專利名稱：植物提取液中單寧含量的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹寧含量的檢測方法，具體涉及植物提取液中單寧含量的檢測方法。
背景技術(shù)：
單寧是多酚中高度聚合的化合物，含有許多酚羥基結(jié)構(gòu)，相對份子質(zhì)量為500 4000，可以和蛋白質(zhì)、生物堿、多糖及多種金屬離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、制革、日用化學(xué)品、水處理等領(lǐng)域。單寧具有較強的化學(xué)和生理活性，對生物體的影響具有雙重性，食物中的單寧過量會產(chǎn)生比如減少蛋白質(zhì)、維生素的有效吸收等抗營養(yǎng)的作用。因此，檢測食物中單寧的含量具有非常重要的意義。 目前，應(yīng)用于單寧檢測的方法主要有皮粉法、滴定法、干酪素法和比色法等傳統(tǒng)經(jīng)典方法及色譜法、熒光法和流動注射法等現(xiàn)代檢測方法，但這些檢測方法均具有缺陷，主要體現(xiàn)在以下幾個方面1、現(xiàn)有單寧檢測方法中，向待測檢測樣品中加入的物質(zhì)，容易與單寧份子量發(fā)生反應(yīng)，從而在計算待測樣品中單寧含量時，往往誤差會比較大，從而檢測結(jié)果不準確；2、整個檢測過程容易受外界溫度，待檢測樣品的選擇等其他因素的影響，檢測結(jié)果重復(fù)性差；3、檢測結(jié)果易受提取液中色素的影響；4、整個檢測過程操作繁瑣，耗時耗力；5、檢測需要大型儀器和專業(yè)的操作人員，對操作人員的要求較高，應(yīng)用范圍窄。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是如何提供一種簡單，且重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好的檢測植物提取液中單寧含量方法。解決該技術(shù)問題，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的植物提取液中單寧含量的檢測方法，具體步驟如下
步驟I :制備顯色液，將O. I mol/L的氯化鐵水溶液和O. 3mol/L的硫氰酸胺水溶液按照I :1的體積混合；
步驟2 :取單寧標準品溶于蒸餾水中得到濃度為O. 2mg/mL的單寧水溶液作為單寧標準溶液；
步驟3 :取I. OmL步驟2中的單寧標準溶液至最大刻度為IOml的容量瓶中，并往所述單寧標準溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度后搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計檢測加入所述顯色液、氫氧化鈉水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的光譜曲線，并確定在該范圍內(nèi)單寧標準溶液的最大吸收波長；
步驟4 :取步驟2中的單寧標準溶液O. O mL, O. 5 mL, I mL, I. 5 mL, 2. O mL, 2. 5 mL和
3.OmL分別置于7只最大刻度為IOmL的容量瓶中，往7只容量瓶中分別依次加入O. I O.5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至各個容器最大刻度得到7份單寧濃度c各不相同的混合溶液，分別將7份混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計檢測所述各份混合溶液對步驟3中確定的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長的吸光度A ;然后以各份混合溶液中單寧的濃度c為橫坐標，各份混合溶液對步驟3中確定的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長的吸光度A為縱坐標制圖，該圖作為單寧標準曲線；
步驟5 :取I. Oml待測單寧樣品溶液置于最大刻度為IOmL的容量瓶中，往所述待測單寧樣品溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度得到待測單寧樣品混合溶液，將待測單寧樣品混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min，以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計檢測單寧樣品溶液 對步驟3中確定的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長的吸光度A’ ；
步驟6 :根據(jù)式(I)計算待測單寧樣品溶液中單寧的含量
權(quán)利要求
1.植物提取液中單寧含量的檢測方法，其特征在于，具體步驟如下 步驟I :制備顯色液，將O. I mol/L的氯化鐵水溶液和O. 3mol/L的硫氰酸胺水溶液按照I :1的體積混合； 步驟2 :取單寧標準品溶于蒸餾水中得到濃度為O. 2mg/mL的單寧水溶液作為單寧標準溶液； 步驟3 :取I. OmL步驟2中的單寧標準溶液至最大刻度為IOml的容量瓶中，并往所述單寧標準溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度后搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計檢測加入所述顯色液、氫氧化鈉水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的光譜曲線，并確定在該范圍內(nèi)單寧標準溶液的最大吸收波長； 步驟4 :取步驟2中的單寧標準溶液O. O mL, O. 5 mL, I mL, I. 5 mL, 2. O mL, 2. 5 mL和.3.OmL分別置于7只最大刻度為IOmL的容量瓶中，往7只容量瓶中分別依次加入O. I .O.5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至各個容器最大刻度得到7份單寧濃度c各不相同的混合溶液，分別將7份混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min ;然后以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計檢測所述各份混合溶液對步驟3中確定的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長的吸光度A ;然后以各份混合溶液中單寧的濃度c為橫坐標，各份混合溶液對步驟3中確定的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長的吸光度A為縱坐標制圖，該圖作為單寧標準曲線； 步驟5 :取I. Oml待測單寧樣品溶液置于最大刻度為IOmL的容量瓶中，往所述待測單寧樣品溶液中依次加入O. I O. 5mL顯色液和O. 2 I. 2mL濃度為10_3mol/L的氫氧化鈉水溶液，再加入體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液至該容器的最大刻度得到待測單寧樣品混合溶液，將待測單寧樣品混合溶液搖勻，并室溫避光靜置10 20min，以體積比為70% 80%的二甲基甲酰胺水溶液為參比，用紫外-可見分光光度計檢測單寧樣品溶液對步驟3中確定的單寧標準溶液對波長在400 700nm范圍的光波的最大吸收波長的吸光度A’ ； 步驟6 :根據(jù)式(I)計算待測單寧樣品溶液中單寧的含量
全文摘要
本發(fā)明涉及植物提取液中單寧含量的檢測方法，該方法的步驟主要是制備顯色液；制備單寧標注溶液；確定單寧標準溶液對波長在400～700nm范圍的光波的最大吸收波長；制備單寧標準曲線，該標準曲線以各份混合溶液中單寧的濃度c為橫坐標，以各份混合溶液對前述最大吸收波長的吸光度A為縱坐標制圖；檢測待測單寧待測單寧樣品溶液對步驟3中確定的最大吸收波長的吸光度A’；通過公式計算待測單寧樣品溶液中單寧的含量。本方法的檢測結(jié)果受外界因素的干擾較小，且該方法的重現(xiàn)性好，對多種植物中單寧含量的檢測具有普遍性。
文檔編號G01N21/78GK102830114SQ20121029005
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月15日
發(fā)明者霍丹群, 張宿義, 周榮靈, 張良, 侯長軍, 蔡小波, 邱登榮 申請人:瀘州老窖股份有限公司, 重慶大學(xué)