專(zhuān)利名稱(chēng)：一種清開(kāi)靈注射液的定量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品的定量檢測(cè)方法，具體地說(shuō)是一種清開(kāi)靈注射液的定量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
清開(kāi)靈注射液為中藥制劑，其源于傳統(tǒng)名貴中成藥"溫病三寶"之一的安宮牛黃丸，由膽酸、珍珠母(粉)、豬去氧膽酸、桅子、水牛角(粉)、板藍(lán)根、黃芩苷、金銀花等八味藥組成，主要功效是清熱解毒、化痰通絡(luò)、醒神開(kāi)竅，臨床上廣泛用于急性肝炎、上呼吸道感染、病毒性肺炎等疾病的治療。目前對(duì)于清開(kāi)靈注射液的定量檢測(cè)是通過(guò)測(cè)定總氮來(lái)控制清開(kāi)靈注射液中的氨基酸成分(詳見(jiàn)中國(guó)藥典2010年版一部收載的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn))。該方法僅對(duì)總氮進(jìn)行控制，然而總氮含量高并不意味著氨基酸含量高。為解決這一問(wèn)題，有研究者采用氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)其中的氨基酸進(jìn)行測(cè)定，但氨基酸自動(dòng)分析儀價(jià)格昂貴、分析時(shí)間長(zhǎng)。由于清開(kāi)靈注射液為中藥制劑，亦屬于高安全風(fēng)險(xiǎn)品種范疇。如何能夠快速、準(zhǔn)確地本對(duì)清開(kāi)靈注射液有效成分的含量進(jìn)行測(cè)定，是本領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是要提供一種能夠快速、準(zhǔn)確地對(duì)清開(kāi)靈注射液有效成分的含量進(jìn)行測(cè)定的方法。本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明所提供的清開(kāi)靈注射液的定量檢測(cè)方法是用高效液相色譜法測(cè)定清開(kāi)靈注射液中氨基酸的含量，其中(a)色譜條件氨基酸分析柱，流動(dòng)相A為40mmol/L Na2HPO4溶液，流動(dòng)相B為按照體積比為45 45 10的乙腈-甲醇-水；流速為每分鐘2. Oml ；梯度洗脫0 1. 9min, 100 % A 相，18. 1 18. 5min，43 % A 相 +57 % B 相，18. 6 22. 3min, 100 % B 相，23. 2 26min，100% A 相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 338nm 和 262nm,柱溫 40°C ；(b)被測(cè)樣品溶液精密量取清開(kāi)靈注射液1ml，置IOml量瓶中，加水稀釋至刻度；(c)對(duì)照品溶液稱(chēng)取谷氨酰胺、天門(mén)冬酰胺、色氨酸、正纈氨酸、肌氨酸、羥脯氨酸六種補(bǔ)充氨基酸各0. 25mmol，置IOml量瓶中，加純化水稀釋至刻度，振搖使溶解，得補(bǔ)充氨基酸儲(chǔ)備液；取20 μ 1補(bǔ)充氨基酸儲(chǔ)備液加入2mll7種氨基酸溶液中混合，即得濃度約 250pmol/y 1的混合氨基酸對(duì)照品溶液；(d)測(cè)定法分別取被測(cè)樣品溶液、鄰苯二甲醛、9-芴甲基氯甲酸酯各0. 5μ 1、硼酸緩沖液2.5 μ 1、混勻lmin，置自動(dòng)進(jìn)樣瓶中，自動(dòng)進(jìn)樣測(cè)定；記錄對(duì)照品、被測(cè)樣品的色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。本發(fā)明通過(guò)上述技術(shù)方案可以對(duì)清開(kāi)靈注射液中的總氨基酸和主要氨基酸(谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸和甘氨酸)進(jìn)行了定量檢測(cè)，由此保證總氨基酸和六種主要氨基酸的含量限度，提高了清開(kāi)靈注射液的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而確保了清開(kāi)靈注射液質(zhì)量的穩(wěn)定性。本發(fā)明方法同時(shí)具有重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、使用方便、操作簡(jiǎn)便快捷等特點(diǎn)。
