本發(fā)明涉及口腔醫(yī)療領(lǐng)域，涉及一種口腔拭子的檢測方法。
背景技術(shù)：
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口腔拭子是分子流行病學(xué)、遺傳學(xué)和法醫(yī)學(xué)研究中重要的核酸來源，其收集具有取樣簡便、安全、成本低、無創(chuàng)傷的優(yōu)點(diǎn)。低溫檢測對核酸的冷打擊使其在保存后不能取得理想的檢測效果，高溫檢測核酸又會使能量代謝加劇、細(xì)菌的繁殖速度加快，致使核酸在短時間內(nèi)就表現(xiàn)衰退死亡現(xiàn)象。經(jīng)過研究表明口腔拭子核酸最佳保存溫度在25℃—45℃，必須在此溫度下檢測，而現(xiàn)今的檢測方法效果不佳，因此，需要一種檢測方法能滿足常溫長時間的目的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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有鑒于此，本發(fā)明提供一種解決或部分解決上述問題的一種口腔拭子的檢測方法。
為達(dá)到上述技術(shù)方案的效果，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種口腔拭子的檢測方法，其特征在于，包含以下步驟：
取50份口腔拭子，進(jìn)行編號KJ001～KJ0050，具體檢測方法如下：
在檢測前將所有口腔拭子置于應(yīng)恢復(fù)至室溫的25-27℃下，并且輕輕地旋轉(zhuǎn)以及震蕩予以混合；
1)從密封袋中取出用抗體包被的酶標(biāo)板，在記錄紙上標(biāo)記樣品的位置；
2)在A2孔和B2孔內(nèi)各加入80μl未經(jīng)稀釋的陰性對照；
3)C2孔和D2孔內(nèi)各加入80μl未經(jīng)稀釋的陽性對照；
4)在剩余的孔內(nèi)分別加入80μl被檢樣品；
5)用蓋子蓋住酶標(biāo)板，在室溫的25-27℃下孵育40分鐘；
6)吸出(倒出)孔中的內(nèi)容物，用超純水洗3-5次，每孔加入350μl的超純水容量，最后一次超純水洗同時使用吸水紙，并輕輕拍打；
7)加80μl酶標(biāo)二抗到所述抗體包被的酶標(biāo)板的各孔中，用蓋子蓋住，在室溫的25-27℃下孵育80分鐘，加100μl底物試劑到所述抗體包被的酶標(biāo)板的各孔中，用蓋子蓋住，在室溫的25-27℃下孵育80分鐘；
8)加100μl終止液到所述抗體包被的酶標(biāo)板的各孔中，并終止反應(yīng)。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為操作簡單、考慮全面，在口腔拭子的檢測中，控制了保存的溫度區(qū)間及保存的時間長度，能更好地應(yīng)用到實(shí)際情況中。
具體實(shí)施方式.
為了使本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。應(yīng)當(dāng)說明的是，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明，能實(shí)現(xiàn)同樣功能的產(chǎn)品屬于等同替換和改進(jìn)，均包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體方法如下：
稀釋液是影響口腔拭子核酸常溫保存效果的關(guān)鍵因素，稀釋液的主要作用是：一方面用于擴(kuò)大核酸體積以滿足生產(chǎn)需求；另一方而保護(hù)核酸的功能特征。稀釋液中所含的各種成分對口腔拭子核酸的保護(hù)作用也各不相同，核酸需要產(chǎn)生能量以維持細(xì)胞代謝和自身運(yùn)動。葡萄糖不僅能為核酸提供能量，還可以維持稀釋液的滲透壓，在絕大多數(shù)配方中使用。過酸過堿的環(huán)境都不利于核酸生存，稀釋液中需要添加一定量的緩沖物質(zhì)以維持核酸pH。碳酸氫鈉或檸檬酸鈉常被用來調(diào)節(jié)稀釋液的pH，Tris和HEPES等緩沖劑的緩沖能力更強(qiáng)。EDTA
是一種螯合劑，能夠與稀釋液中的金屬離子尤其是Ca2+結(jié)合，減少進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的Ca2+，防止誘發(fā)核酸獲能和頂體反應(yīng)的發(fā)生，以達(dá)到抑制核酸活動，增加核酸保存時間的效果。一定濃度的+能維持核酸膜上Na+-K+泵運(yùn)轉(zhuǎn)，但必須保證核酸細(xì)胞內(nèi)的K+濃度高于細(xì)胞外的K濃度，這樣才能產(chǎn)生ATP維持核酸的存和運(yùn)動，因而稀釋液可添加適量的KC1。另外，稀釋液中添加抗生素可以抑制細(xì)菌的繁殖，主要的常用的抗生素有青霉素，慶大霉素等。但由于現(xiàn)代社會對于抗生素的濫用，使得很多細(xì)菌對于常用抗生素有著明顯的抗性，所以，新型的抗生素適用于口腔拭子核酸常溫保存的研究已經(jīng)迫在眉睫。
口腔拭子核酸單獨(dú)的保存，其中的有害微生物不僅會爭奪營養(yǎng)物質(zhì)，而且代謝產(chǎn)生的有毒代謝廢物會改變保存環(huán)境，嚴(yán)重影響保存效果。現(xiàn)存在的菌類有大腸桿菌、沙門氏菌、克雷伯菌、變形桿菌、和棒狀桿菌等。革蘭氏陰性菌為公豬精液中常見的菌類。因此在稀釋劑中添加對革蘭氏陰性菌有抑制效果的抗生素最佳。在稀釋液中添加慶大霉素來抑制細(xì)菌的生長，對細(xì)胞的不良作用小。在稀釋液中添加0.2mg/ml的聚維酮碘能夠殺死致病細(xì)菌，且對精液常溫保存質(zhì)量指標(biāo)無影響。有研究者在對不同來源的口腔拭子進(jìn)行細(xì)菌分離、鑒定、培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)時發(fā)現(xiàn)，檢出的五種細(xì)菌中，環(huán)丙沙星、氧氟沙星和諾氟沙星等奎若酮類藥物對其抑制效果較好，且發(fā)現(xiàn)變形桿菌、棒狀桿菌和沙門氏菌對青霉素和克林霉素具有耐藥性。比較了抗生素及組合對水牛精液中細(xì)菌的抑菌效果，結(jié)果顯示，青霉素、鏈霉素和慶大霉素全部具有抗菌圈，而泰樂菌素、林肯霉素、新霉素和大觀霉素有不同程度的耐藥現(xiàn)象。在抗生素組合方面慶泰林大的抗生素組合最佳。實(shí)際應(yīng)用中，抗生素的選擇會因稀釋劑成分的不同而不同。
以上所述僅為本發(fā)明之較佳實(shí)施例，并非用以限定本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍。同時以上說明，對于相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)可以理解及實(shí)施，因此其他基于本發(fā)明所揭示內(nèi)容所完成的等同改變，均應(yīng)包含在本權(quán)利要求書的涵蓋范圍內(nèi)。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為操作簡單、考慮全面，在口腔拭子的檢測中，控制了保存的溫度區(qū)間及保存的時間長度，能更好地應(yīng)用到實(shí)際情況中。