C。如果待檢樣品液中沒有MDPV抗體，試紙條只顯示出一條棕紅色對照印跡C；如果纖維素膜上沒有任何棕紅色印跡顯示，則表明試紙條已失效或操作失誤。