圖1是對(duì)照品的色譜圖。圖2是被測(cè)樣品的色譜圖。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例1測(cè)定10個(gè)批次清開(kāi)靈注射液中的氨基酸含量材料與試劑1.1 儀器安捷倫1200高效液相色譜儀梅特勒-托利多AB^5_S電子天平梅特勒-托利多Delta320酸度計(jì)1.2樣品與試劑清開(kāi)靈注射液(神威藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的10個(gè)批次的產(chǎn)品)；17種混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液(天門(mén)冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、 胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴(lài)氨酸、脯氨酸；安捷倫科技有限公司，250ρπιΟ1/μ1)；谷氨酰胺、天門(mén)冬酰胺、色氨酸、正纈氨酸、肌氨酸、羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品(安捷倫科技有限公司，lg) ,NaH2PO4 ·Η20(分析純),NaOH(分析純)，乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，硼酸鹽緩沖液(安捷倫科技有限公司，PH10. 2)，鄰苯二甲醛(0ΡΑ，安捷倫科技有限公司)，9_芴甲基氯甲酸酯(FM0C，安捷倫科技有限公司)，純化水。2、色譜條件色譜柱Z0RBAXEclipse-AAA (4. 6 X 150mm，5 μ m)流動(dòng)相A :40mmol/L Na2HPO4 溶液(ρΗ7· 8，取 NaH2PO4 · H2O 5. 5g)，流動(dòng)相 B 為乙腈-甲醇-水G5 45 10)；流速為每分鐘2.0ml ；按下表進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為 338nm(適用于OPA-氨基酸)和適用于FMOC-氨基酸)，柱溫40°C。
權(quán)利要求
1.一種清開(kāi)靈注射液的定量檢測(cè)方法，其特征在于用高效液相色譜法測(cè)定清開(kāi)靈注射液中的氨基酸的含量，其中(a)色譜條件氨基酸分析柱，流動(dòng)相A為40mmol/LNa2HPO4溶液，流動(dòng)相B為按照體積比為45 45 10的乙腈-甲醇-水；流速為每分鐘2.0ml ；梯度洗脫0 1.9min，100% A 相，18. 1 18. 5min，43 % A 相 +57 % B 相，18. 6 22. 3min, 100 % B 相，23. 2 26min, 100% A相；檢測(cè)波長(zhǎng)為338nm和262nm,柱溫40°C ；(b)被測(cè)樣品溶液精密量取清開(kāi)靈注射液1ml，置IOml量瓶中，加水稀釋至刻度；(c)對(duì)照品溶液稱(chēng)取谷氨酰胺、天門(mén)冬酰胺、色氨酸、正纈氨酸、肌氨酸、羥脯氨酸六種補(bǔ)充氨基酸各0. 25mmol，置IOml量瓶中，加純化水稀釋至刻度，振搖使溶解，得補(bǔ)充氨基酸儲(chǔ)備液；取20 μ 1補(bǔ)充氨基酸儲(chǔ)備液加入aiil 17種氨基酸溶液中混合，即得濃度約 250pmol/y 1的混合氨基酸對(duì)照品溶液；(d)測(cè)定法分別取被測(cè)樣品溶液、鄰苯二甲醛、9-芴甲基氯甲酸酯各0.5 μ 1、硼酸緩沖液2.5 μ 1，置自動(dòng)進(jìn)樣瓶中，自動(dòng)進(jìn)樣測(cè)定；記錄對(duì)照品、被測(cè)樣品的色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清開(kāi)靈注射液的定量檢測(cè)方法，其特征在于所說(shuō)的自動(dòng)進(jìn)樣的程序?yàn)?1)從硼酸鹽緩沖液中吸取2.5 μ 1，吸取0. 5 μ 1樣品；(2)“在空氣中”混合3μ1，最大速度，2次；(3)等待0.5分鐘；(4)從未加蓋的水瓶中吸取0μ1，清洗針頭；(5)從磷苯二甲醛瓶中吸取0.5μ1 ；(6)“在空氣中”混合3μ1，最大速度，6次；(7)從未加蓋的水瓶中吸取Ομ1，清洗針頭；(8)從9-芴甲基氯甲酸酯瓶中吸取0.5μ1 ；(9)“在空氣中”混合4μ1，最大速度，6次；(10)從水瓶中吸取32μ 1 ；(11)“在空氣中”混合18μ1，最大速度，2次；(12)進(jìn)樣。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種清開(kāi)靈注射液的定量檢測(cè)方法，其是用高效液相色譜法測(cè)定清開(kāi)靈注射液中氨基酸的含量，其中(a)色譜條件為氨基酸分析柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為338nm和262nm，柱溫40℃；(b)被測(cè)品溶液清開(kāi)靈注射液；(c)對(duì)照品溶液六種補(bǔ)充氨基酸、17種氨基酸溶液中；(d)測(cè)定法分別取被測(cè)品溶液、磷苯二甲醛、9-芴甲基氯甲酸酯各0.5μl、硼酸緩沖液2.5μl、混勻1min，置自動(dòng)進(jìn)樣瓶中，自動(dòng)進(jìn)樣測(cè)定。本發(fā)明通過(guò)上述技術(shù)方案可以對(duì)清開(kāi)靈注射液中的總氨基酸和主要氨基酸進(jìn)行了定量控制，由此保證總氨基酸和六種主要氨基酸的含量限度，提高了清開(kāi)靈注射液的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而確保了清開(kāi)靈注射液質(zhì)量的穩(wěn)定性。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102288704SQ20111023168
公開(kāi)日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月10日
發(fā)明者姜海, 張綱 申請(qǐng)人:河北神威藥業(yè)有限公